劉 冰，吉啟輝，宋水林，魏洪義

（江西農(nóng)業(yè)大學(xué) 農(nóng)學(xué)院，江西 南昌 330045）

由Xanthomonas oryzaepv.oryzicola引起的水稻細(xì)菌性條斑病對(duì)水稻的高產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)造成了嚴(yán)重威脅。目前該病的防治主要依賴化學(xué)農(nóng)藥，長(zhǎng)期使用后造成病原菌抗藥性突變體的比例逐年上升，且這種抗藥性能夠穩(wěn)定遺傳。在此前提下，利用拮抗菌防治水稻細(xì)菌性條斑病是一種值得探求的途徑，而且拮抗菌在防治植物病害中被認(rèn)為是一類具有發(fā)展?jié)摿Φ纳酪蜃?。利用禾長(zhǎng)蠕孢菌及其代謝產(chǎn)物防治水稻細(xì)菌性條斑病菌已有初步研究，但利用拮抗細(xì)菌防治水稻細(xì)菌性條斑病的研究鮮有報(bào)道[1-3]。

水稻紋枯病是我國(guó)水稻三大病害之一。目前推廣的水稻品種缺乏高抗紋枯病基因，利用抗病品種尚未獲得較滿意的防病效果。當(dāng)前生產(chǎn)上主要用井岡霉素加以防治，但長(zhǎng)期使用此藥已使紋枯病菌產(chǎn)生了抗藥性，用藥量和使用次數(shù)正逐年加大[4]。因此，水稻紋枯病的生物防治研究具有重要的應(yīng)用前景。

鑒于以上研究現(xiàn)狀，本試驗(yàn)在前期皿內(nèi)初步篩選出5株水稻細(xì)菌性條斑病菌和5株紋枯病菌拮抗菌的基礎(chǔ)上，通過活體生測(cè)法復(fù)篩對(duì)這兩種病害有較好防效的菌株，并對(duì)其室內(nèi)防效和應(yīng)用效果進(jìn)行評(píng)價(jià)。試驗(yàn)結(jié)果可為水稻細(xì)菌性條斑病和紋枯病的生物防治奠定基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1 供試材料

供試水稻品種：金優(yōu)556。

供試藥劑：稻豐TM多·?？蓾裥苑蹌?，青島金正農(nóng)藥有限公司生產(chǎn)，總有效成分含量為40%，其中多菌靈5%，福雙美35%。

供試病原菌：水稻細(xì)菌性條斑病病菌(Xanthomonas oryzaespv.oryzicola)和水稻紋枯病菌(Rhizoctonia solani）均由江西農(nóng)業(yè)大學(xué)植物病理實(shí)驗(yàn)室分離保存。

供試篩選菌株：水稻白葉枯病和細(xì)菌性條斑病待測(cè)生防菌（菌株P(guān)1G1、GN222、GN223、GN233、WZ131）和水稻紋枯病待測(cè)生防菌（菌株P(guān)1G1、GN222、、GN211、WZ131、ML27）；均由江西農(nóng)業(yè)大學(xué)植物病理實(shí)驗(yàn)室分離保存。

1.2 水稻苗的培育

挑選健康水稻種子進(jìn)行浸種、催芽和育苗，方法參照文獻(xiàn)[5]。待水稻破胸露白后，施于育苗盤中，每盤16簇，共18盤。

1.3 病原菌和生防菌的接種

水稻細(xì)菌性條斑病菌：水稻分蘗長(zhǎng)至四葉一心時(shí)，將供篩選的生防菌菌懸液稀釋至109cfu/mL后分別均勻噴灑于水稻葉片上。每盤一個(gè)處理，共5個(gè)處理，分別記為：P1G1菌懸液、GN222菌懸液、GN223菌懸液、GN233菌懸液和WZ131菌懸液，設(shè)一個(gè)清水對(duì)照。每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)。同時(shí)，采用針刺法接種細(xì)菌性條斑病菌于水稻葉片的上下兩端，塑料薄膜密封保濕24h[3]。

水稻紋枯病菌：水稻分蘗長(zhǎng)至四葉一心時(shí)，選取水稻劍葉放在濕紗布上，將供篩選的生防菌菌懸液稀釋至109cfu/mL后分別用棉球涂抹于水稻葉片上[6-7]。每盤一個(gè)處理，共5個(gè)處理，分別記為：P1G1菌懸液、GN222菌懸液、GN211菌懸液、GN233菌懸液、WZ131菌懸液和ML27菌懸液，設(shè)一個(gè)清水對(duì)照。每個(gè)處理5個(gè)重復(fù)。同時(shí)，將紋枯菌絲塊倒扣在葉片上，用塑料薄膜將水稻密封保濕。每個(gè)菌株接種5片葉，每葉接種3個(gè)菌絲塊。

1.4 生防菌的復(fù)篩

對(duì)水稻細(xì)菌性條斑?。航臃N15d后調(diào)查病情，觀察各處理組的發(fā)病情況，并及時(shí)記錄。病情嚴(yán)重程度按發(fā)病病斑占葉片總面積的百分?jǐn)?shù)，0 級(jí)，無病斑；1級(jí)，病斑占葉片面積＜5%；3級(jí)，病斑面積占葉片面積 6%～15%；5級(jí)，病斑面積占葉片面積 16%～30%；7級(jí)，病斑面積占葉片面積 31%~50%；9級(jí)，病斑面積占葉片面積＞50%[2]。根據(jù)發(fā)病嚴(yán)重度篩選出防治效果較好的菌株。

對(duì)水稻紋枯病：接種3d后調(diào)查發(fā)病情況，病情嚴(yán)重程度按病斑大小占水稻莖稈周長(zhǎng)的百分?jǐn)?shù)分為0~10級(jí)，即未發(fā)病的為0級(jí)，1~10%（不包括10%）1級(jí)，10%~20%（不包括20%）為2級(jí)......以此類推，90%以上為10級(jí)[8]。根據(jù)發(fā)病嚴(yán)重度篩選出防治效果較好的菌株。

1.5 生防菌對(duì)水稻細(xì)菌性條斑病和紋枯病室內(nèi)防效的測(cè)定

接種細(xì)菌性條斑病菌/紋枯病菌于水稻葉片上后，選取初篩防治效果較好的菌株進(jìn)行生防菌處理，同時(shí)增加一個(gè)藥劑處理即將稻豐可濕性粉劑稀釋400倍后，噴施/涂抹于已接種細(xì)菌性條斑病菌/紋枯病菌的水稻葉片上。對(duì)照噴施清水。接種15d/3d后，觀察各處理的發(fā)病情況，并計(jì)算防治效果[9-10]。

病情指數(shù)(%)={(∑各級(jí)病葉數(shù)×各級(jí)代表值）/(調(diào)查總?cè)~數(shù)×最高級(jí)代表值)}×100；

防治效果(%)={(對(duì)照組病情指數(shù)-處理組病情指數(shù))/對(duì)照組病情指數(shù)}×100。

1.6 生防細(xì)菌對(duì)水稻的促生作用測(cè)定

取含菌量為109cfu/mL的生防菌菌懸液50mL，用無菌水按1:1的比例稀釋。隨機(jī)取100粒種子浸泡在稀釋后的菌液中，28℃放置48h，倒掉菌液進(jìn)行催芽，記錄稻種發(fā)芽情況，2d后將種子播在無菌土中。待稻苗長(zhǎng)到兩葉一心時(shí)，用109cfu/mL的生防菌菌懸液進(jìn)行噴施，每過7d 1次，共噴3次。用空白培養(yǎng)液浸種、噴施處理作為對(duì)照，30d后測(cè)量稻苗的高度，調(diào)查試驗(yàn)結(jié)果。

2 結(jié)果與分析

2.1 水稻病害生防菌復(fù)篩

2.1.1 水稻細(xì)菌性條斑病生防細(xì)菌的復(fù)篩試驗(yàn)結(jié)果表明，5株生防菌對(duì)苗期水稻細(xì)菌性條斑病均有防治效果，其中防治效果較好的有GN223，GN222，GN233。其中菌株GN223，GN222和GN233的病情指數(shù)分別為51.6%，44.7%，23.7%，其防效依次達(dá)到28.2%，37.8%，67%（表1）?？梢?，菌株GN223，GN222和GN233可作為水稻細(xì)菌性條斑病的生防菌。

表1 水稻細(xì)菌性條斑病生防細(xì)菌的篩選

2.1.2 水稻紋枯病生防菌的復(fù)篩試驗(yàn)結(jié)果表明，5株生防菌對(duì)苗期水稻紋枯病的防治中效果較好的有GN211和GN222，菌株P(guān)1G1沒有防效。其中GN211和GN222的病情指數(shù)分別為23%和27.5%，其防效達(dá)到45.9%和35.3%（表2）?？梢姡闓N211和GN222可作為防治水稻紋枯病的生防菌株。

表2 水稻紋枯病生防細(xì)菌的篩選

2.2 室內(nèi)防效測(cè)定

2.2.1 對(duì)水稻細(xì)菌性條斑病的防效篩選出的3株菌的室內(nèi)防效見表3和圖1。結(jié)果表明，內(nèi)生菌GN233的防效最好，為28.9%，與農(nóng)藥的34.2%接近，GN223次之，防效為18.4%，GN222防效最差。

表3 生防菌菌懸液對(duì)水稻細(xì)菌性條斑病的室內(nèi)防治效果

圖1 生防細(xì)菌對(duì)水稻細(xì)菌性條斑病的影響

2.2.2 對(duì)水稻紋枯病的防效篩選出的2株生防菌的室內(nèi)防效見表4和圖2。結(jié)果表明，菌株GN222和GN211對(duì)水稻紋枯病的防效分別為44.4%和27.8%，農(nóng)藥“稻豐”的防治效果為33.3%。

表4 生防菌菌懸液對(duì)水稻紋枯病的室內(nèi)防治效果

圖2 生防細(xì)菌對(duì)水稻紋枯病的影響

2.3 生防菌對(duì)水稻的促生作用

由表5和圖3可知，水稻種子用幾株防治水稻細(xì)菌性條斑病和紋枯病效果較好的生防菌浸種后，其芽長(zhǎng)變化不大，發(fā)芽率均比對(duì)照高，其中菌株GN222和GN223最為明顯。由圖4能看出，3株細(xì)菌均對(duì)水稻苗的生長(zhǎng)有促生作用，其中菌株GN233的促生效果最為明顯。

表5 生防菌對(duì)水稻種子發(fā)芽的影響

圖3 噴施不同生防菌后水稻苗的生長(zhǎng)情況

3 討 論

近年來關(guān)于植物病害生防菌的報(bào)道不斷涌現(xiàn)，植物病害的生物防治已然成為未來防治植物病害的一個(gè)重要發(fā)展方向[11]。目前，生產(chǎn)上主要采用殺菌劑和使用抗病品種來控制水稻細(xì)菌性條斑病和紋枯病的危害，然而長(zhǎng)期和廣泛使用化學(xué)藥劑導(dǎo)致細(xì)菌性條斑病菌和紋枯病菌產(chǎn)生抗性，且造成環(huán)境污染及影響人畜安全，因此生物防治越來越被重視。然而有關(guān)水稻細(xì)菌性條斑病生物防治的研究較少，朱凱等[3]發(fā)現(xiàn)禾長(zhǎng)蠕孢菌及其代謝產(chǎn)物對(duì)水稻細(xì)菌性條斑病菌室內(nèi)防效顯著高于20%葉枯唑；沈素文等[4]發(fā)現(xiàn)兩株拮抗細(xì)菌與化學(xué)藥劑混配比單一使用化學(xué)藥劑能更好地防治細(xì)菌性條斑病。至于水稻紋枯病的生物防治，陳志誼等[12]選用的芽孢稈菌對(duì)水稻紋枯病有較好的防效，在亞洲也有不少的生防專家從事此方面的研究和實(shí)踐，已取得較大的成績(jī)。本試驗(yàn)通過活體和離體生測(cè)篩選到了對(duì)水稻細(xì)菌性條斑病和紋枯病具有良好防效的細(xì)菌菌株，可為這兩種病害的生物防治奠定基礎(chǔ)。

本試驗(yàn)通過對(duì)生防細(xì)菌的活體篩選和防效測(cè)定發(fā)現(xiàn)，菌株GN233對(duì)水稻細(xì)菌性條斑病的防效較好，幾乎接近農(nóng)藥的防效，可進(jìn)一步擴(kuò)大試驗(yàn)范圍及面積、提高效價(jià)，并保持其穩(wěn)定性，為其應(yīng)用于田間生產(chǎn)奠定基礎(chǔ)。通過對(duì)生防細(xì)菌的離體篩選和防效測(cè)定發(fā)現(xiàn)，菌株GN211和GN222對(duì)水稻紋枯病有一定的防治效果，可作為水稻紋枯病生防細(xì)菌。此外，篩選出的幾株生防細(xì)菌對(duì)水稻植株生長(zhǎng)還具有促生作用。在其他試驗(yàn)中筆者還發(fā)現(xiàn)菌株GN211和GN222對(duì)一些草坪真菌性病害也具有一定的防治效果。由此可見，這幾株菌具有較好的生防潛力，有必要進(jìn)行深入研究。

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