于輝

（承德護(hù)理職業(yè)學(xué)院，河北 承德 067000）

中藥化學(xué)成分的液質(zhì)聯(lián)用鑒定法探討

于輝

（承德護(hù)理職業(yè)學(xué)院，河北 承德 067000）

目的研究采用液質(zhì)聯(lián)用法鑒定中藥化學(xué)成分。方法用2種方法對86種中藥的化學(xué)成分進(jìn)行鑒定。觀察組采用液質(zhì)聯(lián)用方法，對照組采用色譜法。對比2組鑒定方法的檢測效果、準(zhǔn)確率以及鑒定時間等。結(jié)果觀察組優(yōu)者占比76.74%（66／86），優(yōu)良率為90.70%（78／86），均顯著高于對照組（P＜0.05）。觀察組成功鑒定83例，成功率為96.51%，顯著高于對照組（P＜0.05）。觀察組鑒定時長、校正后保留時間誤差均顯著少于對照組（P＜0.05）。結(jié)論液質(zhì)聯(lián)用法鑒定中藥化學(xué)成分準(zhǔn)確率高，鑒定時間短，適應(yīng)范圍廣。

中藥；化學(xué)成分；液質(zhì)聯(lián)用；鑒定法

1.2 研究方法

1.2.1 基本過程 觀察組采用液質(zhì)聯(lián)用方法鑒定。確定86種中藥的原植物來源，盡可能把該植物已知的化學(xué)成分結(jié)構(gòu)、質(zhì)譜數(shù)據(jù)、UV數(shù)據(jù)收集完全。必要時收集整個屬的化學(xué)成分的相關(guān)數(shù)據(jù)。進(jìn)行LC-MS正負(fù)離子切換一級質(zhì)譜檢測，確定分子量。結(jié)合DAD所得紫外圖譜特征，確定化合物大概類型。進(jìn)行多級質(zhì)譜檢測，根據(jù)裂解碎片，確定分子中可能含有的碎片，結(jié)合分子量和生源，盡量歸屬化合物［3］。做其他高分辨率質(zhì)譜檢測，得到分子式。采用反應(yīng)質(zhì)譜法得到立體異構(gòu)體。根據(jù)初步鑒定結(jié)果，對照化合物標(biāo)準(zhǔn)品。對照組采用傳統(tǒng)鑒定方法。對照86種中藥的標(biāo)準(zhǔn)品，將被測定成分和標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行色譜分析，獲得Rf值或保留時間、混熔點(diǎn)、紅外光譜、分子量，總結(jié)鑒定成功率。

1.2.2 樣品溶液的配置 采用精密儀器稱取一定量對照品，以甲醇為溶液配制成單位為1 g／L的標(biāo)準(zhǔn)溶液，各取等量的

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS13.0軟件進(jìn)行分析。正態(tài)計量數(shù)據(jù)采用“x±s”表示，比較以χ2檢驗(yàn)。計數(shù)數(shù)據(jù)用率表示，行t檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2組鑒定效果對比 觀察組鑒定效果為優(yōu)者占比76.74%，優(yōu)良率為 90.70%（78／86），均明顯高于對照組的48.84%，69.77%，優(yōu)良率提高了20.93%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。提示對于中藥化學(xué)成分鑒定，液質(zhì)聯(lián)用能夠提高鑒定效果，具有重要意義（見表1）。標(biāo)準(zhǔn)溶液配置成一樣的混標(biāo)溶液［4］。再取各中藥成份配制成校正標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.2.3 建立質(zhì)譜庫 以其中一根色譜柱為標(biāo)準(zhǔn)色譜柱，收集各標(biāo)準(zhǔn)品圖譜，提取各標(biāo)準(zhǔn)品保留時間和質(zhì)譜信息，以一定的模式建立標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜庫。在正負(fù)離子模式下分別采集標(biāo)準(zhǔn)品建立質(zhì)譜庫［5］。

1.2.4 樣本成份鑒定 用標(biāo)準(zhǔn)品溶液校正，通過校正得到適用于當(dāng)前色譜柱的質(zhì)譜庫。采集樣品圖譜，利用軟件進(jìn)行質(zhì)譜庫檢索和成份鑒定。

1.3 鑒定效果評價［6］優(yōu)：鑒定中藥化學(xué)成份準(zhǔn)確率明顯提高，鑒定耗時大幅度減少，分離提純精準(zhǔn)率明顯提高，適應(yīng)范圍顯著增加。良：鑒定中藥化學(xué)成份準(zhǔn)確率有所提高，鑒定耗時有所減少，分離提純精準(zhǔn)率有所提高，適應(yīng)范圍有所增加?？桑鸿b定中藥化學(xué)成份準(zhǔn)確率沒有提高，鑒定耗時幾乎不變，分離提純精準(zhǔn)率無變化，適應(yīng)范圍無增加。差：鑒定中藥化學(xué)成份準(zhǔn)確率降低，鑒定耗時增加，分離提純精準(zhǔn)率下降，適應(yīng)范圍縮小。優(yōu)良率為優(yōu)占比率與良占比率之和。

表1 2組鑒定效果對比［n（%）］Tab.1 Comparision of identification effect between two groups［n（%）］

2.2 2組成功率對比 觀察組成功鑒定83例，成功率為96.51%，顯著高于對照組的67例，成功率高出18.60%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。提示液質(zhì)聯(lián)用方法鑒定中藥化學(xué)成分可以有效提高成功率。

2.3 2組鑒定時長和保留時間誤差對比 觀察組鑒定時長為（79.52±6.15）min，校正后保留時間誤差為（0.12±0.004）min，均顯著少于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。提示相對于傳統(tǒng)鑒定方法，液質(zhì)聯(lián)用方法鑒定中藥化學(xué)成分可以減少鑒定時間，還可以減小保留時間誤差，具有積極意義（見表2）。

表2 2組鑒定時長與保留時間誤差對比（min）Tab.2 Comparision of identification time and retention time error between two groups（min）

3 討論

中藥是中國傳統(tǒng)中醫(yī)特有的藥物，是我國勞動人民幾千年來不斷實(shí)踐、認(rèn)識和積累的智慧結(jié)晶。為了傳播中醫(yī)藥，讓世界各地接受和使用中醫(yī)藥，中醫(yī)藥的現(xiàn)代化研究至關(guān)重要。中藥是一個十分復(fù)雜的化學(xué)體系，成份繁多，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，性質(zhì)相似［7］。作為基礎(chǔ)的中藥化學(xué)成分研究，需要準(zhǔn)確快速對中藥化學(xué)成份進(jìn)行提取、分離和鑒定。目前常用的儀器是高效液相色譜儀器，但是該儀器需要與DVD檢測器連接起來使用。這種方法只能夠?yàn)檠芯刻峁﹩蝹€色譜峰的保留時間和紫外圖譜等，卻幾乎不能提供未知成份的信息。液質(zhì)聯(lián)用將高效液相色譜的高分離效能與質(zhì)譜的靈敏結(jié)構(gòu)測定結(jié)合，可以快速、準(zhǔn)確的鑒定中藥化學(xué)成分，增強(qiáng)了實(shí)用價值［8］。因?yàn)橐嘿|(zhì)聯(lián)用不僅能夠分析氣相色譜－質(zhì)譜所不能分析的極強(qiáng)性、難揮發(fā)、熱不穩(wěn)定性化合物之外，分析范圍廣，MS幾乎可以檢測所有的化合物，比較容易地解決了分析熱不穩(wěn)定化合物的難題；且具有分離能力強(qiáng)、定性分析結(jié)果可靠、檢測限低、靈敏度高、分析時間快、自動化程度高等特點(diǎn)。隨著科技不斷進(jìn)步，質(zhì)譜信息庫的越來越完善，液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)將推動中醫(yī)藥的發(fā)展和傳承，使中醫(yī)藥更加現(xiàn)代化和國際化。

本文通過對比液質(zhì)聯(lián)用法以及傳統(tǒng)方法對中藥化學(xué)成分鑒定的效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，觀察組療效為優(yōu)者占比76.74%（66／86），優(yōu)良率為90.70%（78／86），均顯著高于對照組。提示對于中藥化學(xué)成分鑒定，液質(zhì)聯(lián)用能夠提高鑒定效果，具有重要意義。此外，觀察組鑒定成功率為96.51%，比對照組成功率高出18.60%。與屠鵬飛等［9］報道一致，提示液質(zhì)聯(lián)用方法鑒定中藥化學(xué)成分可以有效提高成功率。但也有結(jié)果不同的報道，如張加余與許玲玲等人的報道，其內(nèi)容反映出利用液質(zhì)聯(lián)用的方法成功率并未顯著提高，實(shí)驗(yàn)結(jié)果也相對不明顯，其利用價值也為得到充分體現(xiàn)［10-11］。另外，觀察組鑒定時長、校正后保留時間誤差均顯著少于對照組。陳士林等［12］也有過類似報道，提示相對于傳統(tǒng)鑒定方法，液質(zhì)聯(lián)用方法鑒定中藥化學(xué)成分可以減少鑒定時間，還可以減小保留時間誤差，具有積極意義。

綜上所述，用液質(zhì)聯(lián)用法鑒定中藥化學(xué)成分，不僅可以提高鑒定效率，還可以提高鑒定的準(zhǔn)確率，應(yīng)該在中藥現(xiàn)代化研究上推廣。

［1］錢葉飛，尚爾鑫，段金廒，等.基于液質(zhì)聯(lián)用數(shù)據(jù)庫技術(shù)的中藥及天然產(chǎn)物化學(xué)成分快速鑒定方法的建立［J］.中國中藥雜志，2012，21（1）：3256-3263.

［2］WANG YueSi，YAO Li，WANG LiLi，etal.Mechanism for the formation of the January 2013 heavy haze pollution episode over central and eastern China［J］.Science China（Earth Sciences），2014，1（2）：14-25.

［3］宋麗，王少云，聶磊，等.中藥炮制質(zhì)量分析方法與藥效評價研究進(jìn)展［J］.中藥材，2013，1（2）：151-156.

［4］魏文峰，王昶，張樹明，等.串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)在中藥化學(xué)成分分析中的應(yīng)用研究進(jìn)展［J］.中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013，14（2）：351-354.

［5］LI JunHai，YU NanJia，ZENG Peng，et al.Design and integrated simulation of a pressurized feed system of the dual-thrust hybrid rocket motor［J］.Science China（Technological Sciences），2013，4（2）：989-1000.

［6］王宇歆，劉洪斌，李東華，等.液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在中藥研究中的應(yīng)用進(jìn)展［J］.中國中西醫(yī)結(jié)合外科雜志，2011，4（3）：444-446.

［7］唐學(xué)紅，肖先舉.高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在藥物分析中的應(yīng)用［J］.當(dāng)代化工，2011，40（9）：988-990.

［8］《中南藥學(xué)》2011年第9卷關(guān)鍵詞索引［J］.中南藥學(xué)，2011，12（2）：944-960.

［9］屠鵬飛，史社坡，姜勇，等.中藥物質(zhì)基礎(chǔ)研究思路與方法［J］.中草藥，2012，43（2）：209-215.

［10］張加余，喬延江，張倩，等.液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)在天然產(chǎn)物結(jié)構(gòu)鑒定中的應(yīng)用進(jìn)展［J］.藥物分析雜志，2013，2（6）：349-354.

［11］許玲玲，安睿，王新宏.液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)在中藥分析中的應(yīng)用［J］.中成藥，2006，2（7）：239-246.

［12］陳士林，郭寶林，張貴君，等.中藥鑒定學(xué)新技術(shù)新方法研究進(jìn)展［J］.中國中藥雜志，2012，8（2）：1043-1055.

（編校：吳茜）

Identification of chem ical composition in traditional Chinesemedicine by liquid chromatography-mass spectrometry

YU Hui

（Chengde Nursing Vocational College，Chengde 067000，China）

ObjectiveTo identify the chemical components of traditional Chinesemedicine by liquid chromatography-mass spectrometry.MethodsChemical components of86 traditional Chinesemedicineswere identified by twomethods，observation group with LC-MSmethod and control group with traditional LCmethods.The identification efficacy，accuracy，and identification time between twomethodswere compared.ResultsThe excellent rate in observation group was76.74% （66／86），the excellentand good ratewas90.70% （78／86），which were significantly higher than those in controlgroup（P＜0.05）.83 kinds of traditional Chinese medicine were successfully identified in observation group，the success rate was 96.51%，significantly higher than control group（P＜0.05）.The identification tine，retention time after correction of errors in observation group were significantly less than control group（P＜0.05）.ConclusionLC-MS has high accuracy，short identification time and wide adaptation range in identification of chemical components of traditional Chinesemedicine.

Chinesemedicine；chemical components；LC-MS；identificationmethod

R284.1

A

1005－1678（2014）04－0172－03

目前，對于中藥的研究，人們提出中藥現(xiàn)代化的理論，即用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)，研制開發(fā)現(xiàn)代中藥制劑，闡明其藥效物質(zhì)和作用機(jī)制，最終實(shí)現(xiàn)大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)，為國際市場接受并形成具有國際競爭力的新藥產(chǎn)品［1］。為達(dá)到中藥現(xiàn)代化，中藥化學(xué)成分研究是基礎(chǔ)研究之一，有著重要的地位。雖然常用的中藥已經(jīng)基本了解了其有效化學(xué)成分，但這些信息比較雜亂，反而為研究帶來了不便［2］。鑒于此，本文通過使用液質(zhì)聯(lián)用的方法來鑒定中藥化學(xué)成分，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料 Waters ACQUITY UPLC超高效液相色譜系統(tǒng)（沃特世科技有限公司），Sequenom質(zhì)譜系統(tǒng)（晶能生物技術(shù)有限公司），質(zhì)譜工作站，EasyQ-A純水超純水一體機(jī)（上海博飲環(huán)?？萍加邢薰荆?，電子天平，標(biāo)準(zhǔn)對照品，86種中藥材料，如桃葉珊瑚苷、橙皮苷、槲皮素等購自中國藥品生物制品鑒定所，延胡索乙素、芍藥苷、甘草利酮、甘草苷等為實(shí)驗(yàn)室自制，純度按HPLC面積歸一化法＞98%。

于輝，女，本科，副教授，研究方向：中草藥化學(xué)成分分析研究，E-mail：yh20061＠163.com。