宣偉東，唐大海，范正平

(中國(guó)人民解放軍第四一一醫(yī)院藥學(xué)科，上海 200081)

百瑞口服液為以中藥百蕊草 Thesium chinense Turcz為有效藥物的單方制劑。百蕊草為檀香科百蕊草屬植物，具有清熱解毒、補(bǔ)腎澀精之功效[1]，多用于治療急性乳腺炎、上呼吸道感染、淋巴結(jié)結(jié)核等疾病。近年來(lái)，江浙民間常用百蕊草治療慢性腎炎，效果良好[2]。初步藥理試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，百蕊草的水提取物具有利尿、消腫，降低尿蛋白、調(diào)血脂、提高血清蛋白水平等作用，對(duì)腎病綜合征大鼠有良好治療效果[3]。本研究在藥理試驗(yàn)基礎(chǔ)上，采用阿霉素(通用名注射用鹽酸多柔比星，ADR)腎病模型[4]，考察經(jīng)水提、醇沉等工藝步驟制成的成型制劑對(duì)阿霉素腎病綜合征大鼠的治療作用，為該制劑的臨床應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1．1 動(dòng)物與藥物

SD大鼠，CL級(jí)，雄性，體重(180±10)g，由海軍醫(yī)學(xué)研究所動(dòng)物房提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證號(hào)為SCXK(滬)2011－0005。分籠飼養(yǎng)，室溫為15～20℃，自由攝食、飲水。

百瑞口服液(中國(guó)人民解放軍第四一一醫(yī)院制劑室，批號(hào)為20110203，規(guī)格為每支10 mL，每支含5．0 g生藥)，為棕紅色澄清液體，氣微，味苦、微澀，依照該制劑的申報(bào)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)，該批制劑各項(xiàng)指標(biāo)均合格;阿霉素(深圳萬(wàn)樂(lè)藥業(yè)有限公司，批號(hào)為1011E1，規(guī)格為每支10 mg)，臨用前用生理鹽水配制;醋酸潑尼松片(上海信誼制藥集團(tuán)，批號(hào)為100702，規(guī)格為每片5 mg)，臨用前用生理鹽水配制成混懸液。

1．2 方法

百瑞口服液制備:取中藥百蕊草500 g，切成2～3 cm長(zhǎng)的小段，洗凈，加純化水煎煮3次，第1次2 h，第2次1．5 h，第3次1 h。合并煎液，濾過(guò)，濃縮至約400 mL，冷卻，加適量乙醇，攪勻，靜置24 h，過(guò)濾，濾液減壓回收乙醇，加純化水稀釋至900 mL，冷藏24 h，濾過(guò)，加純化水至1 000 mL，攪勻，分裝，100℃滅菌30 min，即得百瑞口服液。

阿霉素腎病模型建立與動(dòng)物分組:健康雄性SD大鼠60只，飼養(yǎng)7 d后，隨機(jī)抽取10只作為空白對(duì)照組(A組)，余下50只大鼠于試驗(yàn)開(kāi)始當(dāng)天在非麻醉?xiàng)l件下一次性尾靜脈注射阿霉素6．0 mg/kg，并按體重隨機(jī)平均分為模型對(duì)照組(B組)，陽(yáng)性對(duì)照組(C 組)，百瑞口服液低劑量組[D1組，0．5 mL/(kg·d)，相當(dāng)于0．25 g 生藥 /(kg·d)]、中劑量組[D2組，2 mL/(kg·d)，相當(dāng)于1．0 g 生藥 /(kg·d)]、高劑量組[D3組，10 mL/(kg·d)，相當(dāng)于5．0 g生藥/(kg·d)]。各組于造模次日起，每日灌胃，A組和B組給予生理鹽水，C組給予醋酸潑尼松混懸液(5．0 mg/kg)，百瑞口服液各劑量組給予相當(dāng)劑量的百瑞口服液，連續(xù)6周。

觀察指標(biāo)及檢測(cè)方法:各組每周稱(chēng)重1次，記錄四肢、陰囊的浮腫情況及腹腔積液狀況，同時(shí)觀察毛色、浮腫與精神狀態(tài)。各組每周置代謝籠1次，收集24 h尿液，記錄尿量，采用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定尿蛋白濃度，計(jì)算24 h尿蛋白。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，腹主動(dòng)脈取血，用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清總蛋白(TP)、血清白蛋白(ALB)、總膽固醇(TCH)、三酰甘油(TG)等血液生化指標(biāo)。另摘取腎臟，用10%福爾馬林液固定，石蠟包埋切片，蘇木素－伊紅(HE)染色，進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。本試驗(yàn)血液生化指標(biāo)由我院檢驗(yàn)科測(cè)定，病理切片由我院病理科完成。

1．3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2．1 一般狀態(tài)

在整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中，A組大鼠毛色有光澤，飲食活動(dòng)、精神狀態(tài)良好。模型組大鼠則精神萎靡，怠倦少動(dòng)，消瘦，毛發(fā)無(wú)光澤，并有掉毛豎毛現(xiàn)象。大鼠在造模2周后，造模大鼠均出現(xiàn)飲水減少，四肢浮腫明顯及爛尾現(xiàn)象。與B組相比，給藥各組上述表現(xiàn)有所改善，在藥物干預(yù)4周后，C組、D2組、D3組大鼠的浮腫癥狀明顯輕于模型組，爛尾癥狀均痊愈。在試驗(yàn)過(guò)程中，B組有1只大鼠死亡。

2．2 檢測(cè)指標(biāo)

結(jié)果見(jiàn)表1及表2?？梢?jiàn)，造模大鼠體內(nèi)出現(xiàn)蛋白流失，脂質(zhì)代謝紊亂。百瑞口服液有助于阿霉素腎病綜合征大鼠各項(xiàng)生理指標(biāo)的恢復(fù)，中劑量給藥可提高阿霉素腎病綜合征大鼠血液蛋白濃度，而高劑量給藥可降低血脂水平。

表1 百瑞口服液對(duì)ADR大鼠24 h尿量的影響(，n=10)

表1 百瑞口服液對(duì)ADR大鼠24 h尿量的影響(，n=10)

注:與 A 組比較，△P＜0．05，▲P＜0．01;與 B組比較，□P＜0．05，■P＜0．01。下表同。

組別 24 h尿量(mL)24 h尿蛋白量(mg/kg)A組B組C組D1組D2組D3組造模前28．8 ±8．9 31．8 ±9．1 34．1 ±1．0 44．8 ±11．1 32．2 ±15．2 29．2 ±13．8造模第1周32．2 ±1．2 21．3 ±6．3▲29．6 ±11．1 22．1 ±6．8 23．2 ±7．7 27．6 ±11．9造模第2周34．7 ±6．6 19．6 ±9．6▲23．3 ±8．2 25．2 ±3．9 25．2 ±3．1 30．0 ±11．1造模第3周36．5 ±7．6 18．2 ±3．8▲28．1 ±6．7□26．8 ±10．9 25．8 ±6．2 28．1 ±3．8造模第4周37．5 ±5．4 20．4 ±4．1▲25．1 ±6．7□25．8 ±12．9□28．6 ±3．2□28．6 ±9．2＊造模第5周43．7 ±5．2 20．9 ±2．9▲25．2 ±7．9□28．0 ±8．9□31．1 ±4．9■33．7 ±3．9■造模第6周42．2 ± 12．2 20．8 ± 5．1▲24．8 ± 4．5□27．7 ± 6．6□35．7 ± 3．3■34．5 ± 7．2■造模前4．2 ±1．1 4．6 ±1．3 4．1 ±1．0 4．3 ±0．7 3．8 ±0．8 3．9 ±0．6造模第1周4．5 ±0．3 27．4 ±10．7▲29．6 ±11．1 28．5 ±7．9 30．4 ±13．8 29．8 ±12．0造模第2周2．8 ±0．7 31．7 ±7．5▲43．3 ±8．8□44．4 ±6．6□42．5 ±7．9□43．3 ±8．8■造模第3周2．5 ±0．6 36．2 ±10．3△38．1 ±6．7 45．2 ±13．2 41．5 ±7．8 36．0 ±9．3造模第4周3．0 ± 0．2 55．3 ± 4．8▲45．1 ± 6．7□52．4 ± 27．2 47．4 ± 5．1□53．9 ± 12．8造模第5周4．2 ±1．2 58．4 ±12．4▲45．2 ±5．9■58．1 ±20．1 46．2 ±5．7■48．8 ±5．2□造模第6周3．2 ±1．2 43．6 ±9．4▲24．8 ±4．5■44．1 ±9．4 27．9 ±7．1■39．2 ±8．7□

表2 百瑞口服液對(duì)阿霉素腎病綜合征大鼠血液生化指標(biāo)的影響(，n=10)

表2 百瑞口服液對(duì)阿霉素腎病綜合征大鼠血液生化指標(biāo)的影響(，n=10)

TG(mmol/L)2．35 ± 0．94 3．06 ± 0．12△2．72 ± 1．52□3．25 ± 1．27 2．85 ± 0．13 2．64 ± 0．72□組別A組B組C組D1組D2組D3組TP(g/L)66．22 ± 4．18 45．86 ± 3．54▲48．14 ± 6．13 40．02 ± 3．71 52．77 ± 4．2□49．58 ± 3．37 ALB(g/L)37．28 ± 3．11 23．45 ± 4．16▲28．33 ± 2．58□26．95 ± 4．26 28．09 ± 5．82□22．95 ± 4．66 TCH(mmol/L)3．21 ± 0．48 4．74 ± 1．15△3．85 ± 1．25□3．56 ± 0．84□4．16 ± 2．88 3．61 ± 0．75□

2．3 腎臟病理組織學(xué)

A組大鼠腎小球及腎小管形態(tài)與結(jié)構(gòu)無(wú)明顯病理變化，見(jiàn)圖1 A。B組大鼠可見(jiàn)腎小管擴(kuò)張、炎細(xì)胞浸潤(rùn)及間質(zhì)纖維化，腎小球內(nèi)皮細(xì)胞減少、球囊腔顯著擴(kuò)張、囊壁增厚，有的可見(jiàn)腎小球萎縮，腎小管管型，見(jiàn)圖1 B。D3組大鼠可見(jiàn)腎小球囊腔不同程度擴(kuò)張，腎小管上皮細(xì)胞有輕度變性，管腔略有變窄，個(gè)別有管型生成，見(jiàn)圖1 C。D2組大鼠腎小球囊腔擴(kuò)張，腎小管上皮細(xì)胞變性，管腔變窄，有管型，見(jiàn)圖1 D。D1組大鼠腎小球囊腔擴(kuò)張，腎小管上皮變性，管腔擴(kuò)張，周?chē)g質(zhì)細(xì)胞增生，見(jiàn)圖1 E。C組大鼠腎小球囊腔輕度擴(kuò)張，腎小管上皮腫脹、管腔輕度狹窄，見(jiàn)圖1 F。病理學(xué)檢查結(jié)果提示，百瑞口服液及陽(yáng)性藥對(duì)阿霉素腎病綜合征的發(fā)生與發(fā)展均有一定減輕作用，主要表現(xiàn)在各藥物組腎小球及腎小管上皮的病變程度較模型對(duì)照組輕。其中，高劑量百瑞口服液有與陽(yáng)性藥有相似的作用效果，中、低劑量百瑞口服液作用相似。

3 討論

阿霉素腎病綜合征屬中醫(yī)“水腫”病范疇，其發(fā)生與水液代謝及肺、脾、腎三臟器功能失調(diào)有關(guān)，臨床以大量蛋白尿、低蛋白血癥、高脂血癥及不同程度水腫為特征。阿霉素誘導(dǎo)的大鼠腎病綜合征模型，基本類(lèi)似人類(lèi)微小病變型腎病，已被廣泛應(yīng)用于中藥及中草藥成分對(duì)腎臟保護(hù)作用的藥物篩選與藥效學(xué)評(píng)價(jià)[5]。本試驗(yàn)中對(duì)大鼠1次尾靜脈注射阿霉素6．0 mg/kg，大鼠均出現(xiàn)不同程度的浮腫癥狀，24 h尿量顯著減少，尿蛋白顯著增加，血液中TP與ALB水平顯著下降，TCH與TG水平升高。結(jié)果表明，本次試驗(yàn)成功地建立了阿霉素大鼠腎病模型。

百蕊草作為一種廣譜抗菌中草藥，有良好的消炎鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)咳及抗腫瘤作用。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，治療組大鼠的一般狀態(tài)均好于模型對(duì)照組，表明百蕊草可有效防治阿霉素腎病綜合征大鼠的感染，改善其生存狀態(tài)。本試驗(yàn)依據(jù)百蕊草提取物在1．0 g/(kg·d)劑量下，可對(duì)腎病綜合征大鼠產(chǎn)生較好的治療作用[3]，將受試藥物的給藥劑量設(shè)置為低劑量[0．25 g/(kg·d)生藥]、中劑量[1．0 g/(kg·d)生藥]、高劑量[5．0 g/(kg·d)生藥]3 組。試驗(yàn)結(jié)果顯示，百瑞口服液治療4周以上，中、高劑量組阿霉素腎病綜合征大鼠24 h尿量顯著增加，水腫癥狀消除，24 h尿蛋白降低，血液中總蛋白、血清蛋白含量水平提升，血脂代謝紊亂改善，病理組織分析也證實(shí)百瑞口服液對(duì)阿霉素腎病綜合征大鼠的腎臟具有明顯的保護(hù)作用。由此表明，百蕊草經(jīng)過(guò)加工制成成品制劑，仍保持了其對(duì)腎病綜合征大鼠良好的治療效果，并在劑量為1．0 g/(kg·d)生藥時(shí)，即顯示出較好的療效。該劑量與民間治療慢性腎病的常用劑量相似(每日20 g)。

圖1 各組大鼠腎臟組織HE染色病理切片圖(×400)

本研究結(jié)果可為該制劑在慢性腎病臨床治療提供一定的藥效學(xué)依據(jù)和劑量參考。基于慢性腎炎臨床治療的復(fù)雜性，該制劑對(duì)慢性腎病的適應(yīng)證、作用機(jī)制及腎毒性等還有待進(jìn)一步研究。

[1]國(guó)家中醫(yī)藥管理局，中華本草編委會(huì)．中華本草[M]．上海:上?？萍汲霭嫔?，1999:595．

[2]王 崢，劉近明，李紹順．百蕊草的研究進(jìn)展[J]．中國(guó)藥師，2006，9(11):1 059．

[3]宣偉東，唐大海，卞 俊，等．百蕊草對(duì)阿霉素腎病大鼠治療作用的實(shí)驗(yàn)研究[J]．藥學(xué)實(shí)踐雜志，2012，30(6):443．

[4]李保春，崔若蘭，張曉英．大鼠阿霉素腎病模型的建立[J]．第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，1992，13(5):485．

[5]Bertani T，Poggi A，Pozzoni R，et al．Adriamycin －induced nephritic syndrome in rats[J]．Lab Invest，1982，46(1):16．