劉暢

摘要按照《國(guó)家環(huán)境污染物監(jiān)測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)制修訂技術(shù)導(dǎo)則（HJ168-2010）》的規(guī)定，確立分光光度法測(cè)定水中葉綠素a的特性指標(biāo)，為本方法國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的制定提供依據(jù)。結(jié)果表明：方法的檢出限為0.094 mg/m3，精密度為5.87%~9.84%，空白加標(biāo)回收率為83.8%~92.0%，實(shí)際樣品加標(biāo)回收率為80.2%~87.0%。同時(shí)提出試驗(yàn)過程中的注意事項(xiàng)和關(guān)鍵點(diǎn)。

關(guān)鍵詞分光光度法；葉綠素a；測(cè)定方法；特性指標(biāo)；注意事項(xiàng)

中圖分類號(hào)O657.31文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào) 1007-5739（2014）11-0238-01

ResearchonDeterminationofChlorophyllainWaterbySpectrophotometricMethod

LIU Chang

（Liaoning Environment Monitoring Center，Shenyang Liaoning 110161）

AbstractAccording to the Technical Guidelines for Development and Revision of National Environmental Monitoring Methods and Standards（HJ168-2010），characteristic factors of Chlorophyll a determinated by Spectrophotometric method was established which providing basis for the establishment of the national standard. The results were as follows：The detection limit and relative standard deviation were 0.094 mg/m3 and 5.87%~9.84%，respectively，and the blank standard addition recovery and the sample standard addition recovery were 83.8%~92.0% and 80.2%~87.0%，respectively.The points for attention and the key points were provided.

Key wordsspectrophotometric method；Chlorophyll a；detection method；characteristic factors；points for attention

葉綠素a是評(píng)價(jià)湖泊富營(yíng)養(yǎng)化的重要參數(shù)[1]，我國(guó)尚無國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)分析方法，目前葉綠素a監(jiān)測(cè)的主要依據(jù)是《水和廢水監(jiān)測(cè)分析方法（第四版）》[2]中的分光光度法，該方法是B類方法，經(jīng)過國(guó)內(nèi)的研究和多個(gè)單位的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證表明是成熟的統(tǒng)一方法，有待上升為國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)分析方法，但該方法未明確檢出限、精密度和準(zhǔn)確度等一系列方法特性指標(biāo)，本文以《國(guó)家環(huán)境污染物監(jiān)測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)制修訂技術(shù)導(dǎo)則（HJ168-2010）》[3]為依據(jù)，通過試驗(yàn)確立本方法的特性指標(biāo)，并結(jié)合日常工作經(jīng)驗(yàn)提出本方法試驗(yàn)過程中的注意事項(xiàng)和關(guān)鍵點(diǎn)，為國(guó)標(biāo)方法的建立以及分析人員的日常檢測(cè)工作提供參考。

1材料與方法

1.1儀器與試劑

儀器：紫外-可見分光光度計(jì)、離心機(jī)、抽濾裝置、研缽、0.45 μm乙酸纖維濾膜。試劑：葉綠素a標(biāo)準(zhǔn)品（CAS NO：479-61-8）、90%丙酮溶液、碳酸鎂粉末。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1過濾。在抽濾器上裝好乙酸纖維濾膜。倒入定量體積的水樣進(jìn)行抽濾，抽濾時(shí)負(fù)壓不能過大（約為50 kPa）。水樣抽完后，繼續(xù)抽1～2 min，以減少濾膜上的水分，該過程需在避光條件下完成[4-5]。

1.2.2提取。將濾膜放入研缽中，加入少量碳酸鎂粉末及2~3 mL 90%丙酮，充分研磨，提取葉綠素a。用離心機(jī)（3 000~4 000 r/min）離心10 min（可根據(jù)樣品的濃度和濁度適當(dāng)延長(zhǎng)離心時(shí)間），將上清液倒入10 mL容量瓶中，再加2~3 mL 90%丙酮，繼續(xù)研磨提取，離心10 min，并將上清液再轉(zhuǎn)入容量瓶中，重復(fù)1~2次，用90%丙酮定容為10 mL，搖勻。

1.2.3測(cè)定。取上清液于1 cm光程的比色皿，分別讀取750、663、645、630 nm波長(zhǎng)的吸光度，并以90%的丙酮作空白吸光度測(cè)定，對(duì)樣品吸光度進(jìn)行校正。

2結(jié)果與分析

2.1檢出限

按照HJ168-2010[3]的規(guī)定，對(duì)葉綠素a濃度為0.5 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算7次平行測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)偏差，按照下式計(jì)算方法檢出限：

MDL=t（n-1，0.99）×S

式中：MDL為檢出限；n為樣品的平行測(cè)定次數(shù)；t為自由度為n-1且置信度為99%時(shí)的t分布（單側(cè)）（n=7時(shí)，t=3.143）；S為n次平行測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)偏差。

結(jié)果表明，7次測(cè)定結(jié)果分別為0.455、0.408、0.437、0.361、0.417、0.434、0.424 mg/L，標(biāo)準(zhǔn)偏差（S）為0.030，檢出限為0.094 mg/L。因此，葉綠素a的檢出限為0.094 mg/L，當(dāng)提取液定容體積為10 mL，水樣量為1 000 mL時(shí)，葉綠素a 的檢出限為0.94 mg/m3。

2.2準(zhǔn)確度

由于目前沒有葉綠素a的標(biāo)準(zhǔn)樣品，因此以加標(biāo)回收率考察方法的準(zhǔn)確性[6]。本試驗(yàn)分別以空白加標(biāo)和實(shí)際樣品加標(biāo)對(duì)方法的準(zhǔn)確度進(jìn)行考察，加標(biāo)方法為對(duì)實(shí)際樣品抽濾后，在研磨濾膜時(shí)加入葉綠素a標(biāo)液，按照樣品分析的全過程進(jìn)行分析，空白加標(biāo)以純水代替實(shí)際樣品，其余操作過程與實(shí)際樣品相同，測(cè)定結(jié)果見表1。結(jié)果表明：空白樣品的加標(biāo)回收率為83.8%~92.0%，實(shí)際樣品的加標(biāo)回收率為80.2%~87.0%，該方法的加標(biāo)回收率較低，主要是因?yàn)檠心ミ^程中葉綠素a的損失較大，如何減少損失、提高樣品分析的準(zhǔn)確性將有待進(jìn)一步研究。

2.3精密度

對(duì)不同濃度的實(shí)際樣品平行測(cè)定6次，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，考察方法的精密度，測(cè)定結(jié)果見表2。從測(cè)定結(jié)果可以看出，該方法的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為5.87%~9.84%。

3結(jié)論與討論

試驗(yàn)結(jié)果表明，本方法的檢出限為0.094 mg/m3，空白加標(biāo)回收率為83.8%~92.0%，實(shí)際樣品加標(biāo)回收率為80.2%~87.0%，精密度為5.87%~9.84%。據(jù)此提出試驗(yàn)過程中的注意事項(xiàng)和關(guān)鍵點(diǎn)：一是樣品過濾前需充分搖勻，以免產(chǎn)生誤差；二是使用的玻璃器皿和比色皿均應(yīng)清潔、干燥、無酸，不要用酸浸泡或洗滌；三是如波長(zhǎng)750 nm處的吸光度大于0.005，應(yīng)將溶液再次（或多次）充分離心后測(cè)定吸光度，需要多次離心時(shí)，不可用原離心管繼續(xù)離心，需將溶液轉(zhuǎn)移至清潔干燥離心管中；四是因?yàn)槿~綠素提取液對(duì)光敏感，故整個(gè)試驗(yàn)過程要盡量在微弱的光照下進(jìn)行。

4參考文獻(xiàn)

[1] 屠清英.湖泊富營(yíng)養(yǎng)化調(diào)查規(guī)范[M].2版.北京：中國(guó)環(huán)境科學(xué)出版社，1990：268-270.

[2] 國(guó)家環(huán)境保護(hù)總局.水和廢水監(jiān)側(cè)分析方法[M].4版.北京：中國(guó)環(huán)境科學(xué)出版社，2002：670.

[3] HJ 168-2010環(huán)境監(jiān)測(cè)分析方法標(biāo)準(zhǔn)制修訂技術(shù)導(dǎo)則[S].北京：中國(guó)環(huán)境科學(xué)出版社，2010.

[4] 高岐，趙旭光，譚煜媚.分光光度法測(cè)定-超聲波提取植物韭菜中葉綠素含量的研究[J].食品工業(yè)科技，2007（8）：166-167.

[5] 湯燦輝，黃潔，肖美鳳，等.淺談?dòng)梅止夤舛确y(cè)定蟲茶中葉綠素的含量[J].求醫(yī)問藥，2012，10（11）：873-874.

[6] 周靜，胡忠軍，李培培，等.基于葉綠素a測(cè)定的分光光度法與bbe法比較：以千島湖為例[J].水生態(tài)學(xué)雜志，2013，34（2）：80-84.

摘要按照《國(guó)家環(huán)境污染物監(jiān)測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)制修訂技術(shù)導(dǎo)則（HJ168-2010）》的規(guī)定，確立分光光度法測(cè)定水中葉綠素a的特性指標(biāo)，為本方法國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的制定提供依據(jù)。結(jié)果表明：方法的檢出限為0.094 mg/m3，精密度為5.87%~9.84%，空白加標(biāo)回收率為83.8%~92.0%，實(shí)際樣品加標(biāo)回收率為80.2%~87.0%。同時(shí)提出試驗(yàn)過程中的注意事項(xiàng)和關(guān)鍵點(diǎn)。

關(guān)鍵詞分光光度法；葉綠素a；測(cè)定方法；特性指標(biāo)；注意事項(xiàng)

中圖分類號(hào)O657.31文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào) 1007-5739（2014）11-0238-01

ResearchonDeterminationofChlorophyllainWaterbySpectrophotometricMethod

LIU Chang

（Liaoning Environment Monitoring Center，Shenyang Liaoning 110161）

AbstractAccording to the Technical Guidelines for Development and Revision of National Environmental Monitoring Methods and Standards（HJ168-2010），characteristic factors of Chlorophyll a determinated by Spectrophotometric method was established which providing basis for the establishment of the national standard. The results were as follows：The detection limit and relative standard deviation were 0.094 mg/m3 and 5.87%~9.84%，respectively，and the blank standard addition recovery and the sample standard addition recovery were 83.8%~92.0% and 80.2%~87.0%，respectively.The points for attention and the key points were provided.

Key wordsspectrophotometric method；Chlorophyll a；detection method；characteristic factors；points for attention

葉綠素a是評(píng)價(jià)湖泊富營(yíng)養(yǎng)化的重要參數(shù)[1]，我國(guó)尚無國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)分析方法，目前葉綠素a監(jiān)測(cè)的主要依據(jù)是《水和廢水監(jiān)測(cè)分析方法（第四版）》[2]中的分光光度法，該方法是B類方法，經(jīng)過國(guó)內(nèi)的研究和多個(gè)單位的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證表明是成熟的統(tǒng)一方法，有待上升為國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)分析方法，但該方法未明確檢出限、精密度和準(zhǔn)確度等一系列方法特性指標(biāo)，本文以《國(guó)家環(huán)境污染物監(jiān)測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)制修訂技術(shù)導(dǎo)則（HJ168-2010）》[3]為依據(jù)，通過試驗(yàn)確立本方法的特性指標(biāo)，并結(jié)合日常工作經(jīng)驗(yàn)提出本方法試驗(yàn)過程中的注意事項(xiàng)和關(guān)鍵點(diǎn)，為國(guó)標(biāo)方法的建立以及分析人員的日常檢測(cè)工作提供參考。

1材料與方法

1.1儀器與試劑

儀器：紫外-可見分光光度計(jì)、離心機(jī)、抽濾裝置、研缽、0.45 μm乙酸纖維濾膜。試劑：葉綠素a標(biāo)準(zhǔn)品（CAS NO：479-61-8）、90%丙酮溶液、碳酸鎂粉末。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1過濾。在抽濾器上裝好乙酸纖維濾膜。倒入定量體積的水樣進(jìn)行抽濾，抽濾時(shí)負(fù)壓不能過大（約為50 kPa）。水樣抽完后，繼續(xù)抽1～2 min，以減少濾膜上的水分，該過程需在避光條件下完成[4-5]。

1.2.2提取。將濾膜放入研缽中，加入少量碳酸鎂粉末及2~3 mL 90%丙酮，充分研磨，提取葉綠素a。用離心機(jī)（3 000~4 000 r/min）離心10 min（可根據(jù)樣品的濃度和濁度適當(dāng)延長(zhǎng)離心時(shí)間），將上清液倒入10 mL容量瓶中，再加2~3 mL 90%丙酮，繼續(xù)研磨提取，離心10 min，并將上清液再轉(zhuǎn)入容量瓶中，重復(fù)1~2次，用90%丙酮定容為10 mL，搖勻。

1.2.3測(cè)定。取上清液于1 cm光程的比色皿，分別讀取750、663、645、630 nm波長(zhǎng)的吸光度，并以90%的丙酮作空白吸光度測(cè)定，對(duì)樣品吸光度進(jìn)行校正。

2結(jié)果與分析

2.1檢出限

按照HJ168-2010[3]的規(guī)定，對(duì)葉綠素a濃度為0.5 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算7次平行測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)偏差，按照下式計(jì)算方法檢出限：

MDL=t（n-1，0.99）×S

式中：MDL為檢出限；n為樣品的平行測(cè)定次數(shù)；t為自由度為n-1且置信度為99%時(shí)的t分布（單側(cè)）（n=7時(shí)，t=3.143）；S為n次平行測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)偏差。

結(jié)果表明，7次測(cè)定結(jié)果分別為0.455、0.408、0.437、0.361、0.417、0.434、0.424 mg/L，標(biāo)準(zhǔn)偏差（S）為0.030，檢出限為0.094 mg/L。因此，葉綠素a的檢出限為0.094 mg/L，當(dāng)提取液定容體積為10 mL，水樣量為1 000 mL時(shí)，葉綠素a 的檢出限為0.94 mg/m3。

2.2準(zhǔn)確度

由于目前沒有葉綠素a的標(biāo)準(zhǔn)樣品，因此以加標(biāo)回收率考察方法的準(zhǔn)確性[6]。本試驗(yàn)分別以空白加標(biāo)和實(shí)際樣品加標(biāo)對(duì)方法的準(zhǔn)確度進(jìn)行考察，加標(biāo)方法為對(duì)實(shí)際樣品抽濾后，在研磨濾膜時(shí)加入葉綠素a標(biāo)液，按照樣品分析的全過程進(jìn)行分析，空白加標(biāo)以純水代替實(shí)際樣品，其余操作過程與實(shí)際樣品相同，測(cè)定結(jié)果見表1。結(jié)果表明：空白樣品的加標(biāo)回收率為83.8%~92.0%，實(shí)際樣品的加標(biāo)回收率為80.2%~87.0%，該方法的加標(biāo)回收率較低，主要是因?yàn)檠心ミ^程中葉綠素a的損失較大，如何減少損失、提高樣品分析的準(zhǔn)確性將有待進(jìn)一步研究。

2.3精密度

對(duì)不同濃度的實(shí)際樣品平行測(cè)定6次，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，考察方法的精密度，測(cè)定結(jié)果見表2。從測(cè)定結(jié)果可以看出，該方法的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為5.87%~9.84%。

3結(jié)論與討論

試驗(yàn)結(jié)果表明，本方法的檢出限為0.094 mg/m3，空白加標(biāo)回收率為83.8%~92.0%，實(shí)際樣品加標(biāo)回收率為80.2%~87.0%，精密度為5.87%~9.84%。據(jù)此提出試驗(yàn)過程中的注意事項(xiàng)和關(guān)鍵點(diǎn)：一是樣品過濾前需充分搖勻，以免產(chǎn)生誤差；二是使用的玻璃器皿和比色皿均應(yīng)清潔、干燥、無酸，不要用酸浸泡或洗滌；三是如波長(zhǎng)750 nm處的吸光度大于0.005，應(yīng)將溶液再次（或多次）充分離心后測(cè)定吸光度，需要多次離心時(shí)，不可用原離心管繼續(xù)離心，需將溶液轉(zhuǎn)移至清潔干燥離心管中；四是因?yàn)槿~綠素提取液對(duì)光敏感，故整個(gè)試驗(yàn)過程要盡量在微弱的光照下進(jìn)行。

4參考文獻(xiàn)

[1] 屠清英.湖泊富營(yíng)養(yǎng)化調(diào)查規(guī)范[M].2版.北京：中國(guó)環(huán)境科學(xué)出版社，1990：268-270.

[2] 國(guó)家環(huán)境保護(hù)總局.水和廢水監(jiān)側(cè)分析方法[M].4版.北京：中國(guó)環(huán)境科學(xué)出版社，2002：670.

[3] HJ 168-2010環(huán)境監(jiān)測(cè)分析方法標(biāo)準(zhǔn)制修訂技術(shù)導(dǎo)則[S].北京：中國(guó)環(huán)境科學(xué)出版社，2010.

[4] 高岐，趙旭光，譚煜媚.分光光度法測(cè)定-超聲波提取植物韭菜中葉綠素含量的研究[J].食品工業(yè)科技，2007（8）：166-167.

[5] 湯燦輝，黃潔，肖美鳳，等.淺談?dòng)梅止夤舛确y(cè)定蟲茶中葉綠素的含量[J].求醫(yī)問藥，2012，10（11）：873-874.

[6] 周靜，胡忠軍，李培培，等.基于葉綠素a測(cè)定的分光光度法與bbe法比較：以千島湖為例[J].水生態(tài)學(xué)雜志，2013，34（2）：80-84.

摘要按照《國(guó)家環(huán)境污染物監(jiān)測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)制修訂技術(shù)導(dǎo)則（HJ168-2010）》的規(guī)定，確立分光光度法測(cè)定水中葉綠素a的特性指標(biāo)，為本方法國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的制定提供依據(jù)。結(jié)果表明：方法的檢出限為0.094 mg/m3，精密度為5.87%~9.84%，空白加標(biāo)回收率為83.8%~92.0%，實(shí)際樣品加標(biāo)回收率為80.2%~87.0%。同時(shí)提出試驗(yàn)過程中的注意事項(xiàng)和關(guān)鍵點(diǎn)。

關(guān)鍵詞分光光度法；葉綠素a；測(cè)定方法；特性指標(biāo)；注意事項(xiàng)

中圖分類號(hào)O657.31文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào) 1007-5739（2014）11-0238-01

ResearchonDeterminationofChlorophyllainWaterbySpectrophotometricMethod

LIU Chang

（Liaoning Environment Monitoring Center，Shenyang Liaoning 110161）

AbstractAccording to the Technical Guidelines for Development and Revision of National Environmental Monitoring Methods and Standards（HJ168-2010），characteristic factors of Chlorophyll a determinated by Spectrophotometric method was established which providing basis for the establishment of the national standard. The results were as follows：The detection limit and relative standard deviation were 0.094 mg/m3 and 5.87%~9.84%，respectively，and the blank standard addition recovery and the sample standard addition recovery were 83.8%~92.0% and 80.2%~87.0%，respectively.The points for attention and the key points were provided.

Key wordsspectrophotometric method；Chlorophyll a；detection method；characteristic factors；points for attention

葉綠素a是評(píng)價(jià)湖泊富營(yíng)養(yǎng)化的重要參數(shù)[1]，我國(guó)尚無國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)分析方法，目前葉綠素a監(jiān)測(cè)的主要依據(jù)是《水和廢水監(jiān)測(cè)分析方法（第四版）》[2]中的分光光度法，該方法是B類方法，經(jīng)過國(guó)內(nèi)的研究和多個(gè)單位的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證表明是成熟的統(tǒng)一方法，有待上升為國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)分析方法，但該方法未明確檢出限、精密度和準(zhǔn)確度等一系列方法特性指標(biāo)，本文以《國(guó)家環(huán)境污染物監(jiān)測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)制修訂技術(shù)導(dǎo)則（HJ168-2010）》[3]為依據(jù)，通過試驗(yàn)確立本方法的特性指標(biāo)，并結(jié)合日常工作經(jīng)驗(yàn)提出本方法試驗(yàn)過程中的注意事項(xiàng)和關(guān)鍵點(diǎn)，為國(guó)標(biāo)方法的建立以及分析人員的日常檢測(cè)工作提供參考。

1材料與方法

1.1儀器與試劑

儀器：紫外-可見分光光度計(jì)、離心機(jī)、抽濾裝置、研缽、0.45 μm乙酸纖維濾膜。試劑：葉綠素a標(biāo)準(zhǔn)品（CAS NO：479-61-8）、90%丙酮溶液、碳酸鎂粉末。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1過濾。在抽濾器上裝好乙酸纖維濾膜。倒入定量體積的水樣進(jìn)行抽濾，抽濾時(shí)負(fù)壓不能過大（約為50 kPa）。水樣抽完后，繼續(xù)抽1～2 min，以減少濾膜上的水分，該過程需在避光條件下完成[4-5]。

1.2.2提取。將濾膜放入研缽中，加入少量碳酸鎂粉末及2~3 mL 90%丙酮，充分研磨，提取葉綠素a。用離心機(jī)（3 000~4 000 r/min）離心10 min（可根據(jù)樣品的濃度和濁度適當(dāng)延長(zhǎng)離心時(shí)間），將上清液倒入10 mL容量瓶中，再加2~3 mL 90%丙酮，繼續(xù)研磨提取，離心10 min，并將上清液再轉(zhuǎn)入容量瓶中，重復(fù)1~2次，用90%丙酮定容為10 mL，搖勻。

1.2.3測(cè)定。取上清液于1 cm光程的比色皿，分別讀取750、663、645、630 nm波長(zhǎng)的吸光度，并以90%的丙酮作空白吸光度測(cè)定，對(duì)樣品吸光度進(jìn)行校正。

2結(jié)果與分析

2.1檢出限

按照HJ168-2010[3]的規(guī)定，對(duì)葉綠素a濃度為0.5 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算7次平行測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)偏差，按照下式計(jì)算方法檢出限：

MDL=t（n-1，0.99）×S

式中：MDL為檢出限；n為樣品的平行測(cè)定次數(shù)；t為自由度為n-1且置信度為99%時(shí)的t分布（單側(cè)）（n=7時(shí)，t=3.143）；S為n次平行測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)偏差。

結(jié)果表明，7次測(cè)定結(jié)果分別為0.455、0.408、0.437、0.361、0.417、0.434、0.424 mg/L，標(biāo)準(zhǔn)偏差（S）為0.030，檢出限為0.094 mg/L。因此，葉綠素a的檢出限為0.094 mg/L，當(dāng)提取液定容體積為10 mL，水樣量為1 000 mL時(shí)，葉綠素a 的檢出限為0.94 mg/m3。

2.2準(zhǔn)確度

由于目前沒有葉綠素a的標(biāo)準(zhǔn)樣品，因此以加標(biāo)回收率考察方法的準(zhǔn)確性[6]。本試驗(yàn)分別以空白加標(biāo)和實(shí)際樣品加標(biāo)對(duì)方法的準(zhǔn)確度進(jìn)行考察，加標(biāo)方法為對(duì)實(shí)際樣品抽濾后，在研磨濾膜時(shí)加入葉綠素a標(biāo)液，按照樣品分析的全過程進(jìn)行分析，空白加標(biāo)以純水代替實(shí)際樣品，其余操作過程與實(shí)際樣品相同，測(cè)定結(jié)果見表1。結(jié)果表明：空白樣品的加標(biāo)回收率為83.8%~92.0%，實(shí)際樣品的加標(biāo)回收率為80.2%~87.0%，該方法的加標(biāo)回收率較低，主要是因?yàn)檠心ミ^程中葉綠素a的損失較大，如何減少損失、提高樣品分析的準(zhǔn)確性將有待進(jìn)一步研究。

2.3精密度

對(duì)不同濃度的實(shí)際樣品平行測(cè)定6次，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，考察方法的精密度，測(cè)定結(jié)果見表2。從測(cè)定結(jié)果可以看出，該方法的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為5.87%~9.84%。

3結(jié)論與討論

試驗(yàn)結(jié)果表明，本方法的檢出限為0.094 mg/m3，空白加標(biāo)回收率為83.8%~92.0%，實(shí)際樣品加標(biāo)回收率為80.2%~87.0%，精密度為5.87%~9.84%。據(jù)此提出試驗(yàn)過程中的注意事項(xiàng)和關(guān)鍵點(diǎn)：一是樣品過濾前需充分搖勻，以免產(chǎn)生誤差；二是使用的玻璃器皿和比色皿均應(yīng)清潔、干燥、無酸，不要用酸浸泡或洗滌；三是如波長(zhǎng)750 nm處的吸光度大于0.005，應(yīng)將溶液再次（或多次）充分離心后測(cè)定吸光度，需要多次離心時(shí)，不可用原離心管繼續(xù)離心，需將溶液轉(zhuǎn)移至清潔干燥離心管中；四是因?yàn)槿~綠素提取液對(duì)光敏感，故整個(gè)試驗(yàn)過程要盡量在微弱的光照下進(jìn)行。

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