黃海深，周永均，何蘭香，李宇鳴，唐光定，陳國(guó)強(qiáng)（.清遠(yuǎn)市陽山縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東清遠(yuǎn) 5300；.清遠(yuǎn)市陽山縣疾控中心，廣東清遠(yuǎn) 5300）

原發(fā)性肝細(xì)胞癌（PLC）是最常見的惡性腫瘤之一，且病情進(jìn)展快，療效欠佳，病死率較高［1］。近年來，國(guó)內(nèi)PLC發(fā)病率呈明顯上升的趨勢(shì)。早期診治是PLC患者達(dá)到最佳治療效果的關(guān)鍵。甲胎蛋白（AFP）是當(dāng)前用于PLC早期診斷的最有價(jià)值的血清腫瘤標(biāo)志物，其診斷靈敏度較高，但診斷特異度相對(duì)較低，有可能導(dǎo)致部分除PLC以外的良性肝病患者也被診斷為PLC，給PLC的臨床診斷和鑒別診斷帶來一定的困難［2］。AFP存在多種異質(zhì)體，依據(jù)與小扁豆凝集素（LCA）親和力的不同，AFP異質(zhì)體可被分為非結(jié)合型（AFP－L1、AFP－L2）和結(jié)合型（AFP－L3）。其中AFP－Ll主要出現(xiàn)在良性肝臟疾病中（如慢性肝炎和肝硬化），AFP－L2多由卵黃囊腫癌組織產(chǎn)生，可在孕婦血清中檢出，AFP－L3則具有較高的肝癌細(xì)胞特異性［3］。已有研究證實(shí)，血清AFP－L3對(duì)PLC的診斷靈敏度和特異度均高于血清AFP，具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值［4］。筆者采用微量離心柱法檢測(cè)了200例PLC、肝硬化和慢性肝炎患者血清AFP和AFP－L3水平，以探討血清AFP－L3對(duì)PLC的臨床診斷價(jià)值，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2011年6至2012年10月于陽山縣人民醫(yī)院就診的PLC及其他肝病患者200例。其中PLC患者80例（PLC組），男58例、女22例，年齡28～71歲，平均（52.3±13.5）歲，均經(jīng)B超及病理學(xué)檢查確診，且符合1999年第四屆全國(guó)肝癌學(xué)術(shù)會(huì)議修訂的PLC診斷標(biāo)準(zhǔn)［5］；肝硬化患者66例（肝硬化組），男48例、女18例，年齡30～68歲，平均（53.1±12.9）歲；慢性肝炎患者54例（慢性肝炎組），男39例、女15例，年齡26～73歲，平均（49.8±11.2）歲。肝硬化及慢性肝炎患者均符合2000年中華醫(yī)學(xué)會(huì)傳染病與寄生蟲病學(xué)會(huì)、肝病學(xué)分會(huì)聯(lián)合修訂的病毒性肝炎防治方案中的診斷標(biāo)準(zhǔn)［6］。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集 患者禁食12h后，于次日清晨采集空腹靜脈血5.0mL，3 000r／min離心10min后分離血清，用于各指標(biāo)檢測(cè)。

1.2.2 AFP－L3的分離純化 采用北京熱景生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的含有LCA的微量親和吸附離心管分離純化AFPL3，具體分離操作嚴(yán)格按照試劑盒操作指南進(jìn)行。主要原理為：離心柱內(nèi)裝有耦聯(lián)了LCA的瓊脂糖微球（可以特異性結(jié)合AFP－L3），當(dāng)受檢者血清流經(jīng)離心柱時(shí)，與LCA結(jié)合力強(qiáng)的AFP－L3結(jié)合于離心柱內(nèi)瓊脂糖微球表面，經(jīng)過清洗后，未與瓊脂糖微球結(jié)合的AFP被洗脫，最后經(jīng)離心洗脫可獲得AFPL3。

1.2.3 AFP的檢測(cè) 采用鄭州安圖公司LUMO化學(xué)發(fā)光分析儀及配套試劑分別檢測(cè)血清中的總AFP水平和經(jīng)LCA親和純化后的AFP－L3水平，再計(jì)算AFP－L3在總AFP中所占比例（AFP－L3%）。以 AFP＞25ng／mL、AFP－L3%≥10%作為臨床判斷AFP、AFP－L3異常升高的標(biāo)準(zhǔn)，檢測(cè)結(jié)果超過上述標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，判為檢測(cè)結(jié)果陽性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析；計(jì)量資料以表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以百分率表示，組間比較采用卡方檢驗(yàn)；P＜0.05為比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各研究組血清AFP、AFP－L3%水平和陽性率比較 PLC組患者血清AFP、AFP－L3%水平均高于肝硬化組和慢性肝炎組（P＜0.05）。以 AFP＞25ng／mL，AFP－L3%≥10%作為陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)，PLC組患者血清AFP陽性率高于肝硬化組和慢性肝炎組（P＜0.05），PLC組患者血清 AFP－L3%陽性率也高于肝硬化組和慢性肝炎組（P＜0.05），見表1。

表1 各研究組患者血清AFP、AFP－L3%水平和陽性率比較

2.2 不同AFP水平PLC患者血清AFP－L3%水平和陽性率比較 根據(jù)血清AFP水平，將PLC患者分為AFP低水平組（AFP＜200ng／mL）、AFP中水平組（200～400ng／mL）、AFP高水平組（AFP＞400ng／mL），各組患者間血清 AFP－L3%水平和陽性率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表2。

表2 不同AFP水平PLC患者血清AFP－L3%水平和陽性率比較

3 討 論

PLC是一種嚴(yán)重威脅人體生命健康的疾病，就全球范圍而言，在癌癥類疾病中，PLC患者病死率居第三位，僅次于胃癌和肺癌，國(guó)內(nèi)每年P(guān)LC死亡患者占全世界PLC死亡患者總數(shù)中的45%［7］。至今為止，AFP仍是臨床用于診斷PLC的最重要腫瘤標(biāo)志物，已被廣泛用于PLC篩查、診斷、療效評(píng)價(jià)和預(yù)后評(píng)估等。但妊娠、活動(dòng)性肝病、胚胎性腫瘤等因素也可導(dǎo)致血清AFP濃度出現(xiàn)不同程度的升高，這給PLC的臨床診斷帶來了很大的困難。尤其對(duì)于血清AFP濃度尚未出現(xiàn)明顯升高的PLC患者而言，僅檢測(cè)血清AFP很難實(shí)現(xiàn)與肝硬化、慢性肝炎的鑒別診斷［8］。本研究結(jié)果顯示，PLC患者血清AFP水平雖然明顯高于肝硬化和慢性肝炎患者，但肝硬化和肝炎患者血清AFP水平也有不同程度的升高，以AFP＞25ng／mL作為陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)，肝硬化和慢性肝炎患者中還是存在較高的AFP陽性率。因此，單純血清AFP檢測(cè)在良、惡性肝病鑒別診斷方面存在一定的局限性，有必要尋找敏感性和特異性更高的PLC診斷標(biāo)志物［9］。

在PLC臨床診斷中，AFP仍然具有不可替代的作用，但隨著對(duì)其研究的不斷深入，AFP－L3在PLC早期診斷、鑒別診斷、療效評(píng)價(jià)和預(yù)后評(píng)估等方面的應(yīng)用價(jià)值逐漸受到重視。AFPL3是Purves等［10］于1970年首次發(fā)現(xiàn)的LCA結(jié)合型AFP異質(zhì)體，為肝癌細(xì)胞所特有。研究還發(fā)現(xiàn)，AFP－L3的陽性率與PLC腫瘤組織體積大小及血清總AFP濃度無關(guān)，對(duì)血清AFP濃度較低的PLC具有較高的早期診斷價(jià)值，且相比影像學(xué)檢查，血清AFP－L3檢測(cè)可使PLC的診斷時(shí)間提前9～12個(gè)月［11］。本研究結(jié)果顯示，不同 AFP濃度的PLC患者血清AFP－L3%水平和陽性率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），提示血清AFP－L3%在低血清AFP濃度PLC的早期診斷和PLC與良性肝病的鑒別診斷中具有極為重要的價(jià)值［12］。美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）已于2005年10月批準(zhǔn)將AFP－L3應(yīng)用于臨床，國(guó)內(nèi)在1999年第四屆全國(guó)肝癌學(xué)術(shù)會(huì)議上也將AFP－L3列為診斷肝癌的特異性指標(biāo)。此外，AFP－L3還與PLC的惡性程度相關(guān)，可用于PLC療效評(píng)價(jià)和預(yù)后評(píng)估，也可以用作良、惡性肝病鑒別診斷及良性肝病惡變的預(yù)警指標(biāo)［13－15］。

本研究顯示，以AFP－L3%≥10%作為診斷PLC的陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)，則PLC患者AFP－L3%陽性率為87.5%，明顯高于肝硬化組（25.8%）和慢性肝炎組（24.1%）的陽性率（P＜0.05）；尤其在AFP＜200ng／mL的低濃度PLC患者中，AFP－L3%陽性率為86.7%，與肝硬化和慢性肝炎患者比較差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。上述結(jié)果也證實(shí)AFP－L3%適用于低血清AFP濃度PLC患者的早期診斷，對(duì)PLC與慢性肝炎、肝硬化等良性肝病的鑒別診斷具有重要意義。尤其是低血清AFP濃度的慢性肝炎、肝硬化等良性肝病患者，定期檢測(cè)、動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)血清AFP－L3%水平，有助于及時(shí)發(fā)現(xiàn)疾病的惡變傾向，盡早明確診斷［16］。與此同時(shí)，對(duì)于AFP－L3%≥10%的肝病患者，有必要進(jìn)行定期隨訪和密切追蹤。

AFP－L3檢測(cè)方法多利用其具有與LCA特異性結(jié)合的特性建立和發(fā)展而來，其中親和吸附離心管法因技術(shù)成熟，臨床應(yīng)用較多［17］。本研究中采用的國(guó)產(chǎn)微量離心柱法試劑對(duì)在血清AFP－L3分離純化和檢測(cè)方面具有操作簡(jiǎn)便快捷、穩(wěn)定性好、成本低廉等特點(diǎn)，適宜在基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)中推廣應(yīng)用［18］。

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