陸紅　朱錦莉

[摘要] 目的 探討依達(dá)拉奉對腦出血大鼠血腫周圍腦組織SOD及MDA的影響。方法 選SD大鼠90只，隨機(jī)分成3組，每組30只，分別為假手術(shù)組、腦出血組及依達(dá)拉奉治療組。將大鼠自體血注入尾狀核制成腦出血模型；用黃嘌呤氧化法檢測神經(jīng)細(xì)胞SOD含量，改良的硫代巴比妥酸法測定MDA含量。結(jié)果 腦出血組與假手術(shù)組比較SOD活性顯著降低，而MDA含量增加（P<0.05），依達(dá)拉奉治療組與腦出血組相比，神經(jīng)細(xì)胞SOD含量明顯增高（P<0.05），而MDA含量減低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 依達(dá)拉奉具有清除自由基作用，該作用與增加細(xì)胞SOD含量，抑制脂質(zhì)過氧化過程有關(guān)。

[關(guān)鍵詞] 依達(dá)拉奉； 腦出血；自由基； SOD；MDA

[中圖分類號] R96 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-0742（2014）05（c）-0035-02

[Abstract] Objective To investigate the effect of edaravone on SOD and MDA in brain tissue around the hematoma of rats with cerebral hemorrhage. Methods 90 SD rats were chosen and randomly divided into 3 groups， control group， the cerebral hemorrhage group and edaravone treatment group， respectively， each group of 30 rats. Cerebral hemorrhage model was made by injecting the autologous blood of rats into caudate nucleus. Xanthine oxidation method was used to detect the content of SOD in nerve cells， and improved thiobarbituric acid method was adopted to detect the MDA content. Results Compared with the control group， the SOD activity of the cerebral hemorrhage group decreased significantly， but MDA content increased（P<0.05）； compared with the cerebral hemorrhage group， the SOD content in nerve cells of edaravone treatment group obviously increased， but MDA content decreased， the difference was statistically significant（P<0.05）. Conclusion Edaravone has the effect of scavenging free radicals， which is related to the increase of cellular SOD content and inhibition of the lipid peroxidation process.

[Key words] Edaravone； Cerebral hemorrhage； Free radicals； SOD；MDA

腦出血（ICH）是指腦實(shí)質(zhì)的血管發(fā)生破裂出血，因其發(fā)病急、進(jìn)展迅速以及高致殘率和高致死率等特點(diǎn)，被臨床醫(yī)生高度重視。研究證明，急性腦出血后生成大量自由基，造成腦組織不可逆的損傷，導(dǎo)致神經(jīng)功能障礙加重。依達(dá)拉奉是自由基清除劑，臨床應(yīng)用對腦出血具有確切療效[1]。該實(shí)驗(yàn)于2013年5月—2013年10月在遼寧醫(yī)學(xué)院生理實(shí)驗(yàn)室完成。通過檢測實(shí)驗(yàn)大鼠腦出血經(jīng)依達(dá)拉奉治療后SOD、 MDA含量，觀察大鼠腦出血急性期應(yīng)用依達(dá)拉奉治療后血腫周圍腦細(xì)胞自由基清除情況，為探討依達(dá)拉奉在腦出血急性期應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)動物與藥品、儀器

實(shí)驗(yàn)動物：90只清潔級SD大鼠，3～4月齡，雌雄不限，重200～300 g，常規(guī)室溫25 ℃，正常進(jìn)食、飲水。（遼寧醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供，批號033）。實(shí)驗(yàn)過程遵循《關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動物的指導(dǎo)性意見》[2]。藥物：依達(dá)拉奉注射液（易達(dá)生，吉林省博大制藥有限責(zé)任公司，國藥準(zhǔn)字：H20051992），SOD、MDA試劑盒（購自南京建成生物工程研究所，試劑為國產(chǎn)分析純級）。主要儀器：腦立體定位儀（美國Ridge Tool公司）；微量進(jìn)樣器（淄博庫侖分析儀器有限公司）。

2 方法

2.1 分組和給藥

90只大鼠隨機(jī)分成假手術(shù)組，腦出血組和依達(dá)拉奉治療組，各30只；3組大鼠均為雌雄各半，年齡為3～4個(gè)月，假手術(shù)組平均體重為（71±2.0）g，腦出血組平均體重為（72±1.5）g，依達(dá)拉奉組平均體重為（73±1.4）g，且3組健康狀況均良好，正常進(jìn)食和飲水，無明顯差異，具有可比性。治療組造模后立即尾靜脈注射依達(dá)拉奉，用量為每次3 mg/kg ， 2次/d。腦出血組造模后立即向大鼠尾靜脈注射同等量生理鹽水，假手術(shù)組不注血，其余方法與腦出血組相同。

2.2 模型的制備

按照Xue[3]所提供的方法制成腦出血模型。在立體定位儀引導(dǎo)下以25 uL/min速度向大鼠右側(cè)尾狀核（矢狀縫向右旁開3.0 mm，前囟后方0.2 mm，取深度5.8 mm）注入自體尾靜脈血50 uL； 2 min內(nèi)注完；停針10 min。假手術(shù)組不注血，其余方法與腦出血組相同。

2.3 按照Longa評分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評分

0分：無神經(jīng)系統(tǒng)功能缺損的體征；1分：左側(cè)前肢不能完全伸展；2分：爬行時(shí)，大鼠向左側(cè)追尾轉(zhuǎn)圈；3分：爬行時(shí)，大鼠向左側(cè)傾倒；4分：無自發(fā)性活動或伴有意識障礙。神經(jīng)功能評分等于3分的大鼠入選本實(shí)驗(yàn)[4]。

2.4 取材及SOD、MDA測定

各組大鼠均于造模后48 h處死，迅速取針道后腦組織標(biāo)本稱重，將腦組織與生理鹽水按1 g∶10 mL比例在冰水中用勻漿機(jī)充分勻漿，4 000 r/min離心，15 min后取上清液，配成10%的腦組織勻漿，黃嘌呤氧化酶法測定SOD活性，改良的硫代巴比妥酸法測定MDA。

2.5 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析及處理。計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間比較用方差分析。

3 結(jié)果

假手術(shù)組和腦出血組相比，SOD含量明顯減少，說明SOD活性明顯降低，而MDA含量顯著增多，表明MDA活性明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；依達(dá)拉奉組與腦出血組比較，SOD含量明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=17.624，P<0.05）。而MDA含量明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=5.246，P<0.01）。見表1。

4 討論

腦出血后神經(jīng)細(xì)胞損傷是多種原因綜合作用的結(jié)果，其中自由基產(chǎn)生是引起神經(jīng)細(xì)胞損傷重要因素之一。依達(dá)拉奉親脂性強(qiáng)，在血腦屏障中的透過率達(dá)到60%[5]，具有較強(qiáng)的自由基清除能力。由以上表1可知，在3組中，腦出血組SOD值（57.35±7.56）與假手術(shù)組SOD值（70.06±3.98）比較，SOD活性顯著降低，而腦出血組MDA值（4.98±0.43），假手術(shù)組為（1.31±0.13），相比含量增加（P<0.05），依達(dá)拉奉治療組SOD含量為（65.05±8.96）與腦出血組（57.35±7.56）相比，神經(jīng)細(xì)胞SOD明顯增高（P<0.05），而MDA含量，依達(dá)拉奉組為（2.24±0.38），腦出血組為（4.98±0.43），明顯減低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），由此可推斷，在腦出血急性期，應(yīng)用依達(dá)拉奉可清除血腫周圍的腦細(xì)胞自由基，避免腦組織的不可逆損傷，此研究結(jié)果與劉春寒 ， 薛慎伍等[6]在關(guān)于依達(dá)拉奉對慢性腦缺血大鼠神經(jīng)功能損傷的保護(hù)和MDA、SOD的影響中的研究結(jié)果相一致，其意義如下所示。

4.1 SOD在3組中的變化及意義

該研究結(jié)果顯示：腦出血組與假手術(shù)組比較SOD活性顯著降低， 說明ICH后血腫周圍腦組織氧化抗氧化平衡紊亂，有大量自由基產(chǎn)生，可能是清除自由基系統(tǒng)受到消耗或抑制。依達(dá)拉奉治療組與ICH組比較SOD活性顯著增加，說明依達(dá)拉奉具有清除血腫周圍腦組織中自由基，減輕自由基對腦組織的病理損傷作用。

4.2 MDA在3組中的變化及意義

MDA是脂質(zhì)過氧化的終產(chǎn)物，其含量間接反映細(xì)胞受自由基攻擊的嚴(yán)重程度。本研究結(jié)果顯示：ICH 組血腫周圍腦組織MDA含量明顯高于假手術(shù)組，說明ICH后血腫周圍腦組織氧化抗氧化平衡紊亂，有大量自由基產(chǎn)生，可能是清除自由基系統(tǒng)受到消耗或抑制。而依達(dá)拉奉組血腫周圍腦組織MDA含量顯著低于ICH組，說明依達(dá)拉奉具有抑制血腫周圍腦組織中自由基產(chǎn)生，提高自由基清除能力，對抗脂質(zhì)過氧化作用。

綜上所述，依達(dá)拉奉具有增加SOD活性，清除自由基、抗脂質(zhì)過氧化、減輕腦水腫的作用，在腦出血急性期應(yīng)用效果明顯。其可能的作用機(jī)制為通過抑制次黃嘌呤一黃嘌呤氧化酶的活性，降低甚至清除患者體內(nèi)的氧自由基，從而抑制神經(jīng)細(xì)胞發(fā)生遲發(fā)型損傷，使腦出血患者的神經(jīng)功能得到改善[7-8]。研究表明，依達(dá)拉奉有減輕腦水腫和腦組織損傷程度的作用[9]，其機(jī)制也與清除氧自由基，抑制脂質(zhì)過氧化及腦細(xì)胞過氧化作用有關(guān)。依達(dá)拉奉尚能通過刺激前列環(huán)素生成，減少炎性介質(zhì)白三烯生成，而降低自由基濃度，阻斷自由基的級聯(lián)反應(yīng)，同時(shí)抑制脂質(zhì)過氧化，阻止腦細(xì)胞凋亡，促進(jìn)神經(jīng)功能的修復(fù)[10]。

該實(shí)驗(yàn)僅從依達(dá)拉奉清除自由基， 增加SOD活性，減輕脂質(zhì)過氧化單一角度探討其作用機(jī)制，存在局限性，在實(shí)驗(yàn)條件充裕情況下，應(yīng)進(jìn)一步研究依達(dá)拉奉多種作用機(jī)制綜合作用結(jié)果，為其臨床應(yīng)用提供全面，透徹理論依據(jù)。

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（收稿日期：2014-02-11）