管建云 李軍擴(kuò)

1) 河南安陽(yáng)市腫瘤醫(yī)院外三科 安陽(yáng) 455004 2) 河南安陽(yáng)市腫瘤醫(yī)院病理科 安陽(yáng) 455004

膀胱癌的發(fā)生、發(fā)展是多基因共同參與的復(fù)雜的過(guò)程，常伴隨著癌基因激活和抑癌基因失活。癌基因HER2 和抑癌基因PTEN 可影響共同的細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，在多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起協(xié)同作用［1］。近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)兩者與膀胱癌的發(fā)生也存在密切關(guān)系。本研究采用免疫組化方法檢測(cè)HER2 和PTEN 在膀胱癌組織中的表達(dá)，分析其與膀胱癌臨床、病理之間的關(guān)系以及兩者表達(dá)的相關(guān)性，探討其在臨床應(yīng)用中的價(jià)值，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本組收集2010 -06—2013 -03 間本院開(kāi)放手術(shù)切除并均經(jīng)病理證實(shí)為膀胱尿路上皮細(xì)胞癌患者的組織標(biāo)本62例，男48例，女14例;年齡34～78(57.8 ±6.1)歲。按WHO病理分級(jí)標(biāo)準(zhǔn):III 級(jí)16例，II 級(jí)24例，I 級(jí)22例。臨床分期按UICC-TNM 標(biāo)準(zhǔn):Ta-T1期37例，T2-T4期25例。23例對(duì)照組正常膀胱組織取自同期其它膀胱手術(shù)患者，男17例，女6例;年齡26～72(55.3 ±7.5)歲。兩組患者的年齡、性別等一般情況比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05)，具有可比性。

1.2 試劑及方法 鼠抗人HER2/neu 單克隆抗體、鼠抗人PTEN單克隆抗體，SP 免疫組化試劑盒及DAB 顯色試劑盒購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)有限公司。所有標(biāo)本經(jīng)常規(guī)10%福爾馬林固定，脫水，包埋，4 m 連續(xù)切片，脫蠟。分別作HE 診斷及免疫組化染色。免疫組織化學(xué)SP 二步法，操作步驟嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。用PBS 代替一抗作陰性對(duì)照，用己知陽(yáng)性片作為陽(yáng)性對(duì)照。

1.3 結(jié)果 判定HER2 蛋白陽(yáng)性表達(dá)主要表現(xiàn)為細(xì)胞膜棕黃色著色，PTEN 陽(yáng)性細(xì)胞為胞漿或細(xì)胞核著色，呈橘黃色或棕黃色顆粒。每張切片隨機(jī)選取5個(gè)高倍視野鏡(10 ×40)，根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞占全部同類細(xì)胞總數(shù)的百分比及細(xì)胞染色強(qiáng)度作結(jié)果判定［1］。著色強(qiáng)度計(jì)分:不著色為0 分，淺黃色為1 分。棕黃色為2 分，棕褐色為3 分。再將按陽(yáng)性細(xì)胞比例評(píng)定:陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜10%計(jì)為0 分，10%～40%之間為1 分，41%～70%之間為2分，＞70%計(jì)為3 分。將上述兩種評(píng)分結(jié)果相加:0～1 分者為(-)，2 分者為(+)，3～4 分者為(+ +)，5～6 分者為(+ + +)。將≥2 分歸為陽(yáng)性作統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 使用SPSS 13.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，率的比較采用x2檢驗(yàn)，相關(guān)性采用Spearman 相關(guān)分析方法。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HER2 和PTEN 的表達(dá)情況 HER2 蛋白在62 份膀胱癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為53.2%。在23 份正常膀胱組織中未見(jiàn)表達(dá)，其表達(dá)率為0。膀胱癌組織中表達(dá)率明顯高于正常膀胱黏膜組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05)。PTEN 蛋白在62 份膀胱癌組織標(biāo)本中陽(yáng)性表達(dá)率為46.7%。在23 份正常膀胱組織中均為陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性表達(dá)率為100%。膀胱癌組織中表達(dá)率明顯低于正常膀胱組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05)。HER2 和PTEN 的陽(yáng)性表達(dá)分別見(jiàn)圖1、圖2。

圖1 HER2 在膀胱癌組 織中的陽(yáng)性表達(dá)

圖2 PTEN 在正常膀胱組織中的陽(yáng)性表達(dá)

2.2 HER2 和PTEN 的表達(dá)與膀胱癌臨床、病理特征的關(guān)系隨著膀胱癌病理分級(jí)、臨床分期的增高，HER2 蛋白陽(yáng)性表達(dá)率增高，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.01)。而膀胱癌病理分級(jí)、臨床分期越高，PTEN 蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率越低，組間比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05)，見(jiàn)表1。

表1 HER2 和PTEN 的表達(dá)與膀胱尿路上皮細(xì)胞癌臨床、病理之間的關(guān)系

2.3 HER2 和PTEN 表達(dá)的相關(guān)性分析 HER2 陽(yáng)性者中有20例PTEN 陰性表達(dá)。HER2 陰性者中有9例PTEN 陰性表達(dá)。兩者在膀胱癌組織中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r= -0.481，P ＜0.05)。

3 討論

Her2/neu(又稱c -erbB -2)是原癌基因，定位于人染色體17q21，編碼一個(gè)p185 的跨膜糖蛋白，即HER2。作為受體蛋白，HER2 具有內(nèi)源性酪氨酸激酶活性，其自身活化后作用于特定的信號(hào)蛋白，激活PI3K/AKT、RAS/MAPK 等多種細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，引發(fā)級(jí)連式放大反應(yīng)，促進(jìn)細(xì)胞增殖、分化，加速細(xì)胞轉(zhuǎn)化、抑制凋亡，從而致癌變。HER2 在許多惡性腫瘤細(xì)胞如乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌、肺癌、膀胱癌、胃癌等中過(guò)度表達(dá)［2］，而且其表達(dá)水平與腫瘤分級(jí)、分期及預(yù)后關(guān)系密切。國(guó)內(nèi)外學(xué)者的研究證實(shí)［3-4］，HER2 在部分膀胱癌中高度表達(dá)，此類腫瘤多是分期和分級(jí)較高者，容易發(fā)生浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移且預(yù)后不佳。有報(bào)道［5］顯示，HER2 的表達(dá)與浸潤(rùn)性膀胱癌相關(guān)，是膀胱腫瘤復(fù)發(fā)及病死率的獨(dú)立預(yù)后因素。本研究結(jié)果表明，HER2 在正常膀胱組織無(wú)表達(dá)，在部分膀胱癌組織中高表達(dá)，且與膀胱癌的分級(jí)、浸潤(rùn)性相關(guān)，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示HER2 參與了膀胱癌的發(fā)生發(fā)展，并與惡性生物學(xué)行為相關(guān)。

目前，已有多種針對(duì)HER2 受體的靶向藥物應(yīng)用于腫瘤臨床治療，其中最常用及引人關(guān)注的是曲妥珠單抗。它作為抗體能特異性地與HER2 的胞外段結(jié)合，從而阻斷HER2 的二聚化及活化，抑制HER2 介導(dǎo)的細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，最終抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖。目前，膀胱癌的抗HER2 治療尚在動(dòng)物試驗(yàn)及臨床試驗(yàn)階段［6］，這與不同學(xué)者的研究結(jié)論不一致有關(guān)。也表明腫瘤的發(fā)生是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，與多基因的參與有關(guān)。

PTEN 是抑癌基因，定位于人染色體10q23.3，編碼蛋白稱PTEN 蛋白，是一含403個(gè)氨基酸的多肽鏈，具有脂質(zhì)磷酸酶和蛋白磷酸酶活性。與HER2 作用相反，它是細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的負(fù)性調(diào)節(jié)因子，主要是通過(guò)發(fā)揮其雙特異性磷酸酶活性，脫去PI3K/AKT，RAS/MAPK，F(xiàn)AK(聚集粘連激酶)等信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中多種關(guān)鍵激酶的磷酸根，使其活性減弱，從而阻斷細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。抑制細(xì)胞轉(zhuǎn)化，調(diào)控細(xì)胞周期、促進(jìn)凋亡，從而對(duì)腫瘤發(fā)生、發(fā)展起負(fù)性調(diào)控作用［7］。有證據(jù)顯示，在多種惡性腫瘤組織細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)有PTEN 基因的突變或表達(dá)異常［8-9］，且與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后有關(guān)。在膀胱癌中PTEN 的表達(dá)缺失或低表達(dá)也普遍存在［10］，且隨著腫瘤細(xì)胞病理分級(jí)、臨床分期的增高，PTEN 的陽(yáng)性表達(dá)率呈下降趨勢(shì)，它可以作為膀胱癌預(yù)后的觀察指標(biāo)［11］。本研究顯示，正常膀胱組織中PTEN 蛋白表達(dá)率為100%，而在膀胱尿路上皮細(xì)胞癌中的表達(dá)率僅為46.7%，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05)，而且隨著腫瘤病理分級(jí)、臨床分期的增高，PTEN 的陽(yáng)性表達(dá)率也相應(yīng)降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05)。由此表明，PTEN 低表達(dá)或表達(dá)缺失在膀胱尿路上皮細(xì)胞癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中起重要的作用。

本研究對(duì)HER2 和PTEN 在膀胱癌組織中的表達(dá)進(jìn)行了相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)兩者的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，提示HER2 過(guò)表達(dá)與PTEN 表達(dá)缺失可能通過(guò)共同的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，協(xié)同促進(jìn)了腫瘤的形成及進(jìn)展，并在治療中相互影響。有研究表明［12］，對(duì)曲妥珠單抗治療的敏感性差的HER2 陽(yáng)性乳腺癌患者與PTEN的表達(dá)相關(guān)。目前曲妥珠單抗尚未應(yīng)用于抗膀胱癌的治療，可能與兩者表達(dá)呈負(fù)相關(guān)有關(guān)。文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)，甘草苷［13］、吲哚美辛［14］等均可以上調(diào)人細(xì)胞PTEN 的表達(dá)，相信隨著研究的不斷深入，在膀胱癌的治療中選擇這兩種基因?yàn)榘悬c(diǎn)，有可能起到積極作用。

［1］Salvesen HB，Stefansson I，Kalvenes MB，et al. Loss of PTEN expression is associated with metastatic disease in patients with endometrial carcinoma［J］.Cancer. 2002，94(8):2 185 -2 191.

［2］Casalini P，Iorio MV，Galmozzi E，et al. Role of HER receptors family in development and differentiation［J］.J Cell Phvsiol，2004，200(3):343 -350.

［3］胡文暉，郝斌，李惠翔，等. 不同組織學(xué)類型膀胱癌組織中HER2 蛋白的表達(dá)［J］. 鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2014，49(1):96 -98.

［4］Ross JS，Wang K，Gay LM，et al. A high frequency of activating extracellular domain ERBB2 (HER2)mutation in micropapillary urothelial carcinoma［J］.Clin Cancer Res. 2014，20(1):68 -75.

［5］Bolenz C，Shariat SF，Karakiewicz PI，et al. Human epidermal growth factor receptor 2 expression status provides independent prognostic information in patients with urothelial carcinoma of the urinary bladder［J］.BJU Int. 2010，106(8):1 216-1 222.

［6］Hussain MH，MacVicar GR，Petrylak DP，et al. Trastuzumab，paclitaxel，carboplatin，and gemcitabine in advanced human epidermal growth factor receptor-2/neu-positive urothelial carcinoma:results of a multicenter phase II National Cancer Institute trial［J］.J Clin Oncol. 2007，25(16):2 218-2 224.

［7］畢玉東，王寶森.PTEN 和Survivin 在膀胱癌中的表達(dá)及臨床意義［J］. 國(guó)際泌尿系統(tǒng)雜志，2011，31(4):452 -455.

［8］趙紅霞.PTEN 與腫瘤的相關(guān)性研究進(jìn)展［J］. 武漢大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2014，57(1):155 -159.

［9］欣楠，于兆進(jìn)，魏敏杰，等.PTEN 與腫瘤研究進(jìn)展［J］. 現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2012，20(7):107 -110.

［10］Cordes I，Kluth M，Zygis D，et al. PTEN deletions are related to disease progression and unfavourable prognosis in early bladder cancer［J］.Histopathology.2013，63(5):670 -677.

［11］Ahmad I，Morton JP，Singh LB，et al. β-Catenin activation synergizes with PTEN loss to cause bladder cancer formation［J］. Oncogene. 2011，30(2):178 -189.

［12］Gallardo A，Lerma E，Escuin D，et al. Increased signalling of EGFR and IGF1R，and deregulation of PTEN/PI3K/Akt pathway are related with trastuzumab resistance in HER2 breast carcinomas［J］. Br J Cancer. 2012，106(8):1 367 -1 373.

［13］張嫻，黃永佳，曾星. 甘草苷對(duì)人膀胱癌T24 細(xì)胞p21、PTEN 的表達(dá)影響［J］. 江西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2012，24(2):64 -66.

［14］Abdulkareem IH，Blair M.Effects of indomethacin on expression of PTEN tumour suppressor in human cancers［J］.Niger Med J. 2013，54(2):100 -106.