摘要：本研究對木耳栽培種質資源國審認定的標準菌株19株進行酯酶同工酶的多樣性研究，初步明確木耳栽培種質資源的遺傳信息，為標準菌株庫的建立、評價提供重要的基礎數(shù)據(jù)。

關鍵詞：木耳；種質資源；酯酶同工酶；多樣性

中圖分類號：S646.6文獻標識碼：A文章編號：1674-0432（2014）-05-38-1

1實驗設計

供試菌株采用液體培養(yǎng)，之后進行樣品制備，采用酯酶同工酶電泳技術，進行酶譜多樣性分析、相似系數(shù)分析和聚類分析，明確供試菌株的遺傳多樣性，為標準菌株庫的建立提供遺傳信息。酶譜多樣性分析相似系數(shù)分析聚類分析明確供試菌株的遺傳多樣性，

2試驗材料

2.1供試菌株

供試菌株19株，由吉林農(nóng)業(yè)大學園藝學院提供，為全國食用菌品種認定委員會認定通過的國審標準菌株，菌株信息見表1。

2.2試驗方法

挑取保存的菌絲于液體培養(yǎng)基中，在25℃、100轉/分鐘條件下振蕩培養(yǎng)20天。過濾菌絲，用蒸餾水沖洗干凈，用真空泵吸取培養(yǎng)基至菌絲體成餅狀，按1∶1的比例加入樣品提取液，充分研磨后，至于冷凍離心機中，0℃，12000轉/分鐘離心15分鐘后，即得同工酶提取液。凝膠制備后點樣，采用垂直板聚丙烯酰胺凝膠電泳。取出凝膠片，放入現(xiàn)配的染色液染色。

2.3數(shù)據(jù)處理

酯酶同工酶電泳數(shù)據(jù)在NTSYS-pc2.10e軟件上，利用SIMQUAL程序計算菌株間遺傳相似系數(shù)，之后進行聚類分析，繪制樹狀聚類圖。

3結果與分析

3.1酯酶同工酶酶譜的多樣性

由實驗結果可知，供試菌株酯酶同工酶電泳酶譜清晰可見，類型多樣，共檢測出243條酶帶，17個酶譜類型，其中遷移率不同的酶帶35條，其遷移率（Rf）范圍為0.129～0.695；多態(tài)性酶帶32條，多態(tài)性酶帶比率是91%；各個菌株有11-16條不等；酶帶E20（Rf=0.445）、E23（Rf=0.490）、E24（Rf=0.507）是供試菌株共有的穩(wěn)定酶帶，出現(xiàn)頻率100%；酶帶E11（Rf=0. 357）、E26（Rf=0.543）、E28（Rf=0.571）是菌株中農(nóng)黃天菊花耳特有酶帶；酶帶E12（Rf=0.364）、E16（Rf=0.395）為菌株Au8129所特有；菌株浙耳1號特有酶帶E18（Rf=0.414）。

3.2酯酶同工酶酶譜的聚類分析

供試菌株在相似系數(shù)0.56水平處可以分為四大類群。類群Ⅰ共計8株，包括吉雜1號、黑耳6號、吉AU2號、黑A、黑木耳2號、延特3號、延特5號、豐收2號等。類群Ⅰ菌株共檢測出酶帶16條，多態(tài)性酶帶13條，多態(tài)性酶帶比例41%。在相似系數(shù)1.00水平處菌株黑耳6號和吉AU2號、黑A和黑木耳2號聚為一類，其遺傳背景相近；類群Ⅱ共計3株，分別是浙耳1號、新科、單片5號。類群Ⅱ菌株共檢測出酶帶18條，多態(tài)性酶帶15條，多態(tài)性酶帶比例47%；類群Ⅲ，共計7株，包括黑793、H10、滬耳3號、Au8129、黑耳4號、黑耳5號和黑木耳1號。類群Ⅲ菌株共檢測出酶帶26條，多態(tài)性酶帶23條，多態(tài)性酶帶比例72%，酶譜多樣性尤為豐富；類群Ⅳ即為菌株中農(nóng)黃天菊花耳，檢測出酶帶16條，多態(tài)性酶帶13條，多態(tài)性酶帶比例41%。

3.3供試菌株間相似系數(shù)

供試菌株中任意兩個菌株間的相似系數(shù)0.296-1.000不等，其平均相似系數(shù)為0.594，菌株黑耳6號和吉AU2號、黑A和黑木耳2號的相似系數(shù)均為1.000，判定是相同菌株，菌株Au8129和黑A、黑木耳2號的相似系數(shù)最小僅為0.296。供試菌株的平均相似系數(shù)中菌株Au8129最小為0.396，延特5號的平均相似系數(shù)最大為0.677。供試菌株間的相似系數(shù)的降序排列中，排次位于前列的菌株是聚類分析中類群Ⅰ的供試菌株，平均相似系數(shù)為0.677～0.631不等，說明類群Ⅰ的供試菌株遺傳背景更為相近。

4結語

本文通過對供試菌株酯酶同工酶的電泳，共檢測出遷移率不同的酶帶35條，17個酶譜類型；經(jīng)聚類分析，可以在相似系數(shù)0.56處劃分為四大類群，且每一類群均有特征型酶帶，結果表明供試菌株酶譜多樣性豐富，可以根據(jù)酯酶同工酶電泳初步明確供試菌株的遺傳背景，為標準菌株庫的建立提供遺傳信息。

作者簡介：李國興，鎮(zhèn)賚縣植物保護與植物檢疫工作站，農(nóng)藝師，研究方向：農(nóng)業(yè)技術推廣。