江麗娟，武燕萍，孫明莉，趙士興，雷 宇＊

（1.吉林大學(xué)第一醫(yī)院，吉林 長春130021；2.太原鋼鐵（集團(tuán)）有限公司總醫(yī)院 急救中心，山西 太原030003）

百草枯（Paraquat，PQ）是使用最廣泛的除草劑之一[1]，中毒病死率高達(dá)60%－80%[2]。中毒以肺損害為突出，許多患者早期死于急性呼吸窘迫綜合征（ARDS），晚期死于不可逆性肺間質(zhì)纖維化所致的呼吸衰竭[3]。急性PQ中毒機(jī)制尚不明確，無確切有效的救治手段。烏司他?。╱linastatin，UTI）為蛋白酶抑制劑，可抑制多種水解酶活性，發(fā)揮臟器保護(hù)作用[4]。本研究從組織學(xué)形態(tài)改變角度（包括超微結(jié)構(gòu)的變化），探討UTI對(duì)急性PQ中毒肺損害的保護(hù)作用。

1 資料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

150只健康Wistar大鼠，SPF級(jí)，雌雄各半，體質(zhì)量（250±10）g，由吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。許可證號(hào)：SCXK（吉）－2007－0003。

1.2 動(dòng)物模型制作及實(shí)驗(yàn)分組

1.2.1 實(shí)驗(yàn)分組及模型制作 隨機(jī)分3組，A組，一次性給予1ml生理鹽水（四川科倫藥業(yè)股份有限公司）灌胃。每日二次1ml生理鹽水腹腔注射。B組，一次性給予PQ溶液（山東大成農(nóng)藥股份有限公司）40mg／kg灌胃造模。每日給予1ml生理鹽水腹腔注射。C組，大鼠PQ中毒后給予UTI（廣東天普生化醫(yī)藥股份有限公司）（12萬IU／kg），每日二次腹腔注射。

1.2.2 病理制作 在大鼠染毒后分別在第7天取肺組織，經(jīng)2.5%戊二醛（上海時(shí)代生物技術(shù)有限公司）前固定，1%鋨酸｛美國斯百全化學(xué)（上海）有限公司｝后固定，乙醇系列脫水，Epon812環(huán)氧樹脂（美國電子顯微科學(xué)公司EMS）包埋，LKB－Ⅲ型超薄切片機(jī)（上海育豐國際貿(mào)易有限公司）半薄切片定位后做超薄切片，醋酸雙氧鈾（北京新興百瑞技術(shù)有限公司）及檸檬酸鉛（北京中鏡科儀技術(shù)有限公司）雙重染色，JEM－1200EX型透射電子顯微鏡（FEI公司，USA）觀察、攝片。

2 結(jié)果

肺組織超微結(jié)構(gòu)變化見圖1。A組（圖a），Ⅱ型細(xì)胞局部細(xì)胞表面可見少量微絨毛，胞質(zhì)內(nèi)多個(gè)板層小體，部分呈空泡狀，線粒體豐富，呈圓形或橢圓形，略致密；B組（圖b），Ⅱ型細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)板層小體內(nèi)部分板層小體結(jié)構(gòu)不清，線粒體呈不規(guī)則形，呈致密狀；C組（圖c），Ⅱ型細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)可見多個(gè)板層小體，線粒體較多，呈不規(guī)則形，略致密，線粒體嵴可辨認(rèn)，可見少量粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。

3 討論

目前針對(duì)百草枯中毒仍無特效解毒劑，PQ中毒致肺損傷主要分早期的肺泡炎癥階段和后期的肺纖維化階段。在早期的肺泡炎癥階段，病理以肺泡內(nèi)大量炎性細(xì)胞浸潤，炎癥反應(yīng)，肺水腫和彌漫性出血為特征，臨床上多表現(xiàn)為急性肺損傷／呼吸窘迫綜合征的表現(xiàn)，死亡率極高。有研究顯示，PQ通過多胺攝取系統(tǒng)，定位在Ⅰ、Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞及細(xì)支氣管Clara細(xì)胞，在肺組織的濃度是血漿的6－10倍[5]。所以，當(dāng)PQ中毒后，大量巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等活化后，分泌細(xì)胞因子、生長因子、炎性介質(zhì)等，相互作用，共同促進(jìn)了炎癥進(jìn)展和肺纖維化的形成，最終導(dǎo)致患者的死亡。

圖1 肺組織超微結(jié)構(gòu)變化

UTI是從人體尿中分離純化的一種胰蛋白酶抑制劑，能有效地阻斷氧自由基、炎性介質(zhì)等惡性循環(huán)，抑制有害因子的釋放，從而減輕百草枯對(duì)組織細(xì)胞的損傷，減緩肺纖維化的發(fā)生。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，急性PQ中毒第7d大鼠肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)板層小體結(jié)構(gòu)不清，呈致密狀，表明大鼠一次性PQ灌胃導(dǎo)致肺損害形成；UTI治療組大鼠的肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞形態(tài)較染毒組清晰，胞質(zhì)內(nèi)可見多個(gè)板層小體，Ⅱ型細(xì)胞數(shù)量較PQ染毒組多，表明UTI對(duì)急性PQ中毒大鼠肺損傷有保護(hù)作用。類似研究顯示，UTI能減輕肺組織病理改變，改善肺功能，抑制中性粒細(xì)胞聚集，減輕肺水腫；能減輕炎癥反應(yīng)，防止起動(dòng)下游炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)[6]。這與課題組前期證實(shí)在HE染色結(jié)果下，UTI對(duì)PQ所致的肺損傷有保護(hù)作用的研究結(jié)果一致[7]。本實(shí)驗(yàn)同時(shí)在超微結(jié)構(gòu)變化方面顯示，UTI對(duì)急性PQ中毒肺損傷有保護(hù)作用。

[1]Roberts DM，Wilks MF，Roberts MS，et al.Changes in the concentrations of creatinine，cystatin C and NGAL in patients with acute paraquat self－poisoning[J].Toxicol Lett，2011，202（1）：69.

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[4]Liu XL，Sun ML，Ma DH，et al.Ulinastatin and Xuebijing in combination as a novel life－saving therapeutic strategy for acute paraquat poisoning：a case report[J].Crit Care Med，2009，37（12）：1025.

[5]Dinis－Oliveira RJ，Duarte JA，Sánchez－Navarro A，et al.Paraquat poisonings：mechanisms of lung toxicity，clinical features，and treatment[J].Crit Rev Toxicol，2008，38（1）：13.

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[7]孫明莉，李海峰，袁 媛，等.烏司他丁對(duì)百草枯中毒大鼠肺臟病理變化的影響[J].中華急診醫(yī)學(xué)雜志，2010，19（12）：1291.