劉曉鵬，孫小芳，江亞?wèn)|，黃 勇，丁振國(guó)，李 力，蔣曉軍

(1．湖北民族學(xué)院 生物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，湖北 恩施445000;2．南京同仁堂洪澤中藥材科技有限公司，江蘇 洪澤223200;3．南京醫(yī)藥股份股份有限公司 博士后工作站，江蘇 南京210012)

連錢草為唇形科活血丹屬植物活血丹［Glechoma longituba(Nakai)Kupr．］干燥地上部分，曬干;或鮮用．連錢草性味涼辛，微苦，微寒．歸肝、腎、膀胱經(jīng)［1］．連錢草具有利膽、利尿、抗菌、抗炎、降血糖、抗腫瘤以及抗腹瀉等藥理作用，主治黃疸型肝炎、膽囊炎、膽石癥、疳積、腎結(jié)石、膀胱結(jié)石、多發(fā)性膿瘍、瘡癰腫痛、嬰兒濕疹、跌打損傷、腮腺炎、牙痛等癥［2］．

連錢草喜陰濕，生于田野、林緣、路邊、林間草地、溪邊河畔或村旁陰濕草叢中;對(duì)土壤要求不嚴(yán);適宜在溫暖、濕潤(rùn)的氣候條件下生長(zhǎng)．除西北部地區(qū)外，中國(guó)各地均有分布，尤以江蘇產(chǎn)量大，質(zhì)量?jī)?yōu)，為江蘇產(chǎn)地道藥材，主要分布在南京、盱眙等地的丘陵山區(qū)的濕潤(rùn)環(huán)境中．

連錢草大田種植條件下，施肥不但與產(chǎn)量密切相關(guān)，而且與品質(zhì)關(guān)系很大．本文以大樣本隨機(jī)抽樣方法，對(duì)兩個(gè)地區(qū)的連錢草種植田塊在收獲期進(jìn)行田間取樣，采用數(shù)學(xué)方法，來(lái)分析植株N、P、K 含量與產(chǎn)量和品質(zhì)的數(shù)量關(guān)系．

1 材料與方法

1．1 材料與試劑

試驗(yàn)于2009－10、2010－06、2010－10、2012－06 在連錢草收獲期進(jìn)行田間取樣．取樣總數(shù)90 個(gè)．江蘇盱眙水沖崗連錢草為多年種植田塊;江蘇洪澤三河鎮(zhèn)連錢草栽種時(shí)期為2009－05．連錢草成熟的植株取樣后立即殺青、烘干，粉碎、過(guò)60 目篩，干燥保存．

硼酸、硫酸、溴甲酚綠、鉬酸銨、偏釩酸銨、2，6－二硝基酚、無(wú)水乙醇、蘆丁、亞硝酸鈉、硝酸鋁等均為分析純，購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司．

1．2 測(cè)定方法

1．2．1 連錢草氮、磷、鉀的含量測(cè)定 植株氮含量測(cè)定采用凱氏定氮法［3］，磷含量測(cè)定采用釩鉬黃比色法［3］，鉀含量測(cè)定采用火焰光度法［3］．

1．2．2 連錢草總黃酮含量 采用紫外分光光度計(jì)法對(duì)連錢草藥材總黃酮進(jìn)行測(cè)定［4］．

標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備:精密稱取120℃常壓干燥至恒重的蘆丁對(duì)照品20．56 mg，置于100 mL 的容量瓶中，加60%乙醇約60 mL，密塞，超聲使其溶解，放冷，加60%乙醇至刻度，搖勻，得蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液(0．2056 mg/mL)．精密量取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液0、1．0、2．0、3．0、4．0、5．0、6．0 mL，分別置于25 mL 的容量瓶中，分別加水6、5、4、3、2、1、0 mL，加5%亞硝酸鈉溶液1 mL，搖勻，放6 min，加三氯化鋁試液1 mL．搖勻，放置6 min，再加5%的氧化鈉溶液10 mL，加水至刻度，搖勻，以第1 管作空白對(duì)照在510 nm 處測(cè)吸光度．繪制濃度－吸光度曲線，求出回歸程為y=0．096 3A－0．000 14，r=0．999 1;式中:Y代表照品濃度(mg/mL)，A代表吸光度．對(duì)照品在0～0．049 3 mg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系．

連錢草總黃酮含量測(cè)定:稱取連錢草粉末0．5 g，置于具塞錐形瓶中，加60%乙醇60 mL，密塞，稱重，超聲處理50 min．冷卻至室溫后再稱重，用60%乙醇補(bǔ)足損失的重量，搖勻，離心，取上清為供試溶液．量取供試溶液3．0 mL，按標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備方法測(cè)定總黃酮的含量．

2 結(jié)果與分析

2．1 連錢草體內(nèi)氮、磷、鉀含量與產(chǎn)量的關(guān)系

圖1～3 分別為不同田塊90 個(gè)樣本的連錢草成熟期植株體內(nèi)氮、磷、鉀含量與產(chǎn)量的相關(guān)關(guān)系．

圖1 連錢草成熟期體內(nèi)氮含量與產(chǎn)量的關(guān)系Fig．1 Relationship between maturity nitrogen content and yield of Glechoma longituba

圖2 連錢草成熟期體內(nèi)磷含量與產(chǎn)量的關(guān)系Fig．2 Relationship between maturity phosphorus content and yield of Glechoma longituba

圖3 連錢草成熟期體內(nèi)鉀含量與產(chǎn)量的關(guān)系Fig．3 Relationship between maturity potassium content and yield of Glechoma longituba

從圖1 可以看出，連錢草產(chǎn)量與成熟期植株體內(nèi)氮含量呈極顯著直線關(guān)系，其回歸方程為:y=16．697x+26．003(R2=0．639 4，樣本數(shù)90)．亦即連錢草體內(nèi)氮含量高的田塊，其產(chǎn)量也極顯著地高．因此，追施氮肥仍然是目前生產(chǎn)上提高產(chǎn)量最重要的技術(shù)措施．

從圖2 可以看出，連錢草產(chǎn)量與成熟期植株體內(nèi)磷含量呈顯著直線關(guān)系，其回歸方程為:y=51．203x+48．528(R2=0．323 1，樣本數(shù)90)．從圖3 可以看出，連錢草產(chǎn)量與成熟期植株體內(nèi)鉀含量呈顯著直線關(guān)系，其回歸方程為:y=16．909x+24．045(R2=0．419 7，樣本數(shù)90)．同樣，連錢草體內(nèi)磷含量和鉀含量高的田塊，其產(chǎn)量也顯著地提高．因此，在追施氮肥的同時(shí)，也應(yīng)追施磷鉀肥．

2．2 連錢草體內(nèi)氮、磷、鉀含量與總黃酮含量的關(guān)系

圖4～6 分別為不同田塊90 個(gè)樣本的連錢草成熟期植株體內(nèi)氮、磷、鉀含量與總黃酮含量的相關(guān)關(guān)系．

圖4 連錢草成熟期體內(nèi)Fig．4氮 含R量ela與tio總nsh黃ip酮 b含etw量ee的n 關(guān)con系tents of maturity nitrogen and total flavonoid of Glechoma longituba

圖5 連錢草成熟期體內(nèi)Fig．5磷 含Re量la與tio總nsh黃ip酮 be含tw量ee的n c關(guān)on系tents of maturity phosphorus and total flavonoid of Glechoma longituba

圖6 連錢草成熟期體內(nèi)Fig．6鉀 含Re量lat與ion總sh黃ip 酮be含tw量een的 c關(guān)on系tents of maturity potassium and total flavonoid of Glechoma longituba

從圖4 可以看出，連錢草總黃酮含量與成熟期植株體內(nèi)氮含量既沒有顯著的直線相關(guān)關(guān)系，也不呈現(xiàn)有顯著相關(guān)性的二次拋物線關(guān)系．這表明，在目前的生產(chǎn)條件下，連錢草體內(nèi)氮含量高的田塊，其藥材總黃酮含量并不一定低．因此，生產(chǎn)上適當(dāng)追施氮肥并不一定會(huì)降低連錢草品質(zhì)．

從圖5 可以看出，連錢草總黃酮含量與成熟期植株體內(nèi)磷含量呈顯著直線關(guān)系，回歸方程為:y=1．437x+4．4026(R2=0．326 2，樣本數(shù)90)．從圖6 可以看出，連錢草總黃酮含量與成熟期植株體內(nèi)鉀含量呈極顯著直線關(guān)系，回歸方程為:y=0．469x+3．741(R2=0．413 7，樣本數(shù)90)．亦即連錢草體內(nèi)磷、鉀含量高的田塊，藥材總黃酮含量也高．這說(shuō)明在目前生產(chǎn)條件下，追施磷肥和鉀肥有利于提高連錢草品質(zhì)．

2．3 連錢草產(chǎn)量與總黃酮含量的關(guān)系

對(duì)連錢草不同田塊90 個(gè)樣本的產(chǎn)量和總黃酮含量進(jìn)行回歸分析，結(jié)果如圖7，連錢草產(chǎn)量與總黃酮含量呈現(xiàn)顯著水平的二次相關(guān)關(guān)系．回歸方程為:y=－0．000 2x2+0．06x+2．408 4(R2=0．209 4，樣本數(shù)90)．

連錢草產(chǎn)量和總黃酮含量的這種拋物線關(guān)系，也反映出大田生產(chǎn)上的實(shí)際狀況．在連錢草產(chǎn)量較低田塊，增加產(chǎn)量的措施也有利于提高品質(zhì)，但是在產(chǎn)量較高田塊，繼續(xù)增加產(chǎn)量的措施對(duì)品質(zhì)不利．

圖7 連錢草產(chǎn)量與總黃酮含量的關(guān)系(樣本數(shù)90)Fig．7 Relationship between total flavonoid content and yield of Glechoma longituba(n=90)

3 結(jié)論與討論

在目前生產(chǎn)條件下，追施氮肥是提高連錢草產(chǎn)量最直接最顯著的措施之一;追施磷肥和鉀肥也顯著有利于提高產(chǎn)量．同時(shí)，追施磷肥和鉀肥顯著有利于提高連錢草總黃酮含量;而追施氮肥并不一定會(huì)降低品質(zhì)，關(guān)鍵是追施的時(shí)間和總氮量．因此生產(chǎn)上應(yīng)該強(qiáng)調(diào)通過(guò)追施氮、磷、鉀肥料來(lái)同時(shí)提高產(chǎn)量和品質(zhì)．

連錢草產(chǎn)量和總黃酮含量的關(guān)系是顯著水平的拋物線關(guān)系．這種關(guān)系在一般藥用植物特別是全草類藥材生產(chǎn)上都存在［5－7］．協(xié)調(diào)產(chǎn)量和品質(zhì)，是這類中藥材高效優(yōu)質(zhì)栽培的目標(biāo)．

當(dāng)然，藥材的產(chǎn)量和品質(zhì)，除了受到施肥等生產(chǎn)技術(shù)措施的影響［8］，還受到氣候、土壤等環(huán)境生態(tài)因子的制約．另外，連錢草收割時(shí)期以及收割次數(shù)對(duì)產(chǎn)量和品質(zhì)的影響也很大［9］．

［1］ 國(guó)家藥典委員會(huì)．中華人民共和國(guó)藥典［M］．1 部．北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010．

［2］ 宋銳，張?jiān)疲瑓矔詵|，等．連錢草的化學(xué)成分及生物活性研究進(jìn)展［J］．中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2010，28(12):2511－2514．

［3］ 孫磊．植物營(yíng)養(yǎng)學(xué)實(shí)驗(yàn)［M］．北京:北京大學(xué)出版社，2012．

［4］ 鄭杭生，李計(jì)萍，韓煒，等．紫外－可見分光光度法測(cè)定總黃酮含量的方法學(xué)考察要點(diǎn)［J］．中成藥，2008，30(9):1364－1365．

［5］ 周佳民，尹小紅，陳超君，等．施氮水平對(duì)廣金錢草產(chǎn)量和活性成分含量的影響［J］．中國(guó)中藥雜志，2010(12):1533－1536．

［6］ 肖文中，鄧展來(lái)．不同栽培方式對(duì)青蒿生長(zhǎng)情況及產(chǎn)量和青蒿素含量的影響［J］．中國(guó)現(xiàn)代中藥，2008(4):44－45．

［7］ 姜寧，劉曉鵬，丁振國(guó)，等．連錢草總黃酮的超聲輔助提取研究［J］．湖北民族學(xué)院學(xué)報(bào):自然科學(xué)版，2014，32(3):241－244．

［8］ 張雁萍，楊志剛，陳顯國(guó)．不同基肥施用量對(duì)連錢草生長(zhǎng)情況及品質(zhì)的影響［J］．安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，39(10):5773－5774．

［9］ 黃齊慧，陳小英．不同采收期對(duì)連錢草中總黃酮的影響［J］．國(guó)際醫(yī)藥衛(wèi)生導(dǎo)報(bào)，2004，18(10):160－161．