程 陽(yáng) 唐橋斐 趙麗妮

1.沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院病理生理學(xué)教研室，遼寧沈陽(yáng) 110034；2.沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院沈洲醫(yī)院耳鼻喉科，遼寧沈陽(yáng) 110034；3.沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院藥理教研室，遼寧沈陽(yáng) 110034

心肌缺血再灌注損傷是一種分布廣泛的臨床癥狀，常見(jiàn)于冠狀動(dòng)脈搭橋術(shù)、心肌梗死、再通術(shù)及冠狀動(dòng)脈溶栓治療中，其主要致病機(jī)制為機(jī)體存在大量的自由基，其中以氧自由基為主[1]。急性心肌梗死是一種冠狀動(dòng)脈急性閉塞疾病，患者的冠狀動(dòng)脈供血不足，導(dǎo)致相應(yīng)的供血區(qū)心肌出現(xiàn)嚴(yán)重的缺血和缺氧狀況，研究顯示，及早對(duì)患者進(jìn)行有效的抗氧化治療能夠明顯的降低心肌損傷程度，并對(duì)心功能狀態(tài)起到一定的改善效果[2]。銀杏葉提取物指的是由銀杏葉中提取得到的內(nèi)脂類及黃酮等物質(zhì)，研究顯示，該種物質(zhì)具有一定的抗氧化作用，能夠?qū)χ|(zhì)過(guò)氧化作用起到抑制效果[3]。本次研究于2013年3月—2013年10月期間通過(guò)對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷模型進(jìn)行銀杏葉提取物給藥治療，旨在探討銀杏葉提取物在預(yù)防心肌缺血再灌注損傷方面的臨床療效，為臨床治療提供可靠的證據(jù)?，F(xiàn)將結(jié)果匯報(bào)如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

50只雄性健康SD大鼠，日齡2～3d，由醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，體重平均為（254±10.16）g。銀杏葉提取物采用浙江康恩貝制藥股份有限公司提供的藥物。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物模型 建立大鼠心肌缺血再灌注模型，采用40mg/kg戊巴比妥鈉對(duì)大鼠進(jìn)行麻醉，行氣管插管人工呼吸，開胸使心臟暴露，將左冠狀靜脈主干作為標(biāo)致，于左心耳根部下方約2 cm處進(jìn)針，使用0號(hào)線由心肌表層穿入，肺動(dòng)脈圓錐旁穿出，20min后，將一直徑1.5mm凹槽硅膠管放置于血管和結(jié)扎線之間，將結(jié)扎線拉近，使硅膠管對(duì)冠脈左室支造成壓迫形成閉塞，約30min后將結(jié)扎線松解，使之再通。對(duì)大鼠行心電圖監(jiān)測(cè)，若缺血期ST段抬高程度在0.2mV以上，且再灌注后ST段下降幅度在50%以上，則說(shuō)明結(jié)扎和再通取得成功。順利再灌注后，取后腹主動(dòng)脈血樣2mL，離心備用。

1.2.2 動(dòng)物分組 將50只SD大鼠隨機(jī)平均分配為5組：①假手術(shù)組：給予常規(guī)麻醉劑開胸處理，在對(duì)指定部位進(jìn)行結(jié)扎線穿過(guò)后，不進(jìn)行其他操作，于20min平衡后進(jìn)行觀察；②對(duì)照組：手術(shù)后平衡20min，在缺血時(shí)間達(dá)到30min時(shí)給予10 min再灌注，缺血20 min時(shí)給予靜脈注射生理鹽水；③藥物1組、藥物2組、藥物3組：于對(duì)照組缺血再灌注基礎(chǔ)上，分別給予銀杏葉提取物25 mg/kg、50mg/kg、100mg/kg。

1.2.3 觀察指標(biāo) 采用硫代巴比妥酸法對(duì)心肌組織丙二醛水平進(jìn)行測(cè)定，采用Griss法對(duì)心肌一氧化氮水平進(jìn)行測(cè)定。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

本次研究采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 13.0對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理，采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差的形式表示計(jì)量資料，采用t檢驗(yàn)對(duì)計(jì)量資料進(jìn)行檢驗(yàn)，采用χ2檢驗(yàn)對(duì)計(jì)數(shù)資料進(jìn)行檢驗(yàn)，P＜0.05表明差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠心肌組織丙二醛及一氧化氮水平對(duì)比結(jié)果

假手術(shù)組大鼠心肌一氧化氮及丙二醛水平明顯低于對(duì)照組大鼠，差異具有顯著性（P＜0.05），表明心肌缺血再灌注損傷會(huì)造成相應(yīng)指標(biāo)水平明顯增高；藥物組大鼠心肌組織丙二醛及一氧化氮水平明顯低于對(duì)照組，差異具有顯著性（P＜0.05），其中藥物2組下降水平最為明顯，增加藥物劑量后出現(xiàn)一定下降，但差異無(wú)顯著性（P＞0.05）。 見(jiàn)表 1。

表1 5組大鼠心肌組織丙二醛及一氧化氮水平對(duì)比結(jié)果

表1 5組大鼠心肌組織丙二醛及一氧化氮水平對(duì)比結(jié)果

注：同假手術(shù)組比較，*P=0.000，tMDA=11.271，tNO=27.034；同對(duì)照組比較，**P=0.000，t MDA-1=9.243，t NO-1=8.951；tMDA-2=9.243，tNO-2=8.951；t MDA-3=9.243，t NO-3=8.951； 同藥物 2 組比 較，#P MDA=0.051，P NO=0.056,t MDA=5.461，t NO=7.015。

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3 討論

銀杏時(shí)銀杏科植物的一種，銀杏葉主要為銀杏干燥葉，其主要成分為萜內(nèi)醋類、黃酮類和少量的生物堿及多酚類化學(xué)物質(zhì)，銀杏葉提取物中的有效成分主要為銀杏內(nèi)酯和總黃酮類物質(zhì)，是一種血小板活性因子拮抗劑[4]。臨床試驗(yàn)顯示，銀杏葉提取物具有一定的抗氧化活性和抗氧自由基活性，能夠起到降低血液黏度，改善微循環(huán)的作用。近代臨床研究結(jié)果證明，銀杏葉提取物能夠有效的治療心腦血管等多種疾病，近年來(lái)，銀杏葉制劑被廣泛應(yīng)用于冠狀動(dòng)脈粥樣硬化心臟病的治療中[5]。

心肌缺血再灌注損傷指的是心肌在缺血后得到血液再灌注，發(fā)生功能代謝障礙，結(jié)構(gòu)受到破壞導(dǎo)致病情加重的現(xiàn)象。臨床研究證明，造成心肌缺血再灌注損傷的主要原因?yàn)闄C(jī)體自由基水平增高，微血管損傷和細(xì)胞內(nèi)發(fā)生鈣超載現(xiàn)象等[6]。

當(dāng)前臨床普遍認(rèn)為，機(jī)體氧自由基水平異常升高是引起心肌缺血再灌注損傷的主要原因，相關(guān)資料顯示，銀杏葉提取物能夠有效抑制心肌缺血再灌注時(shí)氧自由基的產(chǎn)生，增強(qiáng)心肌對(duì)機(jī)體自由基的清除功能，降低自由基導(dǎo)致的脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，從而對(duì)心肌細(xì)胞起到保護(hù)作用。心肌組織丙二醛是直至不飽和酸在氧自由基的作用下的一種過(guò)氧化反應(yīng)產(chǎn)物，本次研究中對(duì)照組大鼠心肌組織丙二醛水平較假手術(shù)組大鼠明顯升高，差異具有顯著性（P＜0.05），表明缺血再灌注會(huì)引起機(jī)體心肌丙二醛水平異常增高，表明再灌注會(huì)導(dǎo)致氧自由基的水平大幅度增高。本次研究中，通過(guò)給予藥物組大鼠不同劑量的銀杏葉提取物藥劑，結(jié)果表明，實(shí)驗(yàn)組大鼠心肌組織丙二醛水平較對(duì)照組大鼠明顯降低，差異具有顯著性（P＜0.05），有效降低了氧自由基對(duì)心肌細(xì)胞造成的損傷，對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的依賴性舒張功能起到一定的改善作用，從而起到心肌缺血再灌注損傷的預(yù)防保護(hù)效果。

本次研究中，對(duì)照組大鼠心肌一氧化氮水平較假手術(shù)組大鼠明顯升高，差異具有顯著性（P＜0.05），表明再灌注會(huì)導(dǎo)致機(jī)體一氧化氮水平異常升高，同相關(guān)資料中的結(jié)論基本一致。高水平的一氧化氮會(huì)加重心肌損傷，一方面高水平一氧化氮會(huì)引起組織cGMP分泌過(guò)剩，從而對(duì)cGMP依賴性蛋白激酶造成刺激，阻礙細(xì)胞鈣質(zhì)外流，造成心肌收縮功能障礙。另一方面，一氧化氮會(huì)同再灌注時(shí)機(jī)體長(zhǎng)生的氧自由基結(jié)合，造成大量過(guò)氧亞硝酸鹽陰離子的生成，分解后形成二氧化氮自由基和氫氧化鈉自由基，加速了細(xì)胞膜的脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，對(duì)心肌收縮功能造成嚴(yán)重?fù)p害。本次研究中，通過(guò)給予藥物組大鼠不同劑量的銀杏葉提取物藥劑，結(jié)果表明，實(shí)驗(yàn)組大鼠心肌一氧化氮水平較對(duì)照組大鼠明顯降低，差異具有顯著性（P＜0.05），有效的抑制了一氧化氮同氧氣結(jié)合生成自由基的過(guò)程，從而降低對(duì)心肌細(xì)胞的損害。

本次研究結(jié)果表明，藥物1組、藥物2組、藥物3組大鼠心肌組織丙二醛及一氧化氮水平的降低幅度并未同藥劑濃度呈正相關(guān)關(guān)系，其中以50mg/kg組降低水平最為明顯，明顯高于25mg/kg組，差異具有顯著性（P＜0.05），加大劑量后出現(xiàn)小幅度降低，兩組差異無(wú)顯著性（P＞0.05）。其主要原因在于銀杏葉提取物發(fā)揮作用主要是通過(guò)同心肌細(xì)胞膜上的受體進(jìn)行相互結(jié)合，由于受體數(shù)量存在限制，因此當(dāng)達(dá)到一定濃度后會(huì)發(fā)生“飽和現(xiàn)象”，導(dǎo)致加大劑量無(wú)法有效的進(jìn)一步增進(jìn)療效，這提示我們?cè)谂R床用藥時(shí)，應(yīng)充分考慮銀杏葉提取物的這一性質(zhì)，針對(duì)患者的具體情況給予其適當(dāng)濃度藥物，避免給藥過(guò)剩。

相關(guān)研究表明，銀杏葉提取物除具有清除氧自由基作用外，還具有一定的拮抗作用及抑制白細(xì)胞活化效果。研究顯示，心肌缺血再灌注會(huì)引起機(jī)體血小板激活因子和白細(xì)胞水平異常升高，造成血管的通透性增強(qiáng)，引起心肌收縮力和心輸出流量的下降，造成舒張功能障礙，進(jìn)一步導(dǎo)致心肌損傷。通過(guò)給予實(shí)驗(yàn)對(duì)象一定劑量的銀杏葉提取物，機(jī)體血小板激活因子及白細(xì)胞水平明顯降低，其主要作用機(jī)制仍需進(jìn)行深入研究。

綜上所述，銀杏葉提取物能夠有效的降低心肌缺血再灌注對(duì)心肌功能造成的損害，能夠起到預(yù)防心肌缺血再灌注損傷的作用，其中發(fā)揮主要效果的為銀杏葉提取物的清除氧自由基作用，一方面直接降低心肌組織丙二醛水平，另一方面通過(guò)抑制心肌一氧化氮水平來(lái)間接抑制氧自由基的產(chǎn)生，但是需要注意的是，銀杏葉提取物的心肌保護(hù)作用同藥物劑量之間并無(wú)明顯的正相關(guān)關(guān)系，對(duì)于其同心肌細(xì)胞的具體作用機(jī)制仍需進(jìn)一步的研究。

[1]朱蓉，冉珂，常業(yè)恬，等.銀杏葉提取物后處理對(duì)兔心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用[J].醫(yī)學(xué)臨床研究，2012,29(1):96-98.

[2]李靜玲，林小鳳，馮鵬，等.銀杏葉提取物保護(hù)心肌缺血再灌注損傷的研究進(jìn)展[J].臨床合理用藥雜志，2013,6(25):180-181.

[3]謝咪雪，蔣琦，陳冬兒，等.銀杏葉提取物對(duì)心肌缺血再灌注損傷保護(hù)作用的研究進(jìn)展[J].浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2012,36(2):230-232.

[4]鄭曉鑄，劉凱，夏燕飛，等.銀杏葉提取物在體外循環(huán)心內(nèi)直視手術(shù)中對(duì)心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用[J].中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)生，2010(28):26-27.

[5]秦智剛，艾玲，羅愛(ài)林，等.右美托咪定對(duì)體外循環(huán)下心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)效應(yīng)[J].華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2013,42(5):551-554.

[6]簡(jiǎn)文亭，簡(jiǎn)道林，馬會(huì)改.迷走神經(jīng)刺激在心肌缺血再灌注損傷中的研究進(jìn)展[J].廣東醫(yī)學(xué)，2013,34(12):1938-1940.