楊建偉 呂俊生

中國(guó)醫(yī)科大學(xué)北京順義醫(yī)院普外科，北京 101300

粘液對(duì)胃腸道粘膜起保護(hù)潤(rùn)滑作用，其中的主要成份是粘蛋白。目前已有14 種粘蛋白被確定，MUC2 蛋白是被研究較多的一種，其是由MUC2 基因編碼的分泌型粘蛋白，主要存在于正常結(jié)直腸組織中，目前的一些研究發(fā)現(xiàn)：MUC2 蛋白還表達(dá)于胃癌結(jié)直腸癌及胰腺癌等組織中。該研究2007年1月—2008年12月間采用免疫組織化學(xué)S-P 法檢測(cè)胃癌組織，正常胃粘膜及腸化生組織中MUC2 蛋白的表達(dá),探討其在胃癌在發(fā)生發(fā)展過程中所起的作用，與胃癌生物學(xué)行為及預(yù)后的關(guān)系。報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來源

選取北京順義區(qū)醫(yī)院普外科行手術(shù)治療的55 例胃癌標(biāo)本，其中男37 例，女18 例，年齡36~78 歲，平均60.1 歲。按腫瘤生長(zhǎng)部位分類：胃底癌9 例，胃體癌19 例及胃竇部癌27 例。腫瘤未侵透粘膜深肌層10 例，未侵透漿膜下者23 例，侵透漿膜及以遠(yuǎn)者22 例。按大體類型分為限局型25 例,浸潤(rùn)型30 例。組織學(xué)按WHO 分型，高分化腺癌22 例，低分化腺癌22 例，粘液腺癌11例。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者34 例，未轉(zhuǎn)移者21 例。取同時(shí)期25 例胃粘膜腸化生標(biāo)本，15 例胃癌切緣正常粘膜（距癌灶>5 cm）并經(jīng)HE 鏡檢確定無癌組織及癌前病變做對(duì)照。55 例患者均于2014年1月進(jìn)行隨訪，其中尚生存的為35 例，已死亡20 例,總的5年生存率為63.6%。

1.2 方法

1.2.1 免疫組織化學(xué) 采用免疫組織化學(xué)SP 法，MUC2 粘蛋白的一抗稀釋溶度為1:100。主要試劑:鼠抗人MUC2 粘蛋白單克隆抗體濃縮液，購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)公司，兔抗鼠快捷型酶標(biāo)抗體、檸檬酸抗原修復(fù)液((pH 6.0)及DAB 顯色試劑盒均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司。所有標(biāo)木均經(jīng)過10%中性甲醛溶液固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋，2 μm 厚連續(xù)切片，免疫組織化學(xué)染色。免疫組織化學(xué)染色步驟：常規(guī)脫蠟脫水，清水沖洗，過氧化氫孵育10 min 清除內(nèi)源性過氧化物酶，抗原熱修復(fù)，滴加一抗，37 ℃孵育1 h，滴加二抗，常溫下孵育10 min，DAB 顯色3~5 min，蘇木素復(fù)染，二甲苯透明，中性樹膠封片。

1.2.2 結(jié)果判斷 細(xì)胞漿中出現(xiàn)棕黃色顆粒的細(xì)胞數(shù)>10%為陽性。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法

所有數(shù)據(jù)均經(jīng)SPSS17.0 軟件包進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)及四格表精確概率法進(jìn)行組間差異比較。

2 結(jié)果

2.1 MUC2 蛋白在正常胃粘膜，腸化生粘膜及胃癌中的表達(dá)

15 例正常粘膜中無MUC2 表達(dá)，腸化生粘膜中表達(dá)率為36.0%，胃癌組織中的表達(dá)率為61.8%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。陽性顆粒定位于細(xì)胞漿。見表1。

表1 MUC2 在正常粘膜與胃癌組織中的表達(dá)

2.2 MUC2 蛋白在胃癌中的表達(dá)與臨床病理特點(diǎn)及預(yù)后的關(guān)系

MUC2 蛋白在胃癌中的表達(dá)與患者年齡、性別、腫瘤部位、腫瘤大小、大體類型、腫瘤浸潤(rùn)深度、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)。與病理組織學(xué)類型及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，在高分化腺癌、低分化腺癌、粘液腺癌中的陽性表達(dá)率分別為50.0%、54.5%、100%，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組MUC2 陽性率分別為73.5%,42.9%, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。MUC2 蛋白陽性表達(dá)患者的五生存率為52.9%，陰性表達(dá)患者生存率為80.9%,兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表2、3。

表2 胃癌組織中MUC2 的表達(dá)與臨床病理特點(diǎn)之間關(guān)系

表3 胃癌組織中MUC2 的表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系

3 討論

MUC2 基因是1989年由美國(guó)學(xué)者Gum[1-2]等從小腸CDNA 表達(dá)文庫(kù)中克隆到的一種粘蛋白核心肽基因，其所編碼的MUC2 蛋白是一種富含糖鏈的分泌型糖蛋白，是粘液凝膠的主要成份，由上皮細(xì)胞合成和分泌，主要存在于正常結(jié)直腸組織中，在正常胃粘膜中幾乎沒有表達(dá)。目前的研究發(fā)現(xiàn)MUC2 蛋白在腸化生粘膜及胃癌粘膜中均有不同程度的表達(dá)[3]。該研究發(fā)現(xiàn)15 例正常粘膜中無MUC2 蛋白表達(dá)，腸化生粘膜中表達(dá)率為36.0%，在胃癌組織中表達(dá)率為61.8%，腸化生及胃癌組織中的表達(dá)高于正常粘膜，且胃癌組織與腸化生粘膜表達(dá)的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。進(jìn)一步證明腫瘤發(fā)展是正常粘膜－癌前病變－胃癌的分階段的過程,并提示蛋白的表達(dá)與成瘤過程正相關(guān)。汪榮泉[4]等通過用原位雜交法對(duì)癌前病變及胃癌組織中的MUC2mRNA 進(jìn)行檢測(cè)發(fā)現(xiàn)：MUC2 基因在成瘤過程中是明顯上調(diào)的。從基因水平證實(shí)了筆者的假設(shè)。該研究還發(fā)現(xiàn)，MUC2 蛋白在粘液腺癌中的表達(dá)率為100%，與高分化腺癌組及低分化腺癌組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），可以作為研究粘液腺癌的較好指標(biāo)。Baldus[5]等運(yùn)用免疫組化法研究128 例胃癌組織中MUC2 的表達(dá)發(fā)現(xiàn)其在腸型胃癌中的表達(dá)遠(yuǎn)高于彌漫型胃癌，并由此認(rèn)為MUC2 的表達(dá)與腸型胃癌的良好預(yù)后有關(guān)。而該研究在對(duì)患者的生存資料進(jìn)行分析中卻發(fā)現(xiàn)MUC2 陽性患者5年生存率（52.9%）低于MUC2 陰性患者(80.9%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），而且MUC2 在預(yù)后較差的粘液腺癌中表達(dá)較廣泛，還是說明MUC2 陽性表達(dá)與預(yù)后不佳有一定聯(lián)系，有待擴(kuò)大病例數(shù)進(jìn)一步研究。另外有文獻(xiàn)報(bào)道[6]：MUC2 與人vWF 的結(jié)構(gòu)相似因此有可能參與腫瘤的轉(zhuǎn)移擴(kuò)散。Sonodah[7]用RT-PCR 法檢測(cè)28 例PT1 期胃癌患者的286 枚陰性淋巴結(jié)中MUC2 及CEA 的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)MUC2 的表達(dá)率遠(yuǎn)高于后者，并由此發(fā)現(xiàn)MUC2 表達(dá)陽性淋巴結(jié)中的微轉(zhuǎn)移，且無假陽性，由此認(rèn)為MUC2 是淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移的敏感指標(biāo)。該研究中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病例中MUC2 表達(dá)率為73.5%，遠(yuǎn)高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病例中的表達(dá)率42.9%，和Machado JC[8]報(bào)道一致，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.102），因此考慮MUC2 在腫瘤轉(zhuǎn)移中還是有一定作用的，其表達(dá)增多時(shí)可能通過干預(yù)整合素和鈣粘素的作用而影響細(xì)胞的粘附和轉(zhuǎn)移,增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對(duì)正常細(xì)胞的粘附，從而有利于腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移。此外，MUC2 可在腫瘤細(xì)胞表面通過位阻現(xiàn)象影響主要組織相容性抗原對(duì)于腫瘤細(xì)胞特異性抗原的呈遞過程,并可掩蓋細(xì)胞表面的有關(guān)受體,從而抑制殺傷性T 淋巴細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的識(shí)別,最終導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞逃避免疫監(jiān)視。MUC2 在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移過程中的作用還需深入研究。綜上，MUC2 蛋白表達(dá)與粘液腺癌及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切均提示預(yù)后不佳。

[1] Gum JR, Byrd JC, Hicks JW, et al .Molecular cloning of human intestinal mucin cDNAs[J].J Biol Chem，1989,264:6480-6487.

[2] Gum JR, Hicks JW, Swallow DM, et al.Molecular cloning of cDNAs derived from a novel human intestinal mucin gene[J] .Biochem Biophy Res.Commun，1990,171:407-415.

[3] 徐倩，王本剛，袁媛，等.黏蛋白（MUC2）在不同胃疾病中的動(dòng)態(tài)表達(dá)及意義[J].外科理論與實(shí)踐，2011，16（3）：252-255.

[4] 汪榮泉，房殿春，劉為紋，等.胃癌及癌前病變組織中MUC2 摹因的表達(dá)[J].世界華人消化雜志，2000,8(3)：285-288.

[5] Baldus SE，Zirbes TK，Engel S，et al.Correlation of the immunohistochemical reactivity of mucin peptide cores MUCI an d MUC2 with the histopathological subtype and prognosis of gastric carcinoma[J].Int J Cancer，1998,79：l33-l38.

[6] Perez，Vilar J，Hill RL ,et al The structure and assembly of secreted mucins[J].J Biol Chem，1999,274(45)：3175l-31754.

[7] Snoda H，Yamamoto K，Kushima R，et a1.Detection of lymph node micro.metastasis in gastric cancer by MUG RT-PCR：usefulness in Ptl eases[J].J Surg Oncol，2004,88(2)：63-70.

[8] Machado JC，Nogueira AM，Cameiro F，et a1.Gastric eareirlomt exhibits distinct types of cell differentiation：immunohistochemical study of trefoil peptides (TFFI and TFF2)and mucins (MUC1，MUC2，MUC5Ac and MUC6)[J].J Pathol，2000,190：437-443.