王玲娜+劉紅燕+李佳+張永清

摘 要：采用HPLC法同時(shí)測(cè)定不同產(chǎn)區(qū)忍冬葉中8種有效成分（6種綠原酸類和2種黃酮類）的含量，并進(jìn)行顯著性分析；采用GTMS 3.0系統(tǒng)軟件分析忍冬葉有效成分的含量與氣候因子間的灰色關(guān)聯(lián)度。結(jié)果表明：不同產(chǎn)區(qū)忍冬葉有效成分含量差異顯著，山東產(chǎn)區(qū)忍冬葉質(zhì)量最佳，其次為河北、河南；日照時(shí)數(shù)、降雨量、相對(duì)濕度是影響忍冬葉有效成分含量的主導(dǎo)氣候因子。

關(guān)鍵詞：忍冬葉；有效成分；氣候因子；灰色關(guān)聯(lián)度

中圖分類號(hào)：S567.7+90.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)號(hào)：A 文章編號(hào)：1001-4942（2014）11-0057-05

忍冬葉源于忍冬科植物忍冬（Lonicera japonica Thunb.）的干燥葉，具清熱解毒、涼散風(fēng)熱之功效[1]。隨著對(duì)忍冬葉藥理、活性成分研究的不斷深入[2～6]，影響忍冬葉質(zhì)量的因素受到了廣泛關(guān)注。植物的次生代謝產(chǎn)物及其含量是評(píng)價(jià)藥材品質(zhì)的重要指標(biāo)，其合成和積累除受自身遺傳特性決定外，很大程度上受生長(zhǎng)環(huán)境、氣候、土壤等生態(tài)因素的直接或間接影響[7，8]，因此深入探討環(huán)境因子對(duì)藥用植物次生代謝產(chǎn)物的影響，對(duì)于提高藥材質(zhì)量及藥用植物生產(chǎn)規(guī)范化、現(xiàn)代化、規(guī)?；哂兄匾饬x。本試驗(yàn)采用HPLC法同時(shí)測(cè)定不同產(chǎn)區(qū)忍冬葉中新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、蘆丁、木犀草苷、異綠原酸B、異綠原酸A、異綠原酸C 8種有效成分的含量，并對(duì)其進(jìn)行了差異性分析；同時(shí)，采用GTMS 3.0系統(tǒng)軟件對(duì)忍冬葉有效成分的含量與氣候因子間的關(guān)聯(lián)度進(jìn)行了分析，以期為忍冬葉多成分內(nèi)控質(zhì)量奠定基礎(chǔ)，并進(jìn)一步闡釋影響不同產(chǎn)區(qū)忍冬葉活性成分含量的主導(dǎo)氣候因子。

1 材料與方法

1.1 供試材料

忍冬葉于2013年7～8月份采集于山東、河南、河北等種植基地，樣品采集后統(tǒng)一以硅膠干燥，經(jīng)山東中醫(yī)藥大學(xué)周鳳琴教授鑒定，確認(rèn)均為忍冬科植物忍冬（Lonicera japonica Thunb.）的干燥葉；不同產(chǎn)區(qū)相應(yīng)的氣候資料來(lái)自2012～2013年的《中國(guó)地面氣候資料》（中國(guó)氣象局內(nèi)部資料）。

1.2 儀器與試劑

安捷倫1260高效液相色譜儀（包括G1311C四元泵、G1329B自動(dòng)進(jìn)樣器、G1315B二極管陣列檢測(cè)器、G1316A柱溫箱和Agilent ChemStation 工作站）；電子分析天平（梅特勒-托利多儀器）；超聲儀（KQ-500DE型）。

蘆?。?00080-200306）對(duì)照品購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所；新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、木犀草苷、異綠原酸B、異綠原酸A、異綠原酸C（批號(hào)分別為：PA0819RA13、20130415、ZS0922BA13、20130521、20131021、20130816、20130924）對(duì)照品均由上海源葉生物科技有限公司提供。

乙腈、磷酸為色譜純，其余試劑均為分析純。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 液相色譜條件 色譜柱：ZORBAXSB-C18 （4.6 mm×250 mm，5 μm）；流速1.0 mL/min；柱溫30℃；進(jìn)樣量：20 μL；檢測(cè)波長(zhǎng)為325、350 nm。流動(dòng)相為0.1%甲酸水溶液（A）和乙腈（B）；洗脫程序如下：0～10 min，A相92%～90%，B相8%～10%；10～20 min，A相90%～85%，B相10%～15%；20～30 min，A相85%，B相15%；30～40 min，A相85%～75%，B相15%～25%；40～60 min，A相75%～0，B相25%～100%。

1.3.2 對(duì)照品溶液制備 稱取適量新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、蘆丁、木犀草苷、異綠原酸B、異綠原酸A、異綠原酸C對(duì)照品，用50%的甲醇配制成單個(gè)對(duì)照品儲(chǔ)備液，分別量取適量各儲(chǔ)備液配制成系列濃度的混合對(duì)照品。

1.3.3 供試品溶液制備 稱取忍冬葉粉末0.5 g，置于50 mL具塞錐形瓶中，加入50%甲醇25 mL，密塞，稱重，超聲處理（功率100 W，頻率100 Hz）30 min，放冷，50%甲醇溶液補(bǔ)重，過(guò)微孔濾膜，取續(xù)濾液，即得。

1.4 方法學(xué)考察

1.4.1 線性關(guān)系的考察 分別吸取不同體積新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、蘆丁、木犀草苷、異綠原酸B、異綠原酸A、異綠原酸C 8種有效成分儲(chǔ)備液，以50%甲醇稀釋成不同質(zhì)量濃度的系列溶液。按上述色譜條件測(cè)定，以對(duì)照品的質(zhì)量濃度（x）為橫坐標(biāo)，峰面積（y）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，見表1。

1.4.2 精密度試驗(yàn) 取1.3.3制備的樣品溶液一份，連續(xù)進(jìn)樣6次，以峰面積計(jì)算新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、蘆丁、木犀草苷、異綠原酸B、異綠原酸A、異綠原酸C的RSD分別為1.22%、2.38%、1.10%、2.34%、1.12%、2.10%、1.67%、1.13%，表明該方法精密度良好。

1.4.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取1.3.3制備的樣品溶液一份，分別于0、2、4、6、16、24 h后進(jìn)樣分析，結(jié)果顯示，在該色譜條件下，新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、蘆丁、木犀草苷、異綠原酸B、異綠原酸A、異綠原酸C的穩(wěn)定性分別為2.22%、2.34%、1.78%、2.13%、0.98%、1.45%、2.55%、3.01%，表明在24 h內(nèi)，有效成分溶液是穩(wěn)定的。

1.4.4 重復(fù)性試驗(yàn) 稱取6份同一產(chǎn)地忍冬葉樣品各0.5 g，按1.3.3方法制備供試品溶液。結(jié)果顯示，新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、蘆丁、木犀草苷、異綠原酸B、異綠原酸A、異綠原酸C的RSD分別為3.0%、1.6%、3.7%、2.3%、3.2%、3.3%、3.2%、3.0%，表明該方法重復(fù)性良好。

1.4.5 加標(biāo)回收率試驗(yàn) 稱取6份已知含量的樣品各0.5 g，加入適量新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、蘆丁、木犀草苷、異綠原酸B、異綠原酸A、異綠原酸C對(duì)照品溶液，按供試品溶液的制備方法制備溶液并測(cè)定，計(jì)算平均回收率為99.47%～102.10%，RSD為0.61%～2.28% ，表明該方法回收率良好（表2）。endprint

1.5 樣品含量測(cè)定

本試驗(yàn)選取3個(gè)省份共9個(gè)產(chǎn)區(qū)忍冬葉樣品，按照1.3.3方法制備供試品液，記錄色譜峰面積，分別代入回歸方程，計(jì)算不同產(chǎn)區(qū)8種有效成分的含量，并進(jìn)行單因素方差分析。

1.6 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 17.0系統(tǒng)軟件進(jìn)行不同產(chǎn)區(qū)忍冬葉中有效成分含量的單因素方差分析；采用GTMS 3.0系統(tǒng)軟件進(jìn)行不同產(chǎn)區(qū)忍冬葉有效成分含量與氣候因子之間的灰色關(guān)聯(lián)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 混合對(duì)照品與樣品的色譜圖

在1.3.1色譜條件下，所得混合對(duì)照品（A）與樣品（B）的色譜圖如圖1所示。

2.2 樣品含量的測(cè)定

由表3可知，不同省份的忍冬葉8種有效成分含量差異極顯著，同一省份不同產(chǎn)區(qū)間含量差異較小。山東各產(chǎn)區(qū)新綠原酸、蘆丁、木犀草苷、異綠原酸A的含量均高于河北、河南產(chǎn)區(qū)，且隱綠原酸、異綠原酸B、異綠原酸C含量總體較好，說(shuō)明山東產(chǎn)區(qū)忍冬葉有效成分含量均較高且穩(wěn)定性好，忍冬葉藥材質(zhì)量較高。河南產(chǎn)區(qū)綠原酸、隱綠原酸、異綠原酸A及異綠原酸C含量變異較大，分析可能與當(dāng)?shù)卦耘喙芾砟Ｊ接嘘P(guān)；河北產(chǎn)區(qū)蘆丁、木犀草苷、異綠原酸C含量最低，但總體來(lái)看各有效成分含量變化較河南產(chǎn)區(qū)穩(wěn)定。

2.3 氣候因子與忍冬葉8種有效成分含量的灰色關(guān)聯(lián)度

分別以9個(gè)產(chǎn)區(qū)忍冬葉的8種有效成分含量數(shù)據(jù)作參考序列x0（k），以所在地的6個(gè)主要?dú)夂蛞蜃臃謩e作為比較序列x1（k）、x2（k）、x3（k）、x4（k）、x5（k）、x6（k），計(jì)算8種有效成分的含量與各氣候因子的灰色關(guān)聯(lián)度。

由表4可知，影響新綠原酸含量的主要?dú)夂蛞蜃邮墙涤炅浚╮=0.8818）；影響綠原酸含量的主要?dú)夂蛞蜃邮侨照諘r(shí)數(shù)（r=0.9572）、相對(duì)濕度（r=0.8546）；影響隱綠原酸含量的主要?dú)夂蛞蜃邮窍鄬?duì)濕度（r=0.9711）、最高溫度（r=0.8801），其次是平均溫度和日照時(shí)數(shù)；影響蘆丁含量的主要?dú)夂蛞蜃邮墙涤炅浚╮=0.8815）；影響木犀草苷含量的主要?dú)夂蛞蜃邮侨照諘r(shí)數(shù)（r=0.8677）和降雨量（r=0.8666）；影響異綠原酸B、異綠原酸A、異綠原酸C含量的主要?dú)夂蛞蜃泳墙涤炅亢腿照諘r(shí)數(shù)。綜上所述，6個(gè)氣候因子中，日照時(shí)數(shù)、降雨量、相對(duì)濕度對(duì)忍冬葉有效成分含量影響較大。

3 結(jié)論與討論

忍冬葉中化學(xué)成分含量與氣候因子之間關(guān)系密切，但由于地理現(xiàn)象與問(wèn)題的復(fù)雜以及人們認(rèn)識(shí)水平的限制，得到的信息常帶有某種不確定性，許多因素之間的關(guān)系很難用簡(jiǎn)單的統(tǒng)計(jì)方法分析界定。在灰色關(guān)聯(lián)分析中，將眾多因子視為灰色系統(tǒng)，各因子的重要性以關(guān)聯(lián)度排序表示，關(guān)聯(lián)度大，表示該指標(biāo)重要，克服了以往對(duì)因子進(jìn)行評(píng)判的主觀性和粗放性，能夠充分揭示各環(huán)境因子對(duì)忍冬葉活性成分的重要性[6，9]。

單因素方差分析結(jié)果顯示，不同省份間忍冬葉有效成分含量差異極為顯著，說(shuō)明環(huán)境因子對(duì)忍冬葉有效成分的合成影響較大。山東、河南、河北三大省區(qū)相比較，山東產(chǎn)區(qū)忍冬葉有效成分含量最高，質(zhì)量較佳；其次為河北、河南。三大省區(qū)內(nèi)所采集樣品地理位置較為接近，氣候因子一致，但樣品間部分有效成分含量有所差異，說(shuō)明除環(huán)境因子外，栽培品種、人工栽培管理模式等對(duì)忍冬葉有效成分的合成也有不同程度的影響。

灰色關(guān)聯(lián)分析結(jié)果表明，忍冬葉的有效成分含量與氣候因子密切相關(guān)，日照時(shí)數(shù)、降雨量及相對(duì)濕度是影響忍冬葉有效成分含量差異的主要?dú)夂蛞蜃?，而溫度并不是影響綠原酸（上接第60頁(yè)）含量的重要因子，這與查菲娜等[10～12]對(duì)影響金銀花中綠原酸含量的氣候因子分析結(jié)果一致，各氣候因子對(duì)忍冬葉有效成分影響的機(jī)理，還有待進(jìn)一步研究。

參 考 文 獻(xiàn)：

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：52，412-413.

[2] 管雪梅，郭慶梅，王秀鳳，等.8個(gè)不同種質(zhì)忍冬葉中綠原酸含量測(cè)定[J].山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，32（5）：410-412.

[3] 茍占平，萬(wàn)德光.6種忍冬葉中綠原酸及總咖啡酰奎寧酸含量測(cè)定[J].中藥材，2008，31（3）：388-390.

[4] 時(shí)新剛，舒希凱，劉偉，等.HPLC法同時(shí)測(cè)定忍冬的花、葉中木犀草苷和綠原酸含量[J].山東科學(xué)，2013，26（4）：20-23.

[5] 李瑞國(guó).忍冬不同器官3種活性成分的測(cè)定[J].邢臺(tái)學(xué)院學(xué)報(bào)，2011，26（4）：188-189.

[6] 邵瑩，吳啟南，樂巍，等.淡竹葉品質(zhì)與主導(dǎo)氣候因子的灰色關(guān)聯(lián)度分析[J]. 中國(guó)現(xiàn)代中藥，2013，15（6）：476-481.

[7] 李彥，周曉東，樓浙輝，等.植物次生代謝產(chǎn)物及影響其積累的因素研究綜述[J].江西林業(yè)科技，2012（3）：54-60.

[8] 曹海祿，曹國(guó)番，魏建和，等.遺傳和環(huán)境因子對(duì)藥用植物品質(zhì)的影響[J].中草藥，2007，38（5）：785-787.

[9] 李倩，梁宗鎖，董娟娥，等. 丹參品質(zhì)與主導(dǎo)氣候因子的灰色關(guān)聯(lián)度分析[J]. 生態(tài)學(xué)報(bào)，2010，30（10）：2569-2575.

[10] 查菲娜，閆偉杰，陳金英，等.氣象因素對(duì)金銀花中綠原酸含量的影響[J].氣象與環(huán)境科學(xué)，2008，31（S1）：166-168.

[11] 邢俊波，李萍，張重義.金銀花質(zhì)量與生態(tài)系統(tǒng)的相關(guān)性研究[J].中醫(yī)藥學(xué)刊，2003，21（8）：1237-1238.

[12] 張重義，李萍，陳君，等. 金銀花道地與非道地產(chǎn)區(qū)土壤微量元素分析[J]. 中國(guó)中藥雜志，2003，28（3）：18-24. 山 東 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué) 2014，46（11）：72～74，78endprint

1.5 樣品含量測(cè)定

本試驗(yàn)選取3個(gè)省份共9個(gè)產(chǎn)區(qū)忍冬葉樣品，按照1.3.3方法制備供試品液，記錄色譜峰面積，分別代入回歸方程，計(jì)算不同產(chǎn)區(qū)8種有效成分的含量，并進(jìn)行單因素方差分析。

1.6 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 17.0系統(tǒng)軟件進(jìn)行不同產(chǎn)區(qū)忍冬葉中有效成分含量的單因素方差分析；采用GTMS 3.0系統(tǒng)軟件進(jìn)行不同產(chǎn)區(qū)忍冬葉有效成分含量與氣候因子之間的灰色關(guān)聯(lián)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 混合對(duì)照品與樣品的色譜圖

在1.3.1色譜條件下，所得混合對(duì)照品（A）與樣品（B）的色譜圖如圖1所示。

2.2 樣品含量的測(cè)定

由表3可知，不同省份的忍冬葉8種有效成分含量差異極顯著，同一省份不同產(chǎn)區(qū)間含量差異較小。山東各產(chǎn)區(qū)新綠原酸、蘆丁、木犀草苷、異綠原酸A的含量均高于河北、河南產(chǎn)區(qū)，且隱綠原酸、異綠原酸B、異綠原酸C含量總體較好，說(shuō)明山東產(chǎn)區(qū)忍冬葉有效成分含量均較高且穩(wěn)定性好，忍冬葉藥材質(zhì)量較高。河南產(chǎn)區(qū)綠原酸、隱綠原酸、異綠原酸A及異綠原酸C含量變異較大，分析可能與當(dāng)?shù)卦耘喙芾砟Ｊ接嘘P(guān)；河北產(chǎn)區(qū)蘆丁、木犀草苷、異綠原酸C含量最低，但總體來(lái)看各有效成分含量變化較河南產(chǎn)區(qū)穩(wěn)定。

2.3 氣候因子與忍冬葉8種有效成分含量的灰色關(guān)聯(lián)度

分別以9個(gè)產(chǎn)區(qū)忍冬葉的8種有效成分含量數(shù)據(jù)作參考序列x0（k），以所在地的6個(gè)主要?dú)夂蛞蜃臃謩e作為比較序列x1（k）、x2（k）、x3（k）、x4（k）、x5（k）、x6（k），計(jì)算8種有效成分的含量與各氣候因子的灰色關(guān)聯(lián)度。

由表4可知，影響新綠原酸含量的主要?dú)夂蛞蜃邮墙涤炅浚╮=0.8818）；影響綠原酸含量的主要?dú)夂蛞蜃邮侨照諘r(shí)數(shù)（r=0.9572）、相對(duì)濕度（r=0.8546）；影響隱綠原酸含量的主要?dú)夂蛞蜃邮窍鄬?duì)濕度（r=0.9711）、最高溫度（r=0.8801），其次是平均溫度和日照時(shí)數(shù)；影響蘆丁含量的主要?dú)夂蛞蜃邮墙涤炅浚╮=0.8815）；影響木犀草苷含量的主要?dú)夂蛞蜃邮侨照諘r(shí)數(shù)（r=0.8677）和降雨量（r=0.8666）；影響異綠原酸B、異綠原酸A、異綠原酸C含量的主要?dú)夂蛞蜃泳墙涤炅亢腿照諘r(shí)數(shù)。綜上所述，6個(gè)氣候因子中，日照時(shí)數(shù)、降雨量、相對(duì)濕度對(duì)忍冬葉有效成分含量影響較大。

3 結(jié)論與討論

忍冬葉中化學(xué)成分含量與氣候因子之間關(guān)系密切，但由于地理現(xiàn)象與問(wèn)題的復(fù)雜以及人們認(rèn)識(shí)水平的限制，得到的信息常帶有某種不確定性，許多因素之間的關(guān)系很難用簡(jiǎn)單的統(tǒng)計(jì)方法分析界定。在灰色關(guān)聯(lián)分析中，將眾多因子視為灰色系統(tǒng)，各因子的重要性以關(guān)聯(lián)度排序表示，關(guān)聯(lián)度大，表示該指標(biāo)重要，克服了以往對(duì)因子進(jìn)行評(píng)判的主觀性和粗放性，能夠充分揭示各環(huán)境因子對(duì)忍冬葉活性成分的重要性[6，9]。

單因素方差分析結(jié)果顯示，不同省份間忍冬葉有效成分含量差異極為顯著，說(shuō)明環(huán)境因子對(duì)忍冬葉有效成分的合成影響較大。山東、河南、河北三大省區(qū)相比較，山東產(chǎn)區(qū)忍冬葉有效成分含量最高，質(zhì)量較佳；其次為河北、河南。三大省區(qū)內(nèi)所采集樣品地理位置較為接近，氣候因子一致，但樣品間部分有效成分含量有所差異，說(shuō)明除環(huán)境因子外，栽培品種、人工栽培管理模式等對(duì)忍冬葉有效成分的合成也有不同程度的影響。

灰色關(guān)聯(lián)分析結(jié)果表明，忍冬葉的有效成分含量與氣候因子密切相關(guān)，日照時(shí)數(shù)、降雨量及相對(duì)濕度是影響忍冬葉有效成分含量差異的主要?dú)夂蛞蜃樱鴾囟炔⒉皇怯绊懢G原酸（上接第60頁(yè)）含量的重要因子，這與查菲娜等[10～12]對(duì)影響金銀花中綠原酸含量的氣候因子分析結(jié)果一致，各氣候因子對(duì)忍冬葉有效成分影響的機(jī)理，還有待進(jìn)一步研究。

參 考 文 獻(xiàn)：

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：52，412-413.

[2] 管雪梅，郭慶梅，王秀鳳，等.8個(gè)不同種質(zhì)忍冬葉中綠原酸含量測(cè)定[J].山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，32（5）：410-412.

[3] 茍占平，萬(wàn)德光.6種忍冬葉中綠原酸及總咖啡?？鼘幩岷繙y(cè)定[J].中藥材，2008，31（3）：388-390.

[4] 時(shí)新剛，舒希凱，劉偉，等.HPLC法同時(shí)測(cè)定忍冬的花、葉中木犀草苷和綠原酸含量[J].山東科學(xué)，2013，26（4）：20-23.

[5] 李瑞國(guó).忍冬不同器官3種活性成分的測(cè)定[J].邢臺(tái)學(xué)院學(xué)報(bào)，2011，26（4）：188-189.

[6] 邵瑩，吳啟南，樂巍，等.淡竹葉品質(zhì)與主導(dǎo)氣候因子的灰色關(guān)聯(lián)度分析[J]. 中國(guó)現(xiàn)代中藥，2013，15（6）：476-481.

[7] 李彥，周曉東，樓浙輝，等.植物次生代謝產(chǎn)物及影響其積累的因素研究綜述[J].江西林業(yè)科技，2012（3）：54-60.

[8] 曹海祿，曹國(guó)番，魏建和，等.遺傳和環(huán)境因子對(duì)藥用植物品質(zhì)的影響[J].中草藥，2007，38（5）：785-787.

[9] 李倩，梁宗鎖，董娟娥，等. 丹參品質(zhì)與主導(dǎo)氣候因子的灰色關(guān)聯(lián)度分析[J]. 生態(tài)學(xué)報(bào)，2010，30（10）：2569-2575.

[10] 查菲娜，閆偉杰，陳金英，等.氣象因素對(duì)金銀花中綠原酸含量的影響[J].氣象與環(huán)境科學(xué)，2008，31（S1）：166-168.

[11] 邢俊波，李萍，張重義.金銀花質(zhì)量與生態(tài)系統(tǒng)的相關(guān)性研究[J].中醫(yī)藥學(xué)刊，2003，21（8）：1237-1238.

[12] 張重義，李萍，陳君，等. 金銀花道地與非道地產(chǎn)區(qū)土壤微量元素分析[J]. 中國(guó)中藥雜志，2003，28（3）：18-24. 山 東 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué) 2014，46（11）：72～74，78endprint

1.5 樣品含量測(cè)定

本試驗(yàn)選取3個(gè)省份共9個(gè)產(chǎn)區(qū)忍冬葉樣品，按照1.3.3方法制備供試品液，記錄色譜峰面積，分別代入回歸方程，計(jì)算不同產(chǎn)區(qū)8種有效成分的含量，并進(jìn)行單因素方差分析。

1.6 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 17.0系統(tǒng)軟件進(jìn)行不同產(chǎn)區(qū)忍冬葉中有效成分含量的單因素方差分析；采用GTMS 3.0系統(tǒng)軟件進(jìn)行不同產(chǎn)區(qū)忍冬葉有效成分含量與氣候因子之間的灰色關(guān)聯(lián)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 混合對(duì)照品與樣品的色譜圖

在1.3.1色譜條件下，所得混合對(duì)照品（A）與樣品（B）的色譜圖如圖1所示。

2.2 樣品含量的測(cè)定

由表3可知，不同省份的忍冬葉8種有效成分含量差異極顯著，同一省份不同產(chǎn)區(qū)間含量差異較小。山東各產(chǎn)區(qū)新綠原酸、蘆丁、木犀草苷、異綠原酸A的含量均高于河北、河南產(chǎn)區(qū)，且隱綠原酸、異綠原酸B、異綠原酸C含量總體較好，說(shuō)明山東產(chǎn)區(qū)忍冬葉有效成分含量均較高且穩(wěn)定性好，忍冬葉藥材質(zhì)量較高。河南產(chǎn)區(qū)綠原酸、隱綠原酸、異綠原酸A及異綠原酸C含量變異較大，分析可能與當(dāng)?shù)卦耘喙芾砟Ｊ接嘘P(guān)；河北產(chǎn)區(qū)蘆丁、木犀草苷、異綠原酸C含量最低，但總體來(lái)看各有效成分含量變化較河南產(chǎn)區(qū)穩(wěn)定。

2.3 氣候因子與忍冬葉8種有效成分含量的灰色關(guān)聯(lián)度

分別以9個(gè)產(chǎn)區(qū)忍冬葉的8種有效成分含量數(shù)據(jù)作參考序列x0（k），以所在地的6個(gè)主要?dú)夂蛞蜃臃謩e作為比較序列x1（k）、x2（k）、x3（k）、x4（k）、x5（k）、x6（k），計(jì)算8種有效成分的含量與各氣候因子的灰色關(guān)聯(lián)度。

由表4可知，影響新綠原酸含量的主要?dú)夂蛞蜃邮墙涤炅浚╮=0.8818）；影響綠原酸含量的主要?dú)夂蛞蜃邮侨照諘r(shí)數(shù)（r=0.9572）、相對(duì)濕度（r=0.8546）；影響隱綠原酸含量的主要?dú)夂蛞蜃邮窍鄬?duì)濕度（r=0.9711）、最高溫度（r=0.8801），其次是平均溫度和日照時(shí)數(shù)；影響蘆丁含量的主要?dú)夂蛞蜃邮墙涤炅浚╮=0.8815）；影響木犀草苷含量的主要?dú)夂蛞蜃邮侨照諘r(shí)數(shù)（r=0.8677）和降雨量（r=0.8666）；影響異綠原酸B、異綠原酸A、異綠原酸C含量的主要?dú)夂蛞蜃泳墙涤炅亢腿照諘r(shí)數(shù)。綜上所述，6個(gè)氣候因子中，日照時(shí)數(shù)、降雨量、相對(duì)濕度對(duì)忍冬葉有效成分含量影響較大。

3 結(jié)論與討論

忍冬葉中化學(xué)成分含量與氣候因子之間關(guān)系密切，但由于地理現(xiàn)象與問(wèn)題的復(fù)雜以及人們認(rèn)識(shí)水平的限制，得到的信息常帶有某種不確定性，許多因素之間的關(guān)系很難用簡(jiǎn)單的統(tǒng)計(jì)方法分析界定。在灰色關(guān)聯(lián)分析中，將眾多因子視為灰色系統(tǒng)，各因子的重要性以關(guān)聯(lián)度排序表示，關(guān)聯(lián)度大，表示該指標(biāo)重要，克服了以往對(duì)因子進(jìn)行評(píng)判的主觀性和粗放性，能夠充分揭示各環(huán)境因子對(duì)忍冬葉活性成分的重要性[6，9]。

單因素方差分析結(jié)果顯示，不同省份間忍冬葉有效成分含量差異極為顯著，說(shuō)明環(huán)境因子對(duì)忍冬葉有效成分的合成影響較大。山東、河南、河北三大省區(qū)相比較，山東產(chǎn)區(qū)忍冬葉有效成分含量最高，質(zhì)量較佳；其次為河北、河南。三大省區(qū)內(nèi)所采集樣品地理位置較為接近，氣候因子一致，但樣品間部分有效成分含量有所差異，說(shuō)明除環(huán)境因子外，栽培品種、人工栽培管理模式等對(duì)忍冬葉有效成分的合成也有不同程度的影響。

灰色關(guān)聯(lián)分析結(jié)果表明，忍冬葉的有效成分含量與氣候因子密切相關(guān)，日照時(shí)數(shù)、降雨量及相對(duì)濕度是影響忍冬葉有效成分含量差異的主要?dú)夂蛞蜃?，而溫度并不是影響綠原酸（上接第60頁(yè)）含量的重要因子，這與查菲娜等[10～12]對(duì)影響金銀花中綠原酸含量的氣候因子分析結(jié)果一致，各氣候因子對(duì)忍冬葉有效成分影響的機(jī)理，還有待進(jìn)一步研究。

參 考 文 獻(xiàn)：

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