盧海霞，陳天焱，喬艷玲，梁春華

(吉林省食品藥品檢驗(yàn)所，吉林 長(zhǎng)春 130033)

*

盧海霞，副主任藥師，研究方向：藥品藥效學(xué)，藥品、保健食品安全性評(píng)價(jià)和毒理學(xué)；

E-mail：67590798@qq.com

苦碟子注射液對(duì)大鼠離體胸主動(dòng)脈環(huán)的作用

盧海霞*，陳天焱，喬艷玲，梁春華

(吉林省食品藥品檢驗(yàn)所，吉林 長(zhǎng)春 130033)

目的探討苦碟子注射液對(duì)離體大鼠胸主動(dòng)脈血管環(huán)的作用，初步建立苦碟子注射液活性檢測(cè)方法。方法采用離體血管灌流方法，觀察苦碟子注射液對(duì)血管環(huán)的直接作用、對(duì)腎上腺素和氯化鉀所引發(fā)收縮作用的影響。結(jié)果各濃度苦碟子注射液對(duì)基礎(chǔ)狀態(tài)的完整內(nèi)皮和無內(nèi)皮血管環(huán)均無舒張作用，對(duì)氯化鉀引發(fā)的血管環(huán)收縮無明顯的舒張作用，對(duì)去氧腎上腺素引發(fā)的血管環(huán)收縮有舒張作用。結(jié)論苦碟子注射液對(duì)去氧腎上腺素預(yù)收縮的內(nèi)皮完整血管環(huán)有舒張作用。離體主動(dòng)脈環(huán)灌流實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)單、直觀、可量化，可以作為檢測(cè)苦碟子注射液活性的方法。

苦碟子注射液；離體主動(dòng)脈環(huán)

苦碟子注射液是臨床常用的治療心血管系統(tǒng)疾病的中藥注射劑，具有活血止痛、清熱祛瘀的功能。用于瘀血閉阻的胸痹，證見胸悶，心痛，口苦，舌暗紅或存瘀斑等。適用于冠心病、心絞痛見上述病狀者，亦可用于腦梗死者。苦碟子含有的腺苷及黃酮類物質(zhì)是治療冠心病的有效成分，能擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈，增加冠脈血流，減少血栓。苦碟子含有的腺苷及黃酮類物質(zhì)是治療冠心病的有效成分，能擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈，增加冠脈血流，減少血栓的形成，提高心肌供氧能力，降低心肌耗氧量，降低血脂、血黏度，抑制血小板聚集，具有抗凝作用，對(duì)缺氧心肌起到保護(hù)作用[1]。通過對(duì)700例缺血性中風(fēng)患者臨床觀察，苦碟子注射液對(duì)缺血性中風(fēng)患者的神經(jīng)功能缺損及肢體運(yùn)動(dòng)功能有一定的改善作用[2]?？嗟幼⑸湟簩?duì)腦缺血再灌注損傷有一定的保護(hù)作用，其作用機(jī)制可能與提高腦內(nèi)Na+-K+-ATPase和Ca2+-ATPase的活性有關(guān)[3]。徐茂鳳等[4]從心臟血流動(dòng)力學(xué)方面探討苦碟子注射液對(duì)老年冠心病心力衰竭患者冠脈循環(huán)和心功的影響，發(fā)現(xiàn)苦碟子注射液具有增加心輸出量，降低外周阻力的作用。本實(shí)驗(yàn)研究了苦碟子注射液對(duì)離體大鼠胸主動(dòng)脈血管環(huán)的影響，并探討其可能的作用機(jī)制。離體主動(dòng)脈環(huán)灌流實(shí)驗(yàn)可以簡(jiǎn)單、直觀、可量化地反應(yīng)苦碟子注射液對(duì)血管的作用。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

大鼠，Wistar，230～280 g，吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2 試藥

氯化乙酰膽堿(SCRC國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：69000281)，鹽酸去氧腎上腺素(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：100261-200802)，苦碟子注射液(通化華夏藥業(yè)有限公司，批號(hào)：100111，091221，100101；沈陽雙鼎制藥有限公司，批號(hào)：10022202)，氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、碳酸氫鈉、葡萄糖、乙二胺四乙酸。

1.3 儀器

MP100多道生理記錄儀(BIOPAC 美國(guó))、離體器官灌流系統(tǒng)(Radnoti 美國(guó))。

2 方法與結(jié)果

2.1 Krebs-Henseleit生理鹽溶液(K-H液)的制備

實(shí)驗(yàn)當(dāng)日配制灌流營(yíng)養(yǎng)液 Krebs-Henseleit液(K-H液)：氯化鈉(NaCl)120 mmol·L-1、氯化鉀(KCl)4.7 mmol·L-1、二水合氯化鈣(CaCl2·2H2O)2.25 mmol·L-1、磷酸二氫鉀(KH2PO4)1.18 mmol·L-1、七水合硫酸鎂(MgSO4·7H2O)1.2 mmol·L-1、碳酸氫鈉(NaHCO3)24.5 mmol·L-1、葡萄糖(C6H12O6)11.1 mmol·L-1、乙二胺四乙酸(C10H16N2O8)0.03 mmol·L-1。

2.2 離體動(dòng)脈環(huán)的制備

迅速游離大鼠胸主動(dòng)脈，取胸主動(dòng)脈降支置于4 ℃含95 %氧氣(O2)和5%二氧化碳(CO2)混合氣體預(yù)飽和的K-H液中，剔除周圍結(jié)締組織，剪成3～4 mm長(zhǎng)的血管環(huán)。根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，可用棉簽?zāi)ゲ裂墉h(huán)內(nèi)表面去除內(nèi)皮細(xì)胞，將血管環(huán)懸掛于經(jīng)37 ℃預(yù)熱，容量為20 mL的K-H液浴槽內(nèi)，一端固定，一端通過張力換能器連接采集系統(tǒng)。在持續(xù)通95% O2和5%CO2混合氣體的狀態(tài)下，逐漸調(diào)節(jié)其基礎(chǔ)張力至2.0 g，并在37 ℃下穩(wěn)定60 min，期間每15 min換液1次。用KCl刺激達(dá)峰值，然后用K-H液沖洗，重復(fù)3次，以誘發(fā)血管環(huán)的最大收縮幅度。待血管環(huán)重新穩(wěn)定后，用去氧腎上腺素收縮血管環(huán)達(dá)峰值，加入乙酰膽堿檢驗(yàn)血管內(nèi)皮完整性。以終濃度為10-6mol·L-1的去氧腎上腺素預(yù)收縮血管環(huán)，待張力穩(wěn)定后加入終濃度為10-5mol·L-1的乙酰膽堿，觀察血管張力變化，檢驗(yàn)血管內(nèi)皮完整性，加入乙酰膽堿后使去氧腎上腺素預(yù)收縮的血管環(huán)不舒張或舒張10%以下，則認(rèn)為內(nèi)皮去除；血管環(huán)舒張80%以上，可認(rèn)為內(nèi)皮完整，進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。

2.3 苦碟子注射液對(duì)胸主動(dòng)脈環(huán)的直接作用

內(nèi)皮完整或去內(nèi)皮的血管環(huán)懸掛于經(jīng)37 ℃預(yù)熱，容量為20 mL的K-H液浴槽內(nèi)，待平衡后，采用累加法加入苦碟子注射液(0.2，0.3，0.5，1.2 mL)，使浴槽內(nèi)的藥物濃度為10，25，50，100 mL·L-1。以K-H液作為對(duì)照，以加入藥物后的血管張力與初始張力相對(duì)的百分?jǐn)?shù)反映血管張力的變化[4]，血管張力變化百分率=加入藥物后的血管張力/初始張力×100%。結(jié)果顯示苦碟子注射液對(duì)基礎(chǔ)狀態(tài)內(nèi)皮完整和去內(nèi)皮血管環(huán)均無舒張作用，結(jié)果見表1。

表1 苦碟子注射液對(duì)血管環(huán)的直接作用

2.4 苦碟子注射液對(duì)去氧腎上腺素所致的主動(dòng)脈環(huán)收縮的影響

內(nèi)皮完整或去內(nèi)皮的血管環(huán)，待平衡后加入終濃度為10-6mol·L-1的去氧腎上腺素預(yù)收縮血管環(huán)，待張力穩(wěn)定后加苦碟子注射液，以K-H液作為對(duì)照，以加入藥物后的血管張力與去氧腎上腺素誘發(fā)的血管環(huán)最大收縮張力相對(duì)的百分?jǐn)?shù)反映血管張力的變化。結(jié)果顯示各濃度苦碟子注射液對(duì)用去氧腎上腺素預(yù)收縮的去內(nèi)皮血管環(huán)的張力均無明顯影響，在25～100 mL·L-1時(shí)對(duì)去氧腎上腺素預(yù)收縮的內(nèi)皮完整血管環(huán)有舒張作用，與空白對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，結(jié)果見表2。

表2 苦碟子注射液對(duì)去氧腎上腺素所致血管環(huán)收縮的影響

注：與空白組比較，*P<0.05，**P<0.05

2.5 苦碟子注射液對(duì)KCl所致的主動(dòng)脈環(huán)收縮的影響

內(nèi)皮完整或去內(nèi)皮的血管環(huán)，待平衡后加入終濃度為6×10-2mol·L-1的KCl預(yù)收縮血管環(huán)，待張力穩(wěn)定后加苦碟子注射液，以K-H液作為對(duì)照，以加入藥物后的血管張力與KCl誘發(fā)的血管環(huán)最大收縮張力相對(duì)的百分?jǐn)?shù)反映血管張力的變化。結(jié)果顯示各濃度苦碟子注射液對(duì)KCl預(yù)收縮的內(nèi)皮完整和去內(nèi)皮血管環(huán)的張力均無明顯影響，結(jié)果見表3。

表3 苦碟子注射液對(duì)KCl所致血管環(huán)收縮的影響

2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

3 討論

研究發(fā)現(xiàn)對(duì)去氧腎上腺素或氯化鉀預(yù)收縮的去內(nèi)皮血管環(huán)，苦碟子不能產(chǎn)生濃度依賴性舒張或收縮作用，苦碟子注射液在調(diào)節(jié)血管環(huán)張力的過程中，血管內(nèi)皮起到了重要作用。

目前研究認(rèn)為，細(xì)胞膜上存在兩類鈣通道，一類為電壓依賴型通道(VDC)，該通道受膜電位控制，具有電壓依賴性。當(dāng)細(xì)胞膜去極化(如用高K+到一定水平時(shí)，VDC開放，鈣離子經(jīng)此內(nèi)流)；還有一類為受體控制型通道(ROC)，該通道與膜上特異性受體相耦聯(lián)，并能夠被膜上受體激活。特異性受體激動(dòng)劑去氧腎上腺素與受體結(jié)合而使ROC開放，不僅使細(xì)胞外鈣內(nèi)流，還能使細(xì)胞內(nèi)的儲(chǔ)存鈣釋放[5]。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)苦碟子注射液能夠顯著舒張去氧腎上腺素引起有內(nèi)皮血管環(huán)的收縮，而對(duì)KCl引起的血管收縮作用不明顯，表明苦碟子注射液對(duì)ROC具有拮抗作用，對(duì)VDC的拮抗作用不明顯，并且各濃度苦碟子注射液對(duì)去內(nèi)皮血管環(huán)均無舒張作用，說明苦碟子注射液舒張血管作用可能是依賴血管內(nèi)皮的。

苦碟子注射液對(duì)正常血管環(huán)沒有作用，對(duì)去氧腎上腺素預(yù)收縮的血管環(huán)有舒張作用，苦碟子注射液抑制交感縮血管物質(zhì)(去氧腎上腺素)對(duì)血管的收縮作用可能與內(nèi)皮一氧化氮(NO)有關(guān)。邢吉紅等[6]發(fā)現(xiàn)碟脈靈注射液(現(xiàn)改名為苦碟子注射液)能增加室顫家兔血漿及心、腦組織NO水平。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，NO為血管內(nèi)皮細(xì)胞合成的強(qiáng)效血管舒張因子，NO在內(nèi)皮NOS的作用下由左旋精氨酸轉(zhuǎn)化而來，來自血管內(nèi)側(cè)和外側(cè)兩處不同方向的NO刺激平滑肌細(xì)胞內(nèi)可溶性鳥苷酸環(huán)化酶，使細(xì)胞內(nèi)cGMP水平增高，而使血管平滑肌舒張[7]。cGMP抑制蛋白激酶C磷酸化作用，引起一系列生物效應(yīng)：Ca2+內(nèi)流減弱，細(xì)胞內(nèi)Ca2+排出增多，造成細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度下降；同時(shí)收縮蛋白對(duì)Ca2+敏感性降低，從而導(dǎo)致血管舒張[8]，因此推測(cè)NO-sGC-cGMP途徑可能介導(dǎo)了苦碟子的內(nèi)皮依賴性舒血管作用。

苦碟子注射液對(duì)離體血管的作用與苦碟子注射液的臨床作用直接相關(guān)，一定程度上可以反應(yīng)苦碟子注射液的質(zhì)量。離體主動(dòng)脈環(huán)灌流試驗(yàn)簡(jiǎn)單、直觀、可量化，可以作為檢測(cè)苦碟子注射液活性的方法。此方法也可以應(yīng)用于其他有血管活性作用的中藥注射劑的活性檢測(cè)。

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EffectofKudieziInjectiononThoracicAortaRingsIsolatedfromSDRats

LUHaixia，CHENTianyan，QIAOYanling，LIANGChunhua

(JilinInstituteforFoodandDrugControl，Changchun130033，China)

Objective：To study the in vitro effect of Kudiezi injection on isolated rat thoracic aorta and its mechanism.MethodsIsometric tension recording was applied to evaluate the effect of Kudiezi injection on aortic rings under resting，norepinephrine(NE)-preconstricting or potassium chloride(KCl)-preconstricting conditions with or without the endothelium.ResultsKudiezi injection exhibited negligible vasomotor action on aortic rings with or without endothelium at resting tension.Kudiezi injection exhibited negligible vasomotor action on aorta induced by KCl.Kudiezi injection showed relaxation on endothelium-intact aortic rings stimulated by NE.ConclusionKudiezi injection shows a relaxing effect on vascular smooth muscle.The isolated aortic rings test is simple，intuitive and quantifiable.It can be used as a method for bioassay of Kudiezi Injection.

Kudiezi injection；Thoracic aorta

10.13313/j.issn.1673-4890.2014.05.009

2013-09-26)