張德利 馬 艷 李春輝

(承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，河北 承德 067000)

胃癌的發(fā)生是一個(gè)多因素、多步驟的過程，涉及多方面機(jī)制。研究表明轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGFβ)/Smads信號(hào)通路中任何一個(gè)環(huán)節(jié)出現(xiàn)異常都可能導(dǎo)致信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的紊亂，從而導(dǎo)致胃癌的發(fā)生與發(fā)展。本研究分析TGFβ1、Smad3、Smad7表達(dá)與胃癌分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1研究對(duì)象 收集我院2011年12月至2012年9月手術(shù)治療后經(jīng)病理證實(shí)的組織標(biāo)本60例，正常胃組織20例(距離腫瘤10 cm以上認(rèn)為正常胃組織)。60例胃癌患者中，男38例，女22例，年齡43～77〔平均(54.8±9.7)〕歲；其中低分化32例，高中分化28例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移35例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移25例。

1.2TGFβ1、Smad3、Smad7蛋白檢測(cè) 兔抗人TGFβ1、Smad3和Smad7 多克隆抗體購自武漢博士德公司，即用型快捷免疫組化MaxVision試劑盒羊抗鼠/兔購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司(KIT-5010)，免疫組化操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行以磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作陰性對(duì)照，已知陽性切片作陽性對(duì)照。

1.3判定方法 光鏡下觀察切片中TGFβ1、Smad3和Smad7的表達(dá)和分布情況,每張切片選取5個(gè)高倍視野。TGFβ1 蛋白主要分布于細(xì)胞的胞質(zhì)、呈棕黃色。Smad3和Smad7蛋白分布于細(xì)胞的胞質(zhì)，胞核, 呈棕黃色顆粒。采用二級(jí)計(jì)分法判定結(jié)果:按染色強(qiáng)度分級(jí),淡黃為1 分,黃或深黃2 分,褐或棕黃3分;陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)<10%為0分,10%～25%為1分,25%～50%為2分,50%～75 %為3分,> 75 %為4分; 兩者相加<2分為陰性(-);2～3分陽性(+);4～5分中等陽性();6～7分強(qiáng)陽性()。結(jié)果判定由兩名病理醫(yī)師經(jīng)雙盲法獨(dú)立評(píng)分。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS11.5軟件進(jìn)行分析，等級(jí)資料采用秩和檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

見圖1，表1。在胃癌組織中，TGFβ1、Smad7的表達(dá)明顯高于正常胃組織對(duì)照組(P<0.05)，Smad3的表達(dá)明顯低于正常胃組織對(duì)照組(P<0.05)。TGFβ1、Smad3、Smad7的表達(dá)與胃癌的分化程度、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。

TGFβ1，正常胃組織

TGFβ1，低分化胃癌組織

Smad3，正常胃組織

Smad3，高中分化胃癌組織

Smad3，低分化胃癌組織

Smad7，正常胃組織

Smad7，高中分化胃癌組織

Smad7，低分化胃癌組織

表1 TGFβ1、Smad3、Smad7的陽性表達(dá)在不同臨床病理特征中的關(guān)系

3 討 論

TGFβ是細(xì)胞生長(zhǎng)的有效調(diào)節(jié)因子。在腫瘤發(fā)生的早期階段,轉(zhuǎn)化的細(xì)胞部分甚至完全抵抗TGFβ的生長(zhǎng)抑制作用，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。在腫瘤發(fā)展的晚期階段,TGFβ促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移。有研究報(bào)道,在乳腺癌的發(fā)展進(jìn)程中， TGFβ可從抑癌因子轉(zhuǎn)變?yōu)榇龠M(jìn)癌轉(zhuǎn)移的因子;Smad2/3表達(dá)降低,雖然促進(jìn)了腫瘤的形成，同時(shí)也抑制了腫瘤的轉(zhuǎn)移，提示Smads信號(hào)在腫瘤轉(zhuǎn)移中的作用〔1,2〕。

TGFβ1是TGFβ家族的主要成員,是調(diào)節(jié)正常細(xì)胞生長(zhǎng)以及各種生物學(xué)功能的主要細(xì)胞因子,文獻(xiàn)報(bào)道 TGFβ1在乳腺癌、結(jié)腸癌、前列腺癌等惡性腫瘤中呈過度表達(dá)，其過度表達(dá)在腫瘤轉(zhuǎn)化、進(jìn)展中起重要作用，與預(yù)后相關(guān)〔3,4〕。

本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)胃癌組織TGFβ1呈過表達(dá)狀態(tài)，隨著胃癌臨床病理分期的進(jìn)展以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，TGFβ1表達(dá)逐漸加強(qiáng)，提示TGFβ1有可能促進(jìn)胃癌的進(jìn)展。這與Naef等〔5〕的研究結(jié)果一致。另外TGFβ1在腫瘤中高表達(dá)的原因還可能由于胃癌組織細(xì)胞失去了對(duì)TGFβ1的敏感性，導(dǎo)致TGFβ1的反饋性表達(dá)升高。

TGFβ/Smads信號(hào)傳導(dǎo)途徑調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)的基本過程: TGFβ配體→TGFβ受體→Smads 蛋白→轉(zhuǎn)錄因子→DNA 表達(dá)。傳導(dǎo)途徑中任一部分的變化都可能引起信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的紊亂，最終導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。Smads蛋白是TGFβ/Smads信號(hào)途徑的關(guān)鍵分子，Smads具有核轉(zhuǎn)位功能和轉(zhuǎn)錄活性。Smad3是通路特異性Smad 蛋白，與Ⅰ型受體識(shí)別，使之磷酸化，能夠被TGFβ1受體識(shí)別，生成復(fù)合物，由胞質(zhì)轉(zhuǎn)移至胞核，調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄〔6〕。盡管在人類惡性疾病中未找到Smad3的突變，但Smad3抑制子對(duì)Smad3表達(dá)調(diào)節(jié)的紊亂將有助于Smad3的功能性滅活，一旦Smad3活性受到抑制，就為腫瘤細(xì)胞提供了一個(gè)選擇性生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)。因此，有人認(rèn)為Smad3在TGFβ信號(hào)通路中有抑癌基因的作用。

Smad7是抑制性蛋白,與TGFβⅠ型受體結(jié)合，與通路特異性Smad3 蛋白競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合位點(diǎn)，從而對(duì)該通路進(jìn)行負(fù)向調(diào)節(jié)，阻止受體Smads(R-smads)磷酸化,未磷酸化的R-smads不能同通用Smad(Smad4)結(jié)合形成異源復(fù)合物，進(jìn)而不能轉(zhuǎn)位到細(xì)胞核調(diào)控靶基因的轉(zhuǎn)錄。研究結(jié)果顯示，Smad7也可通過抑制Smad3的活化、Smad3/Smad4異源復(fù)合物的形成及核轉(zhuǎn)位，從而拮抗TGFβ對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制效應(yīng)。原因在于Smad3功能受高表達(dá)Smad7抑制，不能有效啟動(dòng)介導(dǎo)生長(zhǎng)終止基因的轉(zhuǎn)錄，使細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)生紊亂,從而有可能向惡性化發(fā)展〔7,8〕。

近來的報(bào)道顯示，Smad7基因擴(kuò)增與胃癌、結(jié)腸癌患者的預(yù)后不良有著密切的關(guān)系。表明TGFβ信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子Smad7過表達(dá)是腫瘤細(xì)胞抵抗TGFβ生長(zhǎng)抑制作用的機(jī)制之一〔9,10〕，有研究〔11〕顯示胰腺癌中Smad7表達(dá)上調(diào),并且轉(zhuǎn)染了Smad7基因的胰腺癌細(xì)胞惡性程度增高，裸鼠成瘤能力增強(qiáng)，提示Smad7表達(dá)上調(diào)有助于惡性腫瘤的發(fā)生。

綜上所述，Smad7蛋白在胃癌組織中表達(dá)上調(diào)，Smad3蛋白在胃癌組織中表達(dá)下調(diào)，且與胃癌分化程度密切相關(guān)。同時(shí)也表明Smad3、Smad7對(duì)維護(hù)TGFβ1/Smads信號(hào)通路的平衡至關(guān)重要。

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