桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院藥學(xué)部，廣西 桂林 541001

HPLC-DAD法同時測定銀黃含片中黃芩苷和綠原酸的含量

陳越蔡小玲胡頻何潔

桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院藥學(xué)部，廣西 桂林 541001

目的建立同時測定銀黃含片制劑中黃芩苷和綠原酸含量的方法，及測定不同廠家銀黃含片中黃芩苷和綠原酸的含量。方法采用HPLC法，用DAD檢測器，島津VP-ODS C18(250 mm×4.6 mm，5(m)色譜柱，流動相：乙腈-0.4%磷酸溶液，梯度洗脫，流速1.0 ml·min-1，檢測波長為綠原酸327 nm、黃芩苷280 nm。結(jié)果綠原酸和黃芩苷分別在0.17～3.40 μg和0.33～6.60μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.9999)，平均加樣回收率分別為100.59%(RSD=0.94%)和98.91%(RSD=1.14%)。結(jié)論本文建立的方法可以同時準確地測定銀黃含片中綠原酸和黃芩苷的含量，方法快速、準確、重復(fù)性好，可用于銀黃含片的質(zhì)量控制。

銀黃含片；綠原酸；黃芩苷；高效液相色譜

銀黃含片收載于衛(wèi)生部藥品標準，是由金銀花提取物、黃芩提取物制成的中藥復(fù)方制劑，具有清熱解毒、消炎的功效，用于急慢性扁桃體炎，咽炎，上呼吸道感染等病癥[1]。綠原酸和黃芩苷為其主要有效成分，現(xiàn)行標準采用分光光度法測定其含量，操作復(fù)雜，檢驗效率低，誤差較大。本文采用HPLC法，使用DAD檢測器，建立同時測定銀黃含片中綠原酸、黃芩苷的含量的方法，并對三個不同廠家的銀黃含片進行對比分析，建立的方法專屬性強，靈敏度高，操作簡便，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 高效液相色譜儀(美國Waters公司)，包括Waters2695分離單元；Watrs2998DAD檢測器。

1.2 試藥 綠原酸(中國藥品生物制品檢定所，批號：110753-200413)；黃芩苷(中國藥品生物制品檢定所，批號：110745-201016)；銀黃含片(批號：1203035，成都地奧制藥集團有限公司；批號：120502，上海福達制藥有限公司；批號：01312049，魯南厚普制藥有限公司)；陰性樣品為本院制劑室制備。乙腈為色譜純，水為重蒸水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

表1 流動相的梯度洗脫

色譜柱：島津VP-ODS C18(250 mm×4.6 mm，5(m)；流動相：乙腈-0.4%磷酸溶液，梯度洗脫(表1)，流速1.0 ml·min-1；DAD檢測器，檢測波長為綠原酸327 nm、黃芩苷280 nm；柱溫為室溫；進樣量：20μl。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 分別精密稱取綠原酸對照和黃芩苷對照品適量，置同一量瓶中，加50%甲醇溶液制成每1 ml含綠原酸55μg、黃芩苷110μg的混合溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液制備 取銀黃含片20片，除去包衣，研細，混勻，取約0.2 g，精密稱定，置50 ml量瓶中，加入50%甲醇溶液適量，超聲處理30 min(功率250 W，頻率35 kHz)，放冷，加50%甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。

2.3 線性關(guān)系考察 精密稱取綠原酸對照品8.50 mg，置50 ml量瓶中，加50%甲醇溶液使溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取0.5、1、2、5、10 ml，分別置10 ml量瓶中，加50%甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，得濃度為8.5、17.0、34.0、85.0、170.0μg·ml-1的綠原酸系列對照品溶液，分別按照上述色譜條件進樣測定，以綠原酸峰面積積分值對進樣量(μg)作線性回歸曲線。同上分別制備濃度為16.5、33.0、66.0、165.0、330.0 μg·ml-1的黃芩苷系列對照品溶液，分別進樣測定，進行線性回歸。得綠原酸回歸方程為：A=1.995×106C+5.584×104(r=0.9999)；黃芩苷回歸方程為：A=6.456×106C+4.826×104(r=0.9999)。綠原酸進樣量在0.17～3.40μg范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好；黃芩苷進樣量在0.33～6.60μg范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

2.4 陰性干擾試驗 取缺金銀花提取物和缺黃芩苷提取物的2種陰性樣品約0.2 g，分別按供試品溶液制備項下的方法提取，測定。結(jié)果缺金銀花提取物的陰性對照樣品在綠原酸出峰位置無吸收峰，缺黃芩苷提取物的陰性對照樣品在黃芩苷出峰位置無吸收峰。

2.5 精密度試驗 取濃度為54.80 μg·ml-1的綠原酸和濃度為110.50μg·ml-1的黃芩苷對照品混合溶液，連續(xù)測定6次，分別記錄峰面積，結(jié)果綠原酸的RSD為0.48%(n=6)，黃芩苷的RSD為0.72%(n=6)。

2.6 穩(wěn)定性試驗 對同一供試品溶液，分別在0、1、2、4、6、8、12 h進樣，結(jié)果7次測定綠原酸和黃芩苷峰面積RSD均小于1%，表明樣品在12h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

表2 回收率試驗結(jié)果(n=3)

2.7 重復(fù)性試驗 取同一批樣品(01312049批)，按“2.2.2”項方法平行提取6份供試品溶液，測定，計算。結(jié)果綠原酸含量的平均值為14.106 mg·g-1，RSD=1.25%(n=6)，黃芩苷含量的平均值為28.540 mg·g-1，RSD=1.43%(n=6)。

2.8 加樣回收率試驗 精密稱取已知含量的銀黃含片(綠原酸含量為14.106 mg·g-1，黃芩苷含量為28.540 mg·g-1)細粉約0.1g，置50ml量瓶中，定量加入綠原酸和黃芩苷對照品混合溶液適量，加50%甲醇溶液適量，依“2.2.2”項下方法操作，制得溶液，測定。結(jié)果見表2。

2.9 樣品測定 按上擬訂的含量測定方法，測定了不同生產(chǎn)廠家3批銀黃含片樣品中綠原酸和黃芩苷的含量，結(jié)果見表3。

表3 樣品測定結(jié)果(mg·g-1，n=3)

3 討論

3.1 分別取濃度約為10μg·ml-1的黃芩苷和綠原酸對照品50%乙醇溶液，在紫外分光光度計上掃描，結(jié)果黃芩苷對照品在278 nm波長處有最大吸收，參考文獻[2]，綜合選擇280 nm為黃芩苷的測定波長，綠原酸對照品在327 nm波長處有最大吸收，參考文獻[2]，選擇327 nm為綠原酸的測定波長。

3.2 采用HPLC-DAD法同時測定銀黃含片中綠原酸、黃芩苷兩種主要成分的含量，方法準確度、精密度、靈敏度等均符合要求，相比現(xiàn)行標準采用的分光光度法測定，本法克服了綠原酸、黃芩苷的相互干擾，結(jié)果更能反映兩組分的真實含量。

[1]中華人民共和國衛(wèi)生部．中華人民共和國新藥轉(zhuǎn)正標準(第十六冊)[S].46-47．

[2]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典(一部)[S]．北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：283，205．

DeterminatinaofcontentsforbaicalinandchlorogenicacidinYinhuangbuccaltabletSimultaneouslywiththemethodbyHPLC-DAD

CHEN Yue CAI Xiaoling HU Ping HE Jie

Department of pharmacology, the affiliated hospital of guilin medical college, Guilin 541001,China

ObjectiveToestablish the method determinetion on the contents of Baicalin and Chiorogenic acid in the pharmaceutical preparation of Yinhuang Tablet simultaneousiy and to determine the contents of Baicalin and Chlorogenic acid in Yinhuang Tablet of different manufacturers.MethodsWe had adopted the method of HPLC with detector of DAD and chromatogrophy of SHIMADZU VP-ODS C18 (250mmx4.6mm,5μm), The binder was soiution of acetonitrile -0.4% orthophosphoric acid with gradient elution in the current speed of 1.0ml.min, and the wavelength of detection was 327nm in chlorgenic acid and 280nm in Baicalin.ResultsThere was a good linear relationship diflerently in the range of 0.17-3.40μg in chlorgenic aeid and 0.33μg in Baicalin (r=0.9999).The Average recovery of the added sampie was 100.59%(RSD=0.94%) and 98.91%(RSD=1.14%)Differently.ConclusionThe established method in this article could determine accurately the contents of Baicalin and chlorogenic acid in Yinhuang Tablet . And the method was quick, accurate and had a good repeatability, so itcould apply on quality content of Yinhuang Tablet.

Yinhuang Tablet ; Chlorogenic acid ; Baicalin; High efficiency liquid ghromatography (HPLC); Diode array delector(DAD).

陳越，男，主管藥師。研究方向：醫(yī)院藥學(xué)。E-mail：516442235@qq.com

R284.1

A

1007-8517(2014)08-0018-02

2014.02.10)