周建華,馮娜,高敏
(山東師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,山東濟(jì)南250014)
金銀花為忍冬科多年生半常綠纏繞植物忍冬的花蕾,味甘、性寒,金銀花提取物的主要化學(xué)成分之一綠原酸能夠促進(jìn)膽汁分泌,金銀花提取物中的三萜皂苷對(duì)小鼠肝損傷有顯著保護(hù)作用,忍冬總皂苷能夠抑制肝中毒后血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶的升高[1],具有清熱解毒、保肝利膽[2],清除自由基等多種功效,是我國的傳統(tǒng)用藥,金銀花在食用之初即被認(rèn)為是一種“藥食同源”的綠色天然植物[3]。
葛花為豆科蝶形花亞科植物野葛的干燥花蕾。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明,葛花中的異黃酮能通過調(diào)節(jié)代謝和內(nèi)分泌系統(tǒng)來改善酒精引起的異常癥狀[4],能改善急性酒精中毒癥狀,減少酒精依賴性動(dòng)物的自發(fā)性酒精攝入量,對(duì)酒精和四氯化碳致肝損傷均具有一定的保護(hù)作用[5],是傳統(tǒng)的解酒中藥。
蜂蜜是昆蟲蜜蜂從開花植物的花中采得的花蜜在蜂巢中釀制的蜜。蜂蜜的糖類包括葡萄糖(24.73%~46.40%)、果糖(24.35%~48.16%)、蔗糖(0~11.00%)和麥芽糖(0~6.00%)等,總含量為75%~80%;灰分0.03%~0.09%左右;還有微量的維生素、氨基酸類、酶類、酵母、花粉粒和蠟質(zhì)等物質(zhì)。傳統(tǒng)中醫(yī)認(rèn)為蜂蜜有很好的解酒功效。
論文根據(jù)中藥金銀花、葛花及蜂蜜的藥理性質(zhì)[4-9],研制出復(fù)合口服液,通過對(duì)小白鼠進(jìn)行“翻正反射實(shí)驗(yàn)”觀察金銀花、葛花和蜂蜜復(fù)合口服液對(duì)小白鼠的解酒作用。
1.1.1 原料
金銀花:選用市售藥用一級(jí)品金銀花;葛花:選用市售藥用一級(jí)品葛花;洋槐蜂蜜:上海冠生園蜂制品有限公司;實(shí)驗(yàn)用酒56°二鍋頭:北京紅星股份有限公司。
1.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組
健康兩月齡SPF級(jí)昆明種雄性小鼠50只,體重23 g~26 g,隨機(jī)分為5個(gè)實(shí)驗(yàn)小組,即模型對(duì)照組、口服液1組、口服液2組、口服液3組、口服液4組。每組10只,所需實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均由山東大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。
1.1.3 儀器
電子天平:北京賽多利斯天平有限公司;JYL-390九陽料理機(jī):九陽股份有限公司;DK-450B型電熱恒溫?zé)崴邸GG-9070B型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱:上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司;SHB-III循環(huán)水式多用真空泵:鄭州長城科工貿(mào)有限公司;RE-2000旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器:上海榮亞生化儀器廠。
1.2.1 金銀花提取液的制備
選用質(zhì)地優(yōu)良的金銀花→洗凈→60℃烘3 h→粉碎40目過篩→加12倍去離子水,75℃恒溫浸提1 h,將浸出液過濾出,重復(fù)浸提三次→80℃下減壓濃縮至原浸提液體積的1/2→封口備用。
1.2.2 葛花提取液的制備
選擇質(zhì)地優(yōu)良的葛花→洗凈→60℃烘3 h→粉碎40目過篩→加14倍量的40%乙醇溶液浸提1.5 h→過濾出浸提液→加12倍體積量的40%乙醇溶液浸提1 h→過濾出浸提液→75℃下減壓濃縮至無乙醇味→封口備用。
1.2.3 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)溶液的配置
A液:生理鹽水;
B 液:金銀花提取液∶葛花提取液∶蜂蜜=5∶5∶0.15;
C 液:金銀花提取液∶葛花提取液∶蜂蜜=3∶7∶0.15;
D 液:金銀花提取液∶葛花提取液∶蜂蜜=1∶9∶0.15;
E 液:去離子水∶葛花提取液∶蜂蜜=3∶7∶0.15。
1.2.4 模型設(shè)計(jì)
小白鼠進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室后,飼養(yǎng)3 d禁食12 h后開始進(jìn)行醉酒實(shí)驗(yàn)。先對(duì)各組小白鼠分別灌胃A液、B液、C液、D液、E液0.25 mL/10 g體重,30 min后每10克體重灌胃0.15 mL 56°二鍋頭酒,每1 min觀察一次,統(tǒng)計(jì)各組實(shí)驗(yàn)小白鼠的醉酒拖尾時(shí)間、潛伏時(shí)間和醒酒時(shí)間。
1.2.5 小白鼠醉酒醒酒的判斷
利用“翻正反射”動(dòng)物實(shí)驗(yàn)來判斷醉酒、醒酒狀態(tài)[10-11]:給小白鼠灌酒后,將其背向下放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上,若此姿勢保持30 s以上則認(rèn)為翻正反射消失,即為醉酒,否則為未醉。拖尾現(xiàn)象為小白鼠給酒后過段時(shí)間會(huì)出現(xiàn)走路不穩(wěn),尾巴拖地現(xiàn)象。醉酒潛伏時(shí)間為酒后動(dòng)物出現(xiàn)翻正反射消失的時(shí)間,醒酒時(shí)間為灌酒后翻正反射消失到恢復(fù)的時(shí)間。
1.2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,用SPSS11.0軟件來進(jìn)行單因素方差分析處理,采用t檢驗(yàn)比較各實(shí)驗(yàn)組之間的差異性。
對(duì)小白鼠灌胃后,通過“翻正反射實(shí)驗(yàn)”來判斷小白鼠的醉酒與醒酒狀態(tài),每1 min觀察一次,連續(xù)觀察30 min,記錄每組小白鼠的醉酒只數(shù),研究各組溶液對(duì)小白鼠醉酒率的影響。結(jié)果見表1。
結(jié)果顯示,口服液實(shí)驗(yàn)2組(即金銀花提取液:葛花提取液:蜂蜜的比例為3∶7∶0.1)防醉效果明顯,而口服液1組、口服液3組的小白鼠醉酒率與對(duì)照組相比沒有顯著差異。口服液4組的小白鼠醉酒率與口服液1組、口服液3組及對(duì)照組的小白鼠醉酒率相比較沒有顯著差異,說明在口服液2組中金銀花提取液在小白鼠防醉作用中起到了很重要的作用。
表1 各處理對(duì)小白鼠醉酒率的影響Table 1 Effects of each treatment on drunken rate of mice
對(duì)小白鼠灌酒后,立刻進(jìn)行“翻正反射實(shí)驗(yàn)”,來判斷醉酒與醒酒狀態(tài),每1分鐘觀察一次,統(tǒng)計(jì)各組實(shí)驗(yàn)小白鼠的醉酒潛伏時(shí)間和醒酒時(shí)間。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。
表2 各處理對(duì)小白鼠醉酒潛伏時(shí)間、醒酒時(shí)間的影響Table 2 Effects of each treatment on drunken latent time and sober up time of mice
結(jié)果顯示,口服液2組的小白鼠在給酒后均出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象,出現(xiàn)拖尾的時(shí)間與對(duì)照組相比達(dá)到顯著性差異??诜?組、3組、4組的小白鼠與對(duì)照組的相比醉酒潛伏時(shí)間與對(duì)照組的相比雖有延長,但沒有顯著性差異;醒酒時(shí)間也有縮短,但沒有達(dá)到顯著性差異。
1)金銀花葛花和蜂蜜復(fù)合口服液起到醒酒防醉效果的最佳配比為3∶7∶0.1,該復(fù)合口服液能有效延長小白鼠的醉酒潛伏時(shí)間,縮短小白鼠醉酒后的醒酒時(shí)間,增加小白鼠對(duì)酒精的耐受力,有效降低小白鼠的醉酒率,對(duì)小白鼠的醉酒具有顯著的解酒作用。
2)過度飲酒會(huì)造成人體機(jī)能下降,嚴(yán)重者會(huì)造成脂肪肝、酒精性肝炎等,更嚴(yán)重者會(huì)造成休克、腦死亡等。臨床實(shí)驗(yàn)已證實(shí),葛花可以用于茶飲,達(dá)到緩解酒后嘔吐等癥狀,用于解酒護(hù)肝等[12]。蜂蜜中含有一種多數(shù)水果所不含的果糖,可以促進(jìn)酒精的分解吸收,有利于縮短醒酒時(shí)間。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明金銀花提取液在降低小白鼠醉酒率的過程中與葛花、蜂蜜可起到協(xié)同增效作用。
3)考慮到給小白鼠灌胃服白酒醉酒后影響給藥的問題,實(shí)驗(yàn)采用先給藥后給酒的灌胃方式,實(shí)驗(yàn)結(jié)果除了體現(xiàn)所研制口服液的解酒效果外,很大程度上還體現(xiàn)了其防醉效果,因此金銀花葛花和蜂蜜復(fù)合口服液的研制具有一定的社會(huì)適用價(jià)值。
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