左 蓓, 刑 敏， 孫珍貴， 汪向海， 陳興無

(皖南醫(yī)學(xué)院弋磯山醫(yī)院呼吸內(nèi)科，安徽 蕪湖 241001)

惡性胸腔積液(malignantpleuralefusion，MPE)最常見病因?yàn)榉伟?，其是非小?xì)胞肺癌(non-smallcelllungcancer,NSCLC)患者預(yù)后不良的標(biāo)志，目前尚無根治方法。癌細(xì)胞胸膜轉(zhuǎn)移是MPE形成的主要原因，而轉(zhuǎn)移的初始步驟是癌細(xì)胞遷移和侵襲。腫瘤微環(huán)境信號分子對癌細(xì)胞的遷移特性產(chǎn)生重要影響，MPE內(nèi)富含多種細(xì)胞因子、趨化因子和生長因子等復(fù)雜成分，對維持癌細(xì)胞的生長、遷移和侵襲有十分重要的意義。

小窩蛋白-1(caveolin-1,Cav-1)是細(xì)胞質(zhì)膜微囊主要結(jié)構(gòu)蛋白，通過調(diào)節(jié)細(xì)胞生長分化和增殖侵襲而與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。Davidson等[1]觀察卵巢癌及原發(fā)性腹膜癌并發(fā)胸腹腔積液中癌細(xì)胞及腫瘤原發(fā)灶Cav-1的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)胸腹水中癌細(xì)胞無論細(xì)胞膜還是細(xì)胞質(zhì)Cav-1表達(dá)陽性率明顯高于腫瘤原發(fā)灶中癌細(xì)胞相應(yīng)部位Cav-1陽性率。肺癌組織中Cav-1表達(dá)下降，表現(xiàn)為抑癌作用。但在不同分期的肺癌，其表達(dá)存在差異。免疫組化分析NSCLC患者術(shù)后癌組織，發(fā)現(xiàn)幾乎所有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的標(biāo)本Cav-1表達(dá)量很少，而在局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的標(biāo)本，Cav-1表達(dá)顯著增加，提示Cav-1可能促進(jìn)NSCLC細(xì)胞淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移[2]。目前認(rèn)為肺癌患者Cav-1表達(dá)水平與轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng)和短生存期有關(guān)[3]。但胰腺癌和乳腺癌Cav-1過表達(dá)則抑制癌細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)[4]。因此，Cav-1在癌細(xì)胞遷移和轉(zhuǎn)移包括漿膜腔轉(zhuǎn)移中的作用及其生成調(diào)節(jié)仍不清楚，可能呈細(xì)胞依賴性。最近研究發(fā)現(xiàn)Cav-1在腫瘤組織中的表達(dá)與腫瘤缺氧微環(huán)境密切相關(guān)，Cav-1可能作為缺氧誘導(dǎo)因子(hypoxia-induciblefactor,HIF)-1α的下游基因在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用[5]。

我們推測Cav-1在MPE中表達(dá)升高參與MPE發(fā)生，其生成可能與低氧環(huán)境誘導(dǎo)的HIF-1α生成有關(guān)。本研究比較肺癌及結(jié)核性胸膜炎患者胸腔積液中Cav-1和HIF-1α表達(dá)水平及兩者相關(guān)性并以不同濃度二氯化鈷(CoCl2)作用于肺腺癌A549細(xì)胞誘導(dǎo)細(xì)胞缺氧，探討低氧誘導(dǎo)生成的Cav-1對A549細(xì)胞遷移和侵襲的影響及HIF-1α對Cav-1生成的調(diào)節(jié)。

材 料 和 方 法

1 臨床病例資料

選擇皖南醫(yī)學(xué)院弋磯山醫(yī)院呼吸內(nèi)科2011年7月～2012年7月間確診為肺癌合并胸水的住院患者(MPE組)52例(男38例，女14例)，平均年齡(62.33±11.91)歲、結(jié)核性胸水患者(TBPE組)25例(男17例、女8例)，平均年齡(38.54±16.14)歲，所有患者簽知情同意書。MPE診斷標(biāo)準(zhǔn)：(1) 患者影像學(xué)符合原發(fā)性支氣管肺癌合并胸腔積液；(2) 胸腔積液中找到肺癌細(xì)胞和(或)胸膜活檢標(biāo)本病理學(xué)確診為肺癌；TBPE診斷標(biāo)準(zhǔn)：胸水為滲出液，腺苷脫氨酶(adenosine deaminase, ADA)>40 IU/L，胸膜活檢示結(jié)核性肉芽腫[6]。

2 胸水采集和存儲

收集患者入院后第1次經(jīng)胸腔穿刺抽取的胸水20 mL，經(jīng)3 000 r/min離心分離，留取上清等份分裝于離心管、-20 ℃凍存?zhèn)溆谩?/p>

3 A549細(xì)胞的培養(yǎng)與處理

人肺腺癌細(xì)胞株A549細(xì)胞(中科院細(xì)胞庫)常規(guī)培養(yǎng)于含10%胎牛血清(杭州四季清公司)的RPMI-1640培養(yǎng)基中，于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。以不同濃度的CoCl2(0、100、200、400、800 μmol/L，Sigma)作用A549細(xì)胞24 h；在另一實(shí)驗(yàn)中，以200 μmol/L CoCl2作用細(xì)胞6、12、24、48 h。為觀察HIF-1α對Cav-1生成的影響，以200 μmol/L CoCl2作用A549細(xì)胞(培養(yǎng)液含0.1% DMSO)或同時(shí)加入HIF-1α抑制劑YC-1(10或100 μmol/L，Sigma)培養(yǎng)細(xì)胞24 h,培養(yǎng)結(jié)束后取細(xì)胞上清，3 000 r/min離心，留取上清-20 ℃保存。

4 主要方法

4.1MTT檢測CoCl2對肺腺癌A549細(xì)胞存活及生長狀態(tài)的影響 取對數(shù)生長期細(xì)胞，將A549細(xì)胞以1×108/L接種于96孔板；細(xì)胞貼壁后加入含不同濃度CoCl2(0、100、200、400、800 μmol/L)的無血清培養(yǎng)液培養(yǎng)12、24、48 h，每組設(shè)6復(fù)孔；每孔加入20 μL MTT溶液(5 g/L，Sigma)，繼續(xù)培養(yǎng)4 h；加入150 μL DMSO，于全自動(dòng)酶標(biāo)儀549 nm處測定吸光度值(A)。根據(jù)A值繪制細(xì)胞生長曲線，并計(jì)算細(xì)胞生長抑制率(IR)。IR=[1-(A實(shí)驗(yàn)孔值/A陰性對照孔值)]×100%，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，取平均值。

4.2細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn) 將A549細(xì)胞以1×108/L的密度接種于24孔培養(yǎng)板，待細(xì)胞完全融合后，無血清培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)24h。用10μL加樣槍槍頭尖端在細(xì)胞板上劃痕，PBS漂洗2次，每孔加入400μL含不同濃度CoCl2(0、100、200μmol/L)的無血清培養(yǎng)液，另選200μmol/LCoCl2分別以加入10或100μmol/LYC-1(溶于0.1%DMSO)，以200μmol/LCoCl2+0.1%DMSO作為對照。分別于0h、24h在倒置相差顯微鏡下觀察、拍照。

4.3Transwell小室遷移實(shí)驗(yàn) 將A549細(xì)胞以1×108/L接種于Transwell上室(Corning)，培養(yǎng)24 h后，下室加入500 μL含YC-1和/或CoCl2的無血清培養(yǎng)液，實(shí)驗(yàn)按如下分組：0、100、200 μmol/L CoCl2組、200 μmol/L CoCl2+YC-1(10、100 μmol/L)組，對照組200 μmol/L CoCl2+0.1% DMSO；培養(yǎng)24 h。取出Transwell小室，棄培養(yǎng)液，甲醇固定20 min，將小室適當(dāng)風(fēng)干，0.1%結(jié)晶紫染色20 min；自來水洗3遍，棉簽擦盡上室面細(xì)胞，光學(xué)顯微鏡下隨機(jī)選取3個(gè)視野，計(jì)數(shù)小室下室面的細(xì)胞數(shù)，每組設(shè)3復(fù)孔，取平均值。

4.4Transwell細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn) 方法與4.3項(xiàng)類似，只是侵襲小室的上室面濾膜用5g/LMatrigel基質(zhì)膠(北京威格拉斯生物技術(shù)有限公司)100μL覆蓋，風(fēng)干后用于實(shí)驗(yàn)。

4.5胸水和細(xì)胞上清Cav-1、HIF-1α濃度的檢測 ELISA法測定Cav-1、HIF-1α濃度，操作步驟參照試劑盒(上海豪森生物科技有限公司)說明書進(jìn)行。檢測靈敏度下限為1.0 ng/L。

5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，組內(nèi)兩兩比較均采用q檢驗(yàn)，2組間均數(shù)比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，雙變量相關(guān)分析采用Pearson相關(guān)性分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 2組患者胸水中Cav-1、HIF-1α濃度比較及相關(guān)性分析

MPE組和TBPE組胸水中Cav-1濃度分別為(95.22±7.94)ng/L、(51.29±5.03)ng/L，HIF-1α濃度分別為(126.92±6.17)ng/L、(96.76±7.20)ng/L；MPE組均明顯高于TBPE組(P<0.05),見圖1；此外，MPE及TBPE中Cav-1與HIF-1α顯著正相關(guān)(R=0.8990和0.6560，P<0.01),見圖2。

Figure 1. Comparison of Cav-1 and HIF-1α levels in the pleural effusion of patients.Mean±SD.n=3.*P<0.05 vs TBPE.

Figure 2. Correlation between Cav-1 and HIF-1α in the pleural effusion of patients.

2 CoCl2對肺腺癌A549細(xì)胞增殖的影響

分別以不同濃度CoCl2作用A549細(xì)胞12、24、48 h，由圖2可見，低濃度CoCl2(<200 μmol/L)短時(shí)間(<24 h)誘導(dǎo)的缺氧對A549細(xì)胞增殖無明顯抑制作用，而隨著CoCl2濃度增加和作用時(shí)間延長，A549細(xì)胞增殖呈現(xiàn)時(shí)間和劑量依賴性抑制,見圖3。

3 CoCl2影響A549細(xì)胞Cav-1、HIF-1α生成的量效關(guān)系及兩者相關(guān)性

分別以不同濃度CoCl2作用于細(xì)胞24 h，作用濃度小于200 μmol/L時(shí)，隨濃度增加HIF-1α和Cav-1水平上升，作用濃度大于200 μmol/L則誘導(dǎo)兩者生成的作用減弱；各組Cav-1表達(dá)和HIF-1α呈正相關(guān)(P<0.05)。以200 μmol/L CoCl2分別作用于A549細(xì)胞6 h、12 h、24 h和48 h，隨缺氧時(shí)間延長，Cav-1和HIF-1α濃度升高，至24 h達(dá)峰值，24 h后兩者濃度均下降。YC-1濃度依賴性抑制CoCl2(200 μmol/L)誘導(dǎo)的HIF-1α和Cav-1水平(P<0.05),見圖4。

Figure 3. The effects of CoCl2 on A549 cells proliferation.Mean±SD.n=3.*P<0.05 vs control (0 μmol/L).

Figure 4. The effects of CoCl2 and/or YC-1 on Cav-1 and HIF-1α generation in A549 cells.Mean±SD.n=3.*P<0.05 vs 0 μmol/L; #P<0.05 vs 6 h; △P<0.05 vs CoCl2 alone.

4 CoCl2對A549細(xì)胞遷移能力的影響

細(xì)胞劃痕后以不同濃度(0～200 μmol/L) CoCl2或同時(shí)加入10、100 μmol/L YC-1作用24 h，隨著CoCl2濃度增高，促進(jìn)細(xì)胞向損傷區(qū)域遷移，200 μmol/L CoCl2作用最明顯，YC-1濃度依賴性抑制損傷區(qū)域細(xì)胞遷移,見圖5。

Figure 5. The effects of CoCl2 and/or YC-1 on A549 cells migration (×200). A: control (0 μmol/L CoCl2); B: 100 μmol/L CoCl2; C: 200 μmol/L CoCl2; D: 200 μmol/L CoCl2+0.1% DMSO; E: 200 μmol/L CoCl2+10 μmol/L YC-1; F: 200 μmol/L CoCl2+100 μmol/L YC-1.

隨著CoCl2濃度增高，穿過微孔膜的細(xì)胞數(shù)越多，200 μmol/L CoCl2最明顯，YC-1濃度依賴性抑制細(xì)胞穿過微孔膜；鏡下計(jì)數(shù)各組穿過Transwell小室的細(xì)胞每個(gè)視野個(gè)數(shù)分別為(63.0±2.9)、(110.0±3.8)、(220.0±10.3)、(144.0±5.1)、(74.0±3.0)，加YC-1后穿過的細(xì)胞數(shù)較對照組明顯減少(P<0.05),見圖6。

Figure 6. The effects of CoCl2 on A549 cells migration by Transwell assay (×200).Mean±SD.n=3. A: control (0 μmol/L CoCl2); B: 100 μmol/L CoCl2; C: 200 μmol/L CoCl2; D: 200 μmol/L CoCl2+0.1% DMSO; E: 200 μmol/L CoCl2+10 μmol/L YC-1; F: 200 μmol/L CoCl2+100 μmol/L YC-1.*P<0.05 vs control; #P<0.05 vs 200 μmol/L CoCl2+0.1% DMSO.

5 CoCl2對A549細(xì)胞體外侵襲的影響

分別以0～200 μmol/L CoCl2或同時(shí)加入10、100 μmol/L YC-1作用于A549細(xì)胞24 h，發(fā)現(xiàn)與上述類似的現(xiàn)象,光鏡下計(jì)數(shù)穿過聚碳酸酯膜的細(xì)胞每個(gè)視野的平均個(gè)數(shù)分別為57.0±5.5、96.0±7.9、197.0±12.7、135.0±8.9和63.0±9.3；隨著CoCl2濃度增高，細(xì)胞侵襲數(shù)增多，200 μmol/L刺激作用最明顯；YC-1抑制細(xì)胞侵襲并呈濃度依賴性,見圖7。

Figure 7. The effects of CoCl2 on the invasion of A549 cells (×200).Mean±SD.n=3. A: control (0 μmol/L CoCl2); B: 100 μmol/L CoCl2; C: 200 μmol/L CoCl2; D: 200 μmol/L CoCl2+0.1% DMSO; E: 200 μmol/L CoCl2+10 μmol/L YC-1; F: 200 μmol/L CoCl2+100 μmol/L YC-1. *P<0.05 vs control; #P<0.05 vs 200 μmol/L CoCl2+0.1% DMSO.

討 論

本研究中，我們檢測了肺癌合并MPE與結(jié)核性胸水中Cav-1、HIF-1α水平，發(fā)現(xiàn)肺癌合并MPE中Cav-1、HIF-1α濃度均較結(jié)核性胸水升高，并且Cav-1與HIF-1α呈正相關(guān)。先前的研究也發(fā)現(xiàn)，肺癌合并MPE患者胸水中HIF-1α表達(dá)升高，免疫組化和免疫熒光分析肺癌組織中惡性程度高、侵襲性強(qiáng)和轉(zhuǎn)移早的小細(xì)胞肺癌HIF-1α的表達(dá)強(qiáng)度顯著高于鱗狀細(xì)胞癌及腺癌；淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移組HIF-1α的表達(dá)強(qiáng)度顯著高于淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移組[7]?？紤]Cav-1和HIF-1α共同在肺癌胸膜轉(zhuǎn)移中起作用或互為上下游調(diào)節(jié)基因而發(fā)揮作用，推測MPE中高表達(dá)的Cav-1、HIF-1α可能與MPE的形成有關(guān)。

缺氧是惡性腫瘤最重要的病理特征，CoCl2常用于體外誘導(dǎo)細(xì)胞缺氧，其刺激的低氧特征類似于體內(nèi)低氧微環(huán)境[8]。體外模擬缺氧的直接表現(xiàn)是HIF-1α蓄積增加，研究顯示，CoCl2刺激HIF-1α表達(dá)在一定范圍內(nèi)具有時(shí)間和劑量相關(guān)性，延長作用時(shí)間或加大濃度并不增加HIF-1α的水平。

與缺氧密切相關(guān)的另一蛋白成分Cav-1是一個(gè)頗受爭議的蛋白，在不同腫瘤細(xì)胞及不同發(fā)展階段顯示抑制或促進(jìn)腫瘤發(fā)展的作用，在多數(shù)癌組織及腫瘤細(xì)胞系如肺癌[9]中Cav-1表達(dá)下降，并且Cav-1的重新表達(dá)會抑制癌細(xì)胞生長及癌細(xì)胞集落的形成，因此認(rèn)為Cav-1對細(xì)胞惡變有抑制作用。已證實(shí)Cav-1與癌細(xì)胞運(yùn)動(dòng)和腫瘤進(jìn)展有關(guān)，在胰腺癌細(xì)胞，Cav-1通過失活RhoC GTP酶和ERK-金屬蛋白酶的信號通路抑制細(xì)胞遷移和侵襲[4,10]。類似的抑制作用見于乳腺癌MTLn3和MCF-7細(xì)胞。然而，Cav-1在肺癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用，目前報(bào)道并不一致，Yeh等[11]將野生型Cav-1基因轉(zhuǎn)染入小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系NCI-H446中，發(fā)現(xiàn)Cav-1調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)基因E-Cadherin和MMP-3表達(dá)及MMP-3酶活性促進(jìn)NCI-H446體外運(yùn)動(dòng)和侵襲能力。相反，Zhang等[12]將Cav-1的siRNA轉(zhuǎn)染到小鼠Lewis肺癌細(xì)胞系P29后ERK1/2和Akt信號通路激活，細(xì)胞增殖和運(yùn)動(dòng)能力明顯增強(qiáng)。因此，Cav-1在肺癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移中的確切作用和調(diào)控機(jī)制仍不清楚。另一方面,盡管Cav-1的表達(dá)差異可能受癌細(xì)胞類型和分期影響, 腫瘤微環(huán)境低氧環(huán)境可能發(fā)揮關(guān)鍵作用。

為進(jìn)一步探討Cav-1在肺癌細(xì)胞胸膜侵襲過程中的作用及其生成與HIF-1α的關(guān)系，本研究以CoCl2作為細(xì)胞缺氧微環(huán)境誘導(dǎo)劑，觀察后者是否影響Cav-1、HIF-1α生成進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞遷移和侵襲。首先觀察了CoCl2對細(xì)胞活力的影響情況，發(fā)現(xiàn)較低濃度(<200 μmol/L)或作用時(shí)間少于24 h時(shí)CoCl2對細(xì)胞活力影響較小，增加濃度或延長處理時(shí)間明顯降低細(xì)胞活力。其次，我們發(fā)現(xiàn)一定濃度范圍(<200 μmol/L)和作用時(shí)間(<24 h)內(nèi)CoCl2促進(jìn)Cav-1和HIF-1α表達(dá)存在時(shí)效和量效關(guān)系，高濃度(400 μmol/L)或延長處理時(shí)間，兩者表達(dá)逐漸下調(diào)；這種情況可能與高濃度CoCl2對細(xì)胞的毒性作用或長時(shí)間缺氧引起負(fù)反饋效應(yīng)有關(guān)。此外，CoCl2誘導(dǎo)Cav-1和HIF-1α生成過程中，兩者濃度高度正相關(guān)，而同時(shí)應(yīng)用HIF-1α抑制劑YC-1劑量依賴性抑制CoCl2誘導(dǎo)的HIF-1α和Cav-1；上述結(jié)果雖然不能直接說明兩者的相互作用關(guān)系，也不清楚Cav-1和HIF-1α互相調(diào)節(jié)的具體機(jī)制，但結(jié)合兩者與低氧的密切關(guān)系及既往研究[5]，提示HIF-1α可能作為Cav-1的上游調(diào)節(jié)因子影響Cav-1表達(dá)。

細(xì)胞侵襲是癌癥進(jìn)展的一個(gè)重要方面，低氧條件下癌細(xì)胞表現(xiàn)更高的遷移和侵襲能力。在闡述了CoCl2促進(jìn)Cav-1和HIF-1α生成的量效和時(shí)效關(guān)系基礎(chǔ)上，通過細(xì)胞劃痕及Transwell小室遷移實(shí)驗(yàn)均觀察到一定濃度范圍(<200 μmol/L)內(nèi)的缺氧誘導(dǎo)劑CoCl2濃度依賴性增強(qiáng)A549細(xì)胞遷移，HIF-1α抑制劑YC-1減弱該誘導(dǎo)作用；同樣，體外侵襲實(shí)驗(yàn)得到類似結(jié)果，這從一定意義上提示CoCl2誘導(dǎo)生成的Cav-1和/或HIF-1α上調(diào)生成的Cav-1與肺癌細(xì)胞某些惡性生物學(xué)特性有關(guān)，可以從黏附、遷移和侵襲環(huán)節(jié)促進(jìn)A549細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力。

總之，本研究結(jié)果初步提示Cav-1促進(jìn)肺癌細(xì)胞株A549黏附、遷移和侵襲的作用，也提示其在肺癌并發(fā)MPE形成過程中起重要作用，我們的結(jié)果還提示HIF-1α在腫瘤細(xì)胞運(yùn)動(dòng)和Cav-1表達(dá)中有重要作用, 這可能對闡明肺癌發(fā)展及其胸膜轉(zhuǎn)移具有重要意義。但Cav-1如何介導(dǎo)肺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移至胸膜腔及MPE中癌細(xì)胞表達(dá)Cav-1的機(jī)制目前尚不清楚，對其進(jìn)行研究可能有助于開發(fā)肺癌相關(guān)MPE的治療策略。

[參 考 文 獻(xiàn)]

[1]DavidsonB,GoldbergI,Givant-HorwitzV,etal.Caveolin-1expressioninovariancarcinomaisMDR1independent[J].AmJClinPathol, 2002, 117(2):225-234.

[2] Zhan P, Shen XK, Qian Q, et al. Expression of caveolin-1 is correlated with disease stage and survival in lung adenocarcinomas[J]. Oncol Rep, 2012, 27(4):1072-1078.

[3]SotgiaF,Martinez-OutschoornUE,HowellA,etal.Caveolin-1andcancermetabolisminthetumormicroenvironment:markers,models,andmechanisms[J].AnnuRevPathol, 2012, 7:423-467.

[4] Han F, Zhu HG. Caveolin-1 regulating the invasion and expression of matrix metalloproteinase (MMPs) in pancreatic carcinoma cells[J]. J Surg Res, 2010, 159(1):443-450.

[5]WangY,RocheO,XuC,etal.Hypoxiapromotesligand-independentEGFreceptorsignalingviahypoxia-induciblefactor-mediatedupregulationofcaveolin-1[J].ProcNatlAcadSciUSA, 2012, 109(13):4892-4897.

[6] Light RW. Update on tuberculous pleural effusion[J]. Respirology, 2010, 15(3):451-458.

[7] 黃 磊, 敖啟林, 李 芳, 等. 低氧誘導(dǎo)因子1α誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞周期阻滯的研究[J]. 中國病理生理雜志, 2005, 21(4): 718-721.

[8] Zhang B, Guo W, Yu L, et al. Cobalt chloride inhibits tumor formation in osteosarcoma cells through upregulation of HIF-1α[J]. Oncol Lett, 2013, 5(3):911-916.

[9]RacineC,BélangerM,HirabayashiH,etal.Reductionofcaveolin-1geneexpressioninlungcarcinomacelllines[J].BiochemBiophysResCommun, 1999, 255(3):580-586.

[10] Lin M, DiVito MM, Merajver SD, et al. Regulation of pancreatic cancer cell migration and invasion by RhoC GTPase and caveolin-1[J]. Mol Cancer, 2005, 4(1):21.

[11]YehD,ChenC,SunMZ,etal.Caveolin-1isanimportantfactorforthemetastasisandproliferationofhumansmallcelllungcancerNCI-H446cell[J].AnatRec(Hoboken), 2009, 292(10):1584-1592.

[12] Zhang Q, Furukawa K, Chen HH, et al.Down-regulation of caveolin-1 in mouse Lewis lung cancer P29 is a causal factor for the malignant properties in a high-metastatic subline[J]. Oncol Rep, 2006, 16(2):289-294.