邱榮榮 朱娟 孫潔（常州制藥廠有限公司，江蘇常州213000）

0 引言

氯氮平對(duì)精神分裂癥的陽性或陰性癥狀具有較好的療效，被稱為“全新的第四代抗精神病藥”，屬于我國(guó)基本藥物。各國(guó)藥典[1-3]均有收載，而我國(guó)現(xiàn)行藥典僅用HPLC自身對(duì)照法控制雜質(zhì)總量，缺少對(duì)特殊雜質(zhì)研究，而國(guó)外藥典均已明確控制相關(guān)的特殊雜質(zhì)。在前期研究過程[1-7]中發(fā)現(xiàn)，各國(guó)藥典檢測(cè)方法都不能很好分離本論文確定已知雜質(zhì)和特殊未知雜質(zhì)，且分析時(shí)間較長(zhǎng)、分離度較差問題。查閱文獻(xiàn)結(jié)合檢驗(yàn)效率要求，開發(fā)了超高效液相色譜法(UPLC)測(cè)定氯氮平有關(guān)物質(zhì)檢驗(yàn)方法。文章建立UPLC 法操作簡(jiǎn)單準(zhǔn)確測(cè)定氯氮平中各雜質(zhì)，可用于氯氮平有關(guān)物質(zhì)質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

Waters超高壓液相色譜儀、Empower3軟件；梅特勒-托利多XPE205 電子天平、FE20 pH 計(jì)。氯氮平原料藥(常州制藥廠有限公司，批號(hào)190730）；氯氮平對(duì)照品(中檢所，批號(hào)100323-201102)；雜質(zhì)A,B,C,D,E,5(常州制藥廠有限公司)；甲醇為色譜純；磷酸二氫鉀、磷酸為分析純；水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色 譜 柱：Agilent Rapid Resolution HD (2.1 mm×150mm 1.8μm)；；流速：0.35 mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：257 nm；柱溫：35℃；進(jìn)樣量：2μl；以2‰磷酸二氫鉀水溶液(pH2.4)：甲醇(75：25)為流動(dòng)相(A)；以2‰磷酸二氫鉀水溶液(pH2.4)：甲醇(10：90)為流動(dòng)相(B)；以甲醇：水(80：20)為稀釋液；進(jìn)行0～2分流動(dòng)相(A)100%、2～13分流動(dòng)相(A)100%至0%、13～15分流動(dòng)相(B)100%梯度洗脫。

2.2 溶液的制備

稱取雜質(zhì)A,B,C,D,E,5 對(duì)照品各7.5mg 于100ml 量瓶中，加80ml 甲醇溶解并加水稀釋至刻度，搖勻；稱取氯氮平對(duì)照品75mg 于100ml 量瓶中，加80ml 甲醇溶解，移取上述溶液5ml 于同一100ml 量瓶中，加水定容，搖勻作為系統(tǒng)適用性溶液；稱取本品75mg 于100ml 量瓶中，加80ml 甲醇溶解并用水稀釋至刻度，搖勻作為供試品溶液；移取1ml 供試品溶液置100ml 量瓶中，加稀釋液稀釋至刻度，搖勻，再移取5ml 于50ml 量瓶中，加稀釋液稀釋至刻度，搖勻作為對(duì)照溶液。

2.3 專屬性試驗(yàn)

取系統(tǒng)適用性溶液照“2.1”項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣分析，系統(tǒng)適性圖譜(見圖1.)。結(jié)果表明，氯氮平與各雜質(zhì)峰均能達(dá)到良好的分離，分離度可達(dá)到4.0以上。

2.4 降解試驗(yàn)

稱取本品75mg 共9 份，分別置于100ml 量瓶中，分別進(jìn)行酸破壞(加5ml 的0.1mol·L-1 鹽酸溶液，放置4 小時(shí)，加0.1mol·L-1 氫氧化鈉溶液5ml 調(diào)pH 至中性)、堿破壞(加5ml 的0.1mol·L-1 氫氧化鈉溶液，放置10 分鐘，加0.1mol·L-1 鹽酸溶液5ml調(diào)pH至中性)、氧化破壞(加4ml 10%雙氧水于60℃水浴放置10分鐘)、光照破壞(置于4500LUX±500LUX 光照12 天)、高溫破壞(置于105℃放置4 小時(shí))、高濕破壞(置RH92.5%放置12 天)和未破壞均加80ml甲醇溶解并用水稀釋至刻度，搖勻作為供試品溶液。照“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定上述溶液，降解試驗(yàn)結(jié)果表明，氯氮平主峰及各雜質(zhì)峰(降解雜質(zhì)峰)均能達(dá)到良好的分離，峰純度均符合要求(峰純度閾值大于峰純度角值)，且質(zhì)量保持平衡，氧化加熱破壞下雜質(zhì)A和E增大較大，其它破壞影響較小。說明本方法專屬性好，能夠有效檢測(cè)樣品中的降解產(chǎn)物。

2.5 線性及校正因子

稱取氯氮平及雜質(zhì)A,B,C,D,E,5 對(duì)照品各15mg 置同一200ml量瓶中加160ml甲醇溶解并用水稀釋至刻度，搖勻，分別移取0.1、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 ml 置100ml 量瓶稀釋液溶解稀釋至刻度搖勻作為線性溶液。照“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定上述溶液，由濃度(μg/ml)對(duì)峰面積做線性回歸方程及校正因子，線 性 方 程 分 別 為Y=19917.7X+313.8、Y=23587.2X-9.8、Y=19655.2X-220.3、 Y=16986.8X+142.5、 Y=7371.9X+63.7、 Y=13021.3X+9.6、Y=8223.1X+20.5；相關(guān)系數(shù)均大于0.9995在相應(yīng)濃度范圍內(nèi)線性良好；校正因子分別為0.8、1.0、1.2、2.7、1.5、2.4。

2.6 回收率試驗(yàn)

圖1 系統(tǒng)適用性圖譜Fig.1Chromatogram of system suitability

稱取雜質(zhì)A,B,C,D,E,5 對(duì)照品各15mg 置同一200ml 量瓶中加160ml 甲醇溶解并用水稀釋至刻度，搖勻作為回收率雜質(zhì)貯備液。稱取氯氮平樣品75mg共12份，分別置于100ml量瓶中，分別移取0.5、1.5、3.0ml 回收率雜質(zhì)貯備液各3 份加80ml 甲醇溶解并用水稀釋至刻度，搖勻作為回收率供試品溶液。照“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定上述12 份溶液，計(jì)算各雜質(zhì)回收率分別為97.8%、102.8%、107.4%、92.3%、104.1%、103.7%和RSD 分別為1.2%、1.4%、1.4%、8.1%、1.0%、1.2%。表明本方法雜質(zhì)回收率良好。

2.7 檢測(cè)限和定量限

稱取氯氮平及雜質(zhì)A,B,C,D,E,5 對(duì)照品各7.5mg 分別置100ml量瓶中加80ml甲醇溶解并用水稀釋至刻度，搖勻，移取相應(yīng)溶液適量，用稀釋液逐級(jí)稀釋，照“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，按信噪比S/N=10 計(jì)算定量限0.11、0.03、0.13、0.11、0.28、0.12、0.11μg.ml-1，均低于相當(dāng)于主成份0.05%限度水平，且連續(xù)6 針峰面積RSD 均小于5.0%；按信噪比S/N=3 計(jì)算檢測(cè)限分別為0.03、0.01、0.04、0.03、0.08、0.04、0.03μg.ml-1均低于相當(dāng)于主成品0.01%限度水平。

2.8 精密度試驗(yàn)

照“2.1”項(xiàng)下色譜條件，連續(xù)測(cè)定對(duì)照溶液6 針，主峰峰面積RSD小于1.0%，表明本法精密度良好。

2.9 重復(fù)性試驗(yàn)

稱取氯氮平樣品75mg 6 份，分別置于100ml 量瓶中，分別移取1.5ml 回收率雜質(zhì)貯備液(相當(dāng)于主成份0.15%)加80ml 甲醇溶解并用水稀釋至刻度，搖勻作為重復(fù)性試驗(yàn)溶液，照“2.1”項(xiàng)下色譜條件，連續(xù)測(cè)定上述6份溶液，計(jì)算6份溶液中各雜質(zhì)含量RSD均小于5.0%，表明本法精密度良好

2.10 耐用性考察

根據(jù)“2.1”項(xiàng)下色譜條件，分別改變柱溫(33、37℃)、流速(0.33、0.37ml/min)、波長(zhǎng)(255、259nm)、pH(2.35、2.45)、流動(dòng)相A兩相比例(74：26、76：24)和流動(dòng)相B兩相比例(9：91、11：89)進(jìn)行系統(tǒng)適應(yīng)性溶液試驗(yàn)，結(jié)果表明上述色譜條件下，氯氮平與各雜質(zhì)峰間均能達(dá)到較好分離，其參數(shù)的微小變化不影響檢測(cè)，表明本方法耐用性較好。

3 結(jié)語

本UPLC 法各雜質(zhì)分離效果好、線性好、重復(fù)性好、精密度好、回收率好、分離效率高，溶劑用量少，可用于氯氮平有關(guān)物質(zhì)質(zhì)量控制。