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吉林省疾病預(yù)防控制中心消毒所，吉林長(zhǎng)春 130000

相關(guān)研究證明，人免疫缺陷病毒(HIV)感染后，會(huì)逐漸耗竭在免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)中起著重要作用的CD4+T 淋巴細(xì)胞，最終會(huì)導(dǎo)致獲得性免疫缺陷綜合癥AIDS (即艾滋病)[1]。多年來(lái)，大量的研究在于觀察CD4+T 淋巴細(xì)胞的凋亡在HIV/AIDS 的發(fā)病機(jī)理中所起到的重要作用，但是很少有研究表達(dá)CD4+T 淋巴細(xì)胞凋亡率和CD4+T 淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)之間的關(guān)聯(lián)性。本項(xiàng)試驗(yàn)通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)來(lái)研究HIV 感染患者CD4+T 淋巴細(xì)胞的凋亡狀況，并探討和分析該指標(biāo)和CD4+T 淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)的相互關(guān)系，取得了較好的結(jié)果，現(xiàn)進(jìn)行如下報(bào)道。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

收集45例患HIV 的感染者，都是經(jīng)過(guò)性傳播途徑而被感染，均采用蛋白印跡方法經(jīng)確診屬于HIV-1，患者年齡從19～40歲，平均的年齡是（26.1±3.7）歲，其中男性患者共25例，女性患者共20例，沒(méi)有使用過(guò)抗HIV 的治療，排除沒(méi)有其它癥狀的感染者；另外選取45例和HIV 感染類似的HIV 陰性志愿者來(lái)作為對(duì)照組進(jìn)行比較。

1.2 檢測(cè)方法

采用FITC 標(biāo)記CD4 單抗和溶血素以及Annexin V-FITC 凋亡檢測(cè)試劑盒，對(duì)于CD4+T 淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)采用和50 μL 抗凝血混合均勻，在室溫避光保存15 min 后,加入450uL 溶血素,再在室溫避光保存15 min 后，通過(guò)FACS MULISET 軟件進(jìn)行檢測(cè)并分析對(duì)比研究。CD4+T 淋巴細(xì)胞凋亡的檢測(cè)方法是：用200 μL 抗凝全血加溶血素后，馬上輕輕混勻，在室溫避光保存15 min 以后，離心5 min 去上清，在4 ℃條件下，PBS (pH 值為7.2,0.01 mol/L)對(duì)細(xì)胞洗滌2 次，然后采用FACS CELLQUEST 軟件進(jìn)行檢測(cè)和分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)原理

所有的資料采用SPSS 18.0 的統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行綜合分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果，HIV 感染者和對(duì)照組患CD4+T 淋巴細(xì)胞的凋亡率之間對(duì)比采用秩和進(jìn)行檢驗(yàn)；兩組間計(jì)數(shù)資料相關(guān)性采用是Spearman等級(jí)相關(guān)分析。如果P＜0.05，表明其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

HIV 感染組CD4+T 淋巴細(xì)胞的凋亡率是(6.81±2.29)%，要遠(yuǎn)高于對(duì)照組的凋亡率(2.76±0.88）%，該兩組CD4+T 淋巴細(xì)胞的凋亡率對(duì)比，具有顯著的差異（Z=-5.391，P＜0.01），具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本研究組細(xì)胞計(jì)數(shù)個(gè)數(shù)平均值為（362.5±6.3）,和HIV 感染組CD4+T 淋巴細(xì)胞的凋亡率之間存在明顯負(fù)相關(guān)關(guān)系（r=-0.875，P＜0.01）。

3 討論

在臨床上HIV 感染者有個(gè)很明顯的特征是：CD4+T 淋巴細(xì)胞的數(shù)量如果有進(jìn)行性的下降，就會(huì)伴隨著細(xì)胞功能的快速下降[2]。Ledru E 等[3-4]相關(guān)研究證明，感染者的體內(nèi)外HIV 感染以后所導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡，極有可能是CD4+T 淋巴細(xì)胞出現(xiàn)進(jìn)行性減少的一個(gè)非常重要的原因。CD4+T 淋巴細(xì)胞出現(xiàn)進(jìn)行性減少機(jī)制通常和下面兩個(gè)因素密切相關(guān)：①HIV 編碼的蛋白，比如Tat 蛋白等，常以抗原與超抗原的形式對(duì)于機(jī)體免疫細(xì)胞進(jìn)行反復(fù)的刺激，造成慢性免疫活化狀況，并經(jīng)過(guò)活化引發(fā)細(xì)胞死亡與活化T細(xì)胞自主死亡的機(jī)制，來(lái)加速CD4+T 細(xì)胞量的減少；②促凋亡蛋白通過(guò)TNF 受體細(xì)胞凋亡與線粒體細(xì)胞凋亡兩個(gè)信息途徑，誘發(fā)T 淋巴細(xì)胞的凋亡，結(jié)果造成了CD4+T 淋巴細(xì)胞的大幅減少[5]。Herbein 等相關(guān)研究[6]證明，HIV 不但會(huì)造成被感染CD4+T 細(xì)胞的凋亡，并且還會(huì)導(dǎo)致沒(méi)受感染的旁觀者T 淋巴細(xì)胞的凋亡數(shù)目急劇增加。由于凋亡做為機(jī)體的自我保護(hù)功能，在自動(dòng)清除感染細(xì)胞的同時(shí)，卻并未能夠抑制HIV 于單核/巨噬細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制，最終導(dǎo)致沒(méi)有受到感染的細(xì)胞同樣出現(xiàn)死亡，造成對(duì)于HIV 細(xì)胞復(fù)制出現(xiàn)失控狀態(tài)，進(jìn)而發(fā)展成出現(xiàn)嚴(yán)重的免疫缺陷，引發(fā)AIDS 等相關(guān)的機(jī)會(huì)性的感染。當(dāng)人體全血中CD4+T 淋巴細(xì)胞的水平在降至200 個(gè)/μL 以下的時(shí)候，就非常容易引起各類機(jī)會(huì)感染，這也是HIV 感染患者最大的威脅[7]。

通過(guò)本次研究的結(jié)果證明：HIV 感染組CD4+T 淋巴細(xì)胞的凋亡率要遠(yuǎn)高于對(duì)照組的凋亡率，該兩組CD4+T 淋巴細(xì)胞的凋亡率對(duì)比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。此外，本研究組細(xì)胞計(jì)數(shù)個(gè)數(shù)平均值為（362.5±6.3）,和HIV 感染組CD4+T 淋巴細(xì)胞的凋亡率之間存在明顯負(fù)相關(guān)關(guān)系，這和成浩等[8]有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道比較一致。所以，對(duì)于HIV 感染患者的疾病進(jìn)程的監(jiān)測(cè)，除了應(yīng)當(dāng)監(jiān)控傳統(tǒng)的CD4+T 淋細(xì)胞的計(jì)數(shù)與病毒載量，還應(yīng)當(dāng)檢測(cè)出細(xì)胞的凋亡率，今后在實(shí)施艾滋病的治療和新藥的研制開發(fā)時(shí)，還應(yīng)當(dāng)把細(xì)胞的凋亡率的改變作為治療效果的重要觀察指標(biāo)進(jìn)行參考。

綜上所述，CD4+T 淋巴細(xì)胞的凋亡率增加屬于HIV 感染者CD4+T 淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)出現(xiàn)降低的主要原因，HIV 感染患者的CD4+T 淋巴細(xì)胞量的減少和細(xì)胞的凋亡率存在著密切的關(guān)系，所以檢測(cè)HIV 感染者的CD4+T 的淋巴細(xì)胞凋亡率，更有利于判斷患者的疾病發(fā)展進(jìn)程。

[1]饒和平,吳南屏,馮磊,等.HIV 感染者第二受體CCR5 和CXCR4 表達(dá)與機(jī)會(huì)性感染的相關(guān)性[J].解放軍預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2009,12(4)：105.

[2]代娣，尚紅，姜擁軍，等.我國(guó)HIV/AIDS 患者外周細(xì)胞凋亡與疾病進(jìn)展的相關(guān)性分析[J].中國(guó)免疫學(xué)雜志，2006,22 (12)：1156-1157.

[3]Ledru E,Lecoeur H,Garcua S,et al.Differential susceptibility to activation-induced apoptosis among peripheral Th1subsers：corre-lation with Bcl-2expression and consequences for AIDS pathgene-sis.[J]Immunol，2008,20(5)：957-958.

[4]王曄愷,曾芳,周吉航,等.CD8～+T 淋巴細(xì)胞各亞群與HIV 感染疾病進(jìn)程的關(guān)系[J].中國(guó)皮膚性病學(xué)雜志，2010(9)：818-820.

[5]陳小平,陳觀今,肖斌權(quán)，等.HIV/AIDS 患者和正常人T 細(xì)胞亞群、農(nóng)型及其相關(guān)性的比較研究[J].中國(guó)人獸共患病雜志，2009,17(2)：175.

[6]Herbein G,Lint C V,Lovett J L,et al.Distinct mechanism trigger apoptosis in human immunodeficiency virus type1infected and in un-infected bystander T lymphocytes[J].Journal of Virology，2011,16(7)1387-1389.

[7]Rowland-Jones SL.Timeline：AIDS pathogenesis：what have two decades of HIV research taught us[J].Nature Reviews Immunolog，2013,3(4)：343-348.

[8]成浩,徐金水,吳建茹,等.江蘇省男性HIV 感染者/艾滋病人中解脲脲原體和生殖支原體的檢測(cè)分析[J].南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2010,16(8)：191-192.