張淑靜，劉力源，殷宗俊，丁月云，王菊花，周杰

(安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，安徽 合肥，230036)

研究控制肉質(zhì)相關(guān)性狀的遺傳基礎(chǔ)表明［1-3］，在雞的第1號(hào)染色體94cM處、牛的第5號(hào)染色體119.7cM處以及1～1.78(cM)處存在與肉多汁性、剪切力、大理石花紋等相關(guān)的數(shù)量性狀位點(diǎn)(QTLs)。因此，根據(jù) Animal QTLdb［4］提供的這些 QTLs信息，在豬的基因組中比對(duì)出了相應(yīng)的染色體位置。其中，腺苷酸琥珀酸裂解酶(adenylosuccinate lyase，ADSL)以及甘氨酰胺核苷酸合成酶(glycinamide ribonucleotide synthetase，GARS)、5-氨基咪唑核苷酸合成酶(aminoimidazole ribonucleotide synthetase，AIRS)和甘氨酰胺核苷酸轉(zhuǎn)甲基酶(glycinamide ribonucleotide transformylase，GART)基因分別位于豬第5號(hào)染色體7.19～7.23(cM)和第13號(hào)染色體119.4～119.5(cM)處。而文獻(xiàn)表明［5］，ADSL 和 GARS-AIRSGART是肌苷酸(inosine monophosphate，IMP)合成相關(guān)的2個(gè)關(guān)鍵酶基因。

長(zhǎng)期以來(lái)，研究豬的重點(diǎn)主要集中在提高生長(zhǎng)速度和增加瘦肉率方面，在肉品質(zhì)改善和提高以及肉質(zhì)性狀遺傳基礎(chǔ)等方面缺少關(guān)注，這樣導(dǎo)致了商品豬豬肉口感下降嚴(yán)重［6-7］。許多學(xué)者認(rèn)為豬肉的香味和適口性可能與肉中的肌內(nèi)脂肪、肌苷酸、游離脂肪酸組分等呈味物質(zhì)有關(guān)［8-10］。其中IMP鮮味最強(qiáng)，是肉質(zhì)鮮味的重要成分［5］。IMP在北京油雞中的遺傳力為0.23，屬中等遺傳力［11］，目前國(guó)際上已把 IMP含量作為一個(gè)影響雞肉風(fēng)味的重要指標(biāo)。然而國(guó)內(nèi)外有關(guān)豬IMP含量以及與IMP相關(guān)基因的研究較少，且結(jié)果不一［12-16］。本實(shí)驗(yàn)選取背最長(zhǎng)肌IMP含量為肉質(zhì)性狀指標(biāo)，研究影響IMP含量的基因ADSL與GARS-AIRS-GART在2種安徽地方豬種圩豬、六白豬以及外來(lái)豬種長(zhǎng)白豬肝臟、心臟、背最長(zhǎng)肌組織中的表達(dá)，以檢測(cè)這些基因在肝臟、心臟中轉(zhuǎn)錄水平以及在背最長(zhǎng)肌組織中轉(zhuǎn)錄水平與IMP含量的關(guān)系。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物及樣品采集

各試驗(yàn)用豬分別從安徽省安泰農(nóng)業(yè)開(kāi)發(fā)有限公司圩豬保種場(chǎng)選取待宰商品豬圩豬21頭，望江縣現(xiàn)代良種養(yǎng)殖有限公司選取六白豬13頭，安徽長(zhǎng)風(fēng)農(nóng)牧科技有限公司選取長(zhǎng)白豬6頭，常規(guī)飼養(yǎng)管理。(出欄日期地方豬10個(gè)月 ，長(zhǎng)白豬6個(gè)月)屠宰前禁食12 h，正常飲水。屠宰前禁喂24 h稱重，按“瘦肉型豬胴體性狀測(cè)定技術(shù)規(guī)范(NY/T825-2004)”方法屠宰，屠宰時(shí)取腰椎處背最長(zhǎng)肌，測(cè)定肌苷酸含量，分別取圩豬，六白豬，長(zhǎng)白豬的心臟、肝臟、背最長(zhǎng)肌新鮮組織100 mg，液氮冷凍，后轉(zhuǎn)移至 -80℃ 冰箱保存。

1.2 主要儀器、試劑

儀器:高速冷凍離心機(jī)(Sigma，德國(guó))，PCR儀(伯樂(lè)，美國(guó))，紫外分光光度計(jì)(島津，日本)，Rotorgene 6000熒光定量 PCR儀(Corbett，澳大利亞)，SMA1000超微量紫外分光光度計(jì)(Merinton，中國(guó))，高效液相色譜儀Aiglent1100、ZORBAX色譜柱SB-C18(5 μm，4.6 mm ×250 mm)、自動(dòng)進(jìn)樣器 G1313A(100 μL)、四元泵 G1311A(Agilent，美國(guó))，圓周振蕩器 MS3基本型(IKA，德國(guó))，離心機(jī) Eppendor FAG22331(Hamburg，德國(guó))，超純水器原子Ⅱ型(成都康林科技有限公司)，組織勻漿機(jī)AM-6(經(jīng)濟(jì)制作所，日本)，超聲波清洗機(jī)KQ-300DE(昆山市超聲儀器有限公司)，pH測(cè)定儀HI-9025(Hanna，意大利)。

試劑:Trizol Reagent、cDNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒、Premix TaqTMVersion 2.0、SYBR○RPremix Ex TaqTMⅡ(大連寶生物)，肌苷酸標(biāo)準(zhǔn)品(HPLC級(jí)，Sigma，美國(guó))，高氯酸(GR，含量70% ～72%)上海金鹿化工技術(shù)有限公司，甲醇、乙腈(Fisher，美國(guó))。

1.3 肌苷酸含量測(cè)定［17］

肌苷酸:高效液相色譜法測(cè)定肌肉中肌苷酸的含量，色譜柱:3.9 mm ×30 cm，C18柱。

1.3.1 樣品前處理

于屠宰后1.5 h內(nèi)迅速采集背最長(zhǎng)肌，當(dāng)冷藏時(shí)間達(dá)到24 h時(shí)，取出肉樣制備肌苷酸測(cè)定樣，使用絞肉機(jī)絞碎肌肉樣品，稱取5g，準(zhǔn)確至0.000 1 g，置于50 mL塑料離心管中，分次加入共20 mL 6%HClO4，用高速組織勻漿機(jī)勻漿。勻漿液以8 000 r/min離心13 min，過(guò)濾于100 mL三角瓶中。將沉淀物用15 mL 6%HClO4再次勻漿、離心，合并2次上清液，用5.0 mol/L和0.5 mol/L NaOH調(diào) pH值至6.5，轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中，定容搖勻。測(cè)定前用0.45 μm濾膜過(guò)濾后用于HPLC分析。

1.3.2 色譜條件

色譜柱:Agilent 1 100 d C18柱(5 μm，Φ4.6 mm ×150 mm);流動(dòng)相:50 mmol/L pH 6.5甲酸銨緩沖溶液(含5%甲醇);流速:1 mL/min;柱溫:25℃;進(jìn)樣量:5μl;紫外檢測(cè)波長(zhǎng):254 nm;運(yùn)行時(shí)間:標(biāo)準(zhǔn)工作液運(yùn)行4 min，樣品提取液運(yùn)行11 min。

1.4 組織RNA提取及反轉(zhuǎn)錄［18］

分別取圩豬，六白豬，長(zhǎng)白豬的心臟、肝臟、背最長(zhǎng)肌新鮮組織100 mg，液氮冷凍，按Trizol Reagent試劑盒使用說(shuō)明提取各組織總RNA。測(cè)定RNA的濃度和純度，甲醛變性凝膠電泳檢測(cè)RNA的完整性。RNA樣品于-80℃ 冰箱中保存。利用反轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cDNA。

按Trizol Reagent試劑盒要求提總RNA。紫外分光光度計(jì)測(cè)定OD260/OD280值在1.8～2.0為合格，根據(jù)OD260值計(jì)算RNA的產(chǎn)量。甲醛變性凝膠電泳檢測(cè)RNA的質(zhì)量;用反轉(zhuǎn)錄試劑盒對(duì)RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄。

1.5 背最長(zhǎng)肌中ADSL和GARS-AIRS-GART基因表達(dá)量的Q-PCR檢測(cè)

根據(jù)Genbank中豬 ADSL、GARS-AIRS-GART和內(nèi)標(biāo)β-Actin cDNA序列，利用Primer 5.0軟件設(shè)計(jì)引物序列，由上海生工生物公司合成引物。引物序列和PCR參數(shù)見(jiàn)表1。

表1 用于Real-time quantitative PCR的引物序列及PCR參數(shù)Table 1 Primer sequences and parameter used for real-time quantitative PCR

普通PCR檢測(cè)cDNA純度，相關(guān)參數(shù):95℃預(yù)變性5 min，95 ℃變性 30 s、58 ℃ 退火 30 s、72 ℃ 延伸30 s、30個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸10 min。取產(chǎn)物5 μL在1%的瓊脂凝膠上電泳，凝膠成像系統(tǒng)下觀察結(jié)果。熒光實(shí)時(shí)定量 PCR擴(kuò)增，反應(yīng)體系 25 μL:SYBR○RPremix Ex TaqTMⅡ12.5 μL，上、下游引物(10 μmol/L)各 1 μL，cDNA 2 μL，ddH2O(高壓)8.5 μL。95℃預(yù)變性5 min，95℃變性10 s、57.4℃退火20 s、72℃延伸15 s，45個(gè)循環(huán)。于72℃ 15 s時(shí)收集熒光值，從而得出每一個(gè)循環(huán)結(jié)束后cDNA擴(kuò)增后的量。

2 統(tǒng)計(jì)分析

用 2-ΔΔCT法對(duì)有效性數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析［20］。目的基因的相對(duì)表達(dá)量為 2-ΔΔCT，ΔΔCT =(CT.Target gene-CT.β-actin)x-(CT.Target gene-CT.β-actin)control。數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤(M±SE)表示，使用SPSS16.0軟件對(duì)結(jié)果中的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，均值差異顯著性采用One-Way ANOVA統(tǒng)計(jì)。顯著性差異水平為P＜0.05，極顯著性差異水平為 P＜0.01。采用Bivariate correlation分析進(jìn)行相關(guān)性分析。

3 結(jié)果分析

3.1 圩豬，六白豬，長(zhǎng)白豬肌肉中肌苷酸含量比較

長(zhǎng)白豬背最長(zhǎng)肌中肌苷酸極顯著高于六白豬與圩豬(P＜0.01)，而圩豬肌肉中肌苷酸和六白豬肌肉中肌苷酸含量無(wú)顯著差異(圖1)。

圖1 不同品種豬肌苷酸含量差異Fig.1 Comparison of IMP content between different breeds of pigs

3.2 圩豬，六白豬和長(zhǎng)白豬肝臟，心臟和背最長(zhǎng)肌組織中ADSL mRNA表達(dá)情況

3個(gè)豬種ADSL基因在相同組織的表達(dá)模式不盡相同，圩豬肝臟組織中ADSL mRNA表達(dá)量分別顯著和極顯著高于六白豬(P＜0.05)和長(zhǎng)白豬(P＜0.01);圩豬和長(zhǎng)白豬心臟ADSLmRNA表達(dá)量顯著高于六白豬(P＜0.05);圩豬背最長(zhǎng)肌組織ADSL mRNA表達(dá)量顯著高于六白豬(P＜0.05)，而六白豬與長(zhǎng)白豬無(wú)顯著差異。不同組織ADSL基因表達(dá)模式在3個(gè)豬種基本相同，均表現(xiàn)為背最長(zhǎng)肌中最高，心臟次之，肝臟最低的趨勢(shì)。其中在圩豬背最長(zhǎng)肌的表達(dá)量顯著高于肝臟(P＜0.05)(表2)。

3.3 圩豬，六白豬和長(zhǎng)白豬心臟，背最長(zhǎng)肌和肝臟組織中GARS-AIRS-GART mRNA表達(dá)情況

3個(gè)豬種GARS-AIRS-GART基因在相同組織的表達(dá)模式不盡相同，除長(zhǎng)白豬在背最長(zhǎng)肌組織中顯著高于六白豬(P＜0.05)外，其他均無(wú)明顯差異。GARS-AIRS-GART基因在3種豬的肝臟，心臟，背最長(zhǎng)肌的表達(dá)模式基本相同，即均表現(xiàn)為背最長(zhǎng)肌最高，肝臟次之，心臟最低的趨勢(shì)(表3)。

表2 圩豬，六白豬和長(zhǎng)白豬肝臟，心臟和背最長(zhǎng)肌組織中ADSL mRNA的表達(dá)情況Table 2 Expression levels of ADSL mRNA of liver，heart and longissimus dorsi muscle in Wei Pig，Liubai pig and Landraces

表3 圩豬，六白豬和長(zhǎng)白豬心臟，背最長(zhǎng)肌和肝臟組織中GARS-AIRS-GART mRNA的表達(dá)Table 3 Expression levels of GARS-AIRS-GART mRNA of liver，heart and longissimus dorsi muscle in Wei pig，Liubai pig and Landraces

3.4 基因表達(dá)量與IMP含量的相關(guān)性分析

ADSL基因在長(zhǎng)白豬肝臟的表達(dá)量與長(zhǎng)白豬背最長(zhǎng)肌的IMP含量顯著負(fù)相關(guān)(P＜0.05)。GARSAIRS-GART基因在圩豬肝臟和六白豬心臟的表達(dá)量分別與圩豬背最長(zhǎng)肌和六白豬背最長(zhǎng)肌的IMP含量呈極顯著負(fù)相關(guān)(P＜0.01)(表4)。

4 討論

肌苷酸是影響肌肉鮮味的主要成分之一，屠宰后動(dòng)物機(jī)體正常的生理代謝功能遭到破壞，細(xì)胞內(nèi)糖原有氧代謝轉(zhuǎn)化為無(wú)氧酵解，生成乳酸使pH值下降，同時(shí)肌肉中ATP減少使肌質(zhì)網(wǎng)功能失常，ATP酶活化，剩余ATP在ATP酶的作用下分解生成ADP，ADP在多種酶的作用下生成肌苷酸，并進(jìn)一步水解生成次黃嘌呤和核糖。肌肉中次黃嘌呤核苷酸及其他分解產(chǎn)物的積累可增加肉的鮮味［16］。呼紅梅等的研究表明肉質(zhì)優(yōu)良的地方品種豬肌肉IMP含量高于外來(lái)瘦肉型品種及雜交豬［16］。而劉家忠等報(bào)道梅山豬與杜洛克豬肌肉IMP含量無(wú)顯著差異［12］;陶勇等報(bào)道地方品種豬與外來(lái)品種及雜交豬肌肉IMP含量沒(méi)有明顯差異［13］;郭建鳳報(bào)道長(zhǎng)白豬、大約克及杜洛克豬肌肉IMP含量差異不顯著［15］;張克英等發(fā)現(xiàn)榮昌豬與長(zhǎng)白豬IMP無(wú)品種差異，但均高于大約克豬［14］。本實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)白豬背最長(zhǎng)肌肌肉中肌苷酸顯著高于六白豬與圩豬。由于肌苷酸的含量受動(dòng)物的品種、飼料、飼養(yǎng)環(huán)境、屠宰時(shí)間、肌肉酸堿度、屠宰后處理等因素的影響［21-24］，具體原因還有待進(jìn)一步研究。

表4 ADSL和GARS-AIRS-GART基因表達(dá)量與IMP含量的相關(guān)性分析Table 4 Correlation analysis between the expression level of ADSL and GARS-AIRS-GART gene and the IMP content

IMP在體內(nèi)的合成代謝過(guò)程十分復(fù)雜，涉及10種關(guān)鍵酶，由ADSL基因所編碼的腺苷酸琥珀酸裂解酶是嘌呤核苷酸合成過(guò)程中的關(guān)鍵酶之一。ADSL主要催化AMP生化合成的2個(gè)反應(yīng):(1)由SAC IAR生成AICAR的反應(yīng);(2)由腺苷酸琥珀酸生成腺苷酸單磷酸的反應(yīng)［25］。而 GARS、GART和 AIRS分別催化次黃嘌呤核苷酸合成的第二、三和五步反應(yīng)，從而加速次黃嘌呤和黃嘌呤的分解，而肌肉中次黃嘌呤核苷酸及其他分解產(chǎn)物的積累可增加肉的鮮味［26，27］。Ye等對(duì)北京油雞的研究結(jié)果得出以下結(jié)論，ADSL和GARS-AIRS-GART基因可能是影響肌肉中IMP含量的主效基因或與主效基因密切相關(guān)，由于IMP是最重要的風(fēng)味物質(zhì)之一，在ADSL和GARSAIRS-GART 2個(gè)基因中發(fā)現(xiàn)的標(biāo)記以及相關(guān)基因型都可以看作提高雞肉肉質(zhì)的潛在分子標(biāo)記［10］。Shu等運(yùn)用PCR-SSCP技術(shù)對(duì)雞GARS-AIRS-GART基因和肌肉IMP含量之間的關(guān)系進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)某些位點(diǎn)的突變對(duì)肌肉IMP的含量有一定的影響［21］。

現(xiàn)有的研究多集中于對(duì)禽類ADSL和GARSAIRS-GART基因多態(tài)性與IMP含量相關(guān)性的研究，對(duì)于豬ADSL和GARS-AIRS-GART基因組織表達(dá)量的研究很少，僅見(jiàn)劉基偉報(bào)道的成年通城豬 ADSL mRNA表達(dá)水平由高到低依次為背最長(zhǎng)肌，腎臟，肝臟和心臟［28］。在本實(shí)驗(yàn)中，ADSL基因在3種豬表達(dá)模式基本相同，均表現(xiàn)出背最長(zhǎng)肌中最高，心臟次之，肝臟表達(dá)量最低的趨勢(shì)。Tian等對(duì)草魚的研究表明，ADSL基因在肌肉組織中表達(dá)量最高，剩下的依次為心臟、腦、肝臟、腸、腎臟和鰓［29］。劉長(zhǎng)青等發(fā)現(xiàn)壽光雞ADSL表達(dá)最多的是胸肌，其次是肝臟、脾、腎和腿肌，在心、肺和腦中表達(dá)量較低［30］，這些結(jié)果均表明肌肉中ADSL基因的表達(dá)量最高，與本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果一致。目前尚未見(jiàn)GARS-AIRS-GART基因在組織中表達(dá)量的研究報(bào)道，本研究發(fā)現(xiàn)GARS-AIRS-GART基因在背最長(zhǎng)肌中的表達(dá)量最高，肝臟次之，心臟較低，3種豬的表達(dá)模式基本相同。

徐善金等發(fā)現(xiàn)，鴨ADSL基因的CDS序列與雞的同源性極高，在肌肉組織中的表達(dá)量與對(duì)應(yīng) IMP含量表現(xiàn)為不同品種、同一品種不同性別、同一性別不同部位間極顯著或顯著差異，相關(guān)性分析表明，ADSL基因表達(dá)量與IMP含量呈對(duì)數(shù)函數(shù)關(guān)系，兩者顯現(xiàn)出顯著正相關(guān)［31］。

而本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，長(zhǎng)白豬的背最長(zhǎng)肌肌苷酸含量高于圩豬和六白豬。ADSL和GARS-AIRS-GART mRNA表達(dá)量均表現(xiàn)為在背最長(zhǎng)肌中高于心臟和肝臟的趨勢(shì)。此外，相關(guān)性分析表明，ADSL基因和GARS-AIRS-GART基因表達(dá)量與IMP含量負(fù)相關(guān)，與在禽類的結(jié)果不同，這可能與畜禽的種屬差異有關(guān)，其具體的作用機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

［1］ Gill J L，Bishop S C，McCorquodale C，et al.Associations between single nucleotide polymorphisms in multiple candidate genes and carcass and meat quality traits in a commercial Angus-cross population［J］.Meat Sci，2010，86(4):985-93.

［2］ Atzmon G，Blum S，F(xiàn)eldman M，et al.QTLs detected in a multigenerational resource chicken population［J］J Hered，2008，99(5):528-38.

［3］ McClure M C，Morsci N S，Schnabel R D，et al.A genome scan for quantitative trait loci influencing carcass，post-na-tal growth and reproductive traits in commercial Angus cattle［J］.Anim Genet，2010 ，41(6):597-607.

［4］ http://cn.animalgenome.org/cgi-bin/QTLdb/index.

［5］ Ye M H，Chen J L，Zhao G P，et al.Correlation between polymorphisms in ADSL and GARS-AIRS-GART genes with inosine 5'-monophosphate(IMP)contents in Beijingyou chickens［J］.British Poultry Science，2010，51(5):609-613.

［6］ 潘剛.影響豬肌肉生長(zhǎng)及肉質(zhì)相關(guān)四個(gè)候選基因的分離、鑒定［D］.武漢:華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，2008.

［7］ 王珺，尚永彪，李洪軍.PSE豬肉的鑒別與控制［J］.食品工業(yè)科技，2012，14:380-384.

［8］ 孟令軍.榮昌乳豬理化特性及主體風(fēng)味物質(zhì)的研究［D］.重慶:西南大學(xué)，2008.

［9］ 郭遼樸.榮昌乳豬與PIC乳豬不同部位肌肉理化特性及主體風(fēng)味物質(zhì)研究［D］.重慶:西南大學(xué)，2008.

［10］ 王薇.山豬肉質(zhì)性狀主要相關(guān)基因的遺傳特性及其對(duì)肉質(zhì)的作用和影響［D］.南京:南京師范大學(xué)，2012.

［11］ Chen J L，Zhao G P，Zheng M Q，et al.Estimationof genetic parameters for contents of intramuscular fat andinosine-5'-monophosp-hate and carcass traits in Chinese Beijing-You chickens［J］.Poult Sci，2008，87:1 098-1 010.

［12］ 劉家忠，陳潤(rùn)生.豬肉中肌苷酸含量及其在冷藏和加熱過(guò)程中變化規(guī)律的研究［J］.養(yǎng)豬，1991(3):10-12.

［13］ 陶勇，劉宗華，張牧，等.不同組合豬肌肉肌苷酸含量的分析［J］.黑龍江畜牧獸醫(yī)，2001(10):17.

［14］ 張克英，陳代文，胡祖禹.次黃嘌呤核苷酸和膠原蛋白與豬肉品質(zhì)的關(guān)系研究［J］.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2002，20(1):56-59.

［15］ 郭建鳳，呼紅梅，武英，等.長(zhǎng)白豬、大約克及杜洛克肌肉品質(zhì)研究［J］.家畜生態(tài)學(xué)報(bào)，2009，30(1):34-39.

［16］ 呼紅梅，郭建鳳，朱榮生，等.不同品種豬背最長(zhǎng)肌肌苷酸和肌內(nèi)脂肪含量的比較［J］.揚(yáng)州大學(xué)學(xué)報(bào):農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版，2011，32(3):34-36.

［17］ 吳瑩瑩，李文英，謝明，等.高效液相色譜法測(cè)定肌肉中肌苷酸的含量［J］.食品科學(xué)，2005，26(12):191-192.

［18］ 李國(guó)喜，寧小敏，李新建，等.豬組織中miR-10 3實(shí)時(shí)定量PCR分析時(shí)合適內(nèi)參的確定［J］.中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào)，2009，25(12):1 149-1 154.

［19］ 付永，魏雅萍，孟茹，等.黃牛牦牛和犏牛睪丸組織DAZL基因?qū)崟r(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法的建立［J］.西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)2013，22(1):12-18.

［20］ Livak K J，Schmittgen T D.Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2-ΔΔCTmethod［J］.Methods，2001，25(4):402-408.

［21］ 孫玉民，羅明.畜禽肉品學(xué)［M］.濟(jì) 南:山東科技出版社，1993.

［22］ Tikk M，Tikk K，T?rngren MA，et al.Development of inosine monophosphate and its degradation products during aging of pork of different qualities in relation to basic taste and retronasal flavor perception of the meat［J］.J Agric Food Chem，2006，54(20):7 769-7 777.

［23］ 汪以真，許梓榮，馮杰.甜菜堿對(duì)豬肉品質(zhì)的影響及機(jī)理探討［J］.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)2000，33(1):94-99.

［24］ 陳國(guó)宏，侯水生，吳信生，等.中國(guó)部分地方雞肌肉肌苷酸含量研究［J］.畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2000，31(3)，211-215.

［25］ SHU J T，BAO W B，ZHAN X Y，et al.Combined effect of mutations in ADSL and GARS-AIRS-GART genes on IMP content in chickens［J］.British Poultry Science，2009，50:680-686.

［26］ Julie L C，Richard G M.Analysis of a mouse gene encoding three steps of purine synthesis reveals use of an intronic polyadenylation signal without alternative exon usage［J］.The Journal of Biological Chemistry，1995，270(27):1 823-1 832.

［27］ Disha B，Krishnadas N.Potential interaction between the GARS-AIRS-GART Gene and CP2/LBP-1c/LSF transcription factor in down syndrome-related alzheimer disease［J］.Cell Mol Neurobiol，2007，27:1117-1126.

［28］ 劉基偉，徐日福，李奎，等.豬ADSL基因克隆及其在部分組織中的 mRNA定量表達(dá)［J］.畜牧與獸醫(yī)，2010，42(6):22-27.

［29］ YUAN T，GU J R，GU W B，et al.Molecular cloning，characterization and expression analysisof adenylosuccinate lyase gene in grass carp(Ctenopharyngodon idella)［J］.Mol Biol Rep，2011，38:2 059-2 065.

［30］ 劉長(zhǎng)青，張洪海，文杰，等.壽光雞腺苷酸琥珀酸裂解酶ADSL基因的表達(dá)與克隆化細(xì)胞株的篩選［J］.畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2009，40(7):982-991.

［31］ 徐善金，虞德兵，汪峰，等.鴨腺苷琥珀酸裂解酶基因序列特征及表達(dá)與肌肉肌苷酸含量的相關(guān)性分析［J］.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，45(4):774-785.