劉新義，陳 斌，馮小花，蔡文杰

（1.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，湖南長(zhǎng)沙410128；2.湖南省畜牧獸醫(yī)研究所，湖南長(zhǎng)沙410131）

黃芪多糖對(duì)豬免疫功能的影響

劉新義1，陳 斌1，馮小花2，蔡文杰2

（1.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，湖南長(zhǎng)沙410128；2.湖南省畜牧獸醫(yī)研究所，湖南長(zhǎng)沙410131）

為了進(jìn)一步考察黃芪多糖（黃芪提取物）對(duì)豬免疫功能的影響，本試驗(yàn)于豬瘟疫苗免疫前后15日，對(duì)50頭65日齡的健康外三元雜交豬分組，按不同劑量添加飼喂黃芪多糖可溶性粉，飼喂時(shí)間為1個(gè)月；并于飼喂后分兩次進(jìn)行耳靜脈采血，采用豬瘟病毒抗體阻斷ELISA檢測(cè)法檢測(cè)豬體內(nèi)抗體水平,得出了在日糧中添加黃芪多糖的豬體內(nèi)抗體水平明顯高于空白對(duì)照組，且添加量為日糧0.2%的黃芪多糖可溶性粉的試驗(yàn)組抗體水平最高，該試驗(yàn)證實(shí)了黃芪多糖對(duì)豬的免疫功能具有明顯的增強(qiáng)效果。

黃芪多糖；抗體檢測(cè)；免疫增強(qiáng)劑；豬

免疫增強(qiáng)劑是一類(lèi)單獨(dú)或與抗原同時(shí)使用通過(guò)非特異性途徑增強(qiáng)機(jī)體免疫應(yīng)答的物質(zhì)。它有利于加強(qiáng)機(jī)體的免疫功能，緩解由環(huán)境應(yīng)激造成的免疫功能紊亂，有利于預(yù)防和治療傳染性及條件性疾病。隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)科學(xué)研究的深入發(fā)展，人們對(duì)免疫增強(qiáng)劑的醫(yī)療、保健作用越來(lái)越重視，高效、穩(wěn)定、毒副作用小的中藥免疫增強(qiáng)劑將是未來(lái)抗御疾病的主要物質(zhì)。

黃芪多糖(Astragaluspolysaccharme，APS)是黃芪中最重要的天然有效成分，是黃芪藥理作用中起決定性因素的一類(lèi)化合物。黃芪多糖能提高機(jī)體免疫功能，增強(qiáng)細(xì)胞生理代謝，提高巨噬細(xì)胞活性，是理想的免疫增強(qiáng)劑，它能促進(jìn)T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞等免疫細(xì)胞的功能，對(duì)多種免疫缺陷癥均有良好的防治作用，同時(shí)具有抗病毒、抗衰老、抗應(yīng)激、抗氧化等作用。筆者通過(guò)檢測(cè)黃芪多糖對(duì)豬瘟免疫抗體的影響，為黃芪多糖的合理臨床應(yīng)用提供了可靠的試驗(yàn)數(shù)據(jù)。

1 試驗(yàn)材料

1.1 主要試劑

豬瘟兔化弱毒活疫苗（細(xì)胞源，由湖南省漣源市畜牧水產(chǎn)局提供)；黃芪多糖可溶性粉可溶性粉（10%，湖南廣大傲農(nóng)畜牧獸醫(yī)研發(fā)有限公司）；豬瘟抗體檢測(cè)試劑（美國(guó)EDEXX：13-43220-Y241）

1.2 主要儀器

高速離心機(jī)（上海耐圣卡蘭實(shí)業(yè)有限公司）；微量移液槍?zhuān)ㄉ虾s泰生化工程有限公司）；全自動(dòng)酶標(biāo)儀（南京華東電子集團(tuán)醫(yī)療裝備有限責(zé)任公司）；微量振蕩器（長(zhǎng)沙永樂(lè)康醫(yī)療設(shè)備有限公司）；生化培養(yǎng)箱（上海精密儀器有限公司）；優(yōu)普純水機(jī)（廣州市授科儀器科技有限公司）。

1.3 試驗(yàn)動(dòng)物

根據(jù)試驗(yàn)要求，選擇未經(jīng)過(guò)豬瘟疫苗免疫的漣源市藍(lán)田辦事處某豬場(chǎng)（200頭母豬），自繁自養(yǎng)，飼養(yǎng)管理水平適中，挑選出50頭65日齡左右，體重相近、健康壯實(shí)的“杜長(zhǎng)大”三元雜交豬。

2 試驗(yàn)方法

2.1 動(dòng)物分組

共分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和空白對(duì)照組五組，基礎(chǔ)日糧為玉米-豆粕型，對(duì)照組與試驗(yàn)組均每天飼喂2次，飼喂時(shí)間為1個(gè)月。

（1）空白對(duì)照組：飼喂基礎(chǔ)日糧，耳標(biāo)編號(hào)為1～10 號(hào)；（2）試驗(yàn)Ⅰ組：基礎(chǔ)日糧，另添加飼料量0.05%黃芪多糖可溶性粉，耳標(biāo)編號(hào)為11～20號(hào)；（3）試驗(yàn)Ⅱ組：基礎(chǔ)日糧，另添加飼料量0.1%黃芪多糖可溶性粉，耳標(biāo)編號(hào)為21～30號(hào)；（4）試驗(yàn)Ⅲ組：基礎(chǔ)日糧，另添加飼料量0.2%黃芪多糖可溶性粉，耳標(biāo)編號(hào)為 31～40 號(hào)；（5）試驗(yàn)Ⅳ組：基礎(chǔ)日糧，另添加飼料量0.3%黃芪多糖可溶性粉，耳標(biāo)編號(hào)為41～50號(hào)。

2.2 注射免疫疫苗

在免疫疫苗前后15天，除空白對(duì)照組外，試驗(yàn)組按試驗(yàn)要求在基礎(chǔ)食糧中添加了不同量黃芪多糖可溶性粉。在豬群無(wú)異常狀況下，2013年4月25日，按照疫苗使用說(shuō)明，用專(zhuān)用疫苗稀釋液稀釋豬瘟凍干疫苗，嚴(yán)格按免疫要求進(jìn)行消毒和一個(gè)針頭免疫一頭豬標(biāo)準(zhǔn)，在豬頸部后側(cè)肌注豬瘟疫苗1頭份/頭。觀察免疫副反應(yīng)及應(yīng)激情況。

2.3 采血及檢測(cè)判定方法

于5月25日和6月25日，在豬耳靜脈進(jìn)行采血，每頭豬采血量為2.5mL，按操作規(guī)程要求采集豬全血樣品100個(gè)，用保溫箱冷藏，在試驗(yàn)室用離心機(jī)處理得到檢測(cè)用血清。采用豬瘟病毒抗體阻斷ELISA檢測(cè)法。判定標(biāo)準(zhǔn)：阻斷率≥40%，抗體陽(yáng)性（+）；阻斷率≤30%，抗體陰性（－）；40%＞阻斷率＞30%，為可疑（±），可疑血清樣品在下次采血時(shí)以下次抗體效價(jià)作為最終結(jié)果判定。

3 試驗(yàn)結(jié)果

3.1 免疫副反應(yīng)及應(yīng)激情況

4月2 5 日免疫后，空白組的3、7號(hào)豬，試驗(yàn)I組的18號(hào)豬，出現(xiàn)了免疫應(yīng)激反應(yīng)，具體表現(xiàn)為精神萎靡不振、呼吸略為急促，觀察1h后，免疫應(yīng)激反應(yīng)癥狀消失，逐步恢復(fù)正常。

3.2 抗體檢測(cè)對(duì)照

5月2 7 日免疫抗體檢測(cè)其陰性對(duì)照OD450=0.131，陽(yáng)性對(duì)照OD450=1.633；6月27日免疫抗體檢測(cè)其陰性對(duì)照OD450=0.147，陽(yáng)性對(duì)照OD450=1.735。

3.3 各組抗體檢測(cè)結(jié)果

3.3.1 空白對(duì)照組的抗體檢測(cè)結(jié)果。具體結(jié)果見(jiàn)表1。

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從表1中可看出，5月27日檢測(cè)4、6、7號(hào)豬抗體結(jié)果為陰性，其它為陽(yáng)性，抗體陽(yáng)性率為70%；7個(gè)抗體陽(yáng)性O(shè)D450值平均為0.641。6月27日檢測(cè)4、6、7號(hào)豬抗體結(jié)果為陰性，其它為陽(yáng)性，抗體陽(yáng)性率為70%；7個(gè)抗體陽(yáng)性O(shè)D450值平均為0.658。

3.3.2 試驗(yàn)Ⅰ組抗體檢測(cè)結(jié)果。

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試驗(yàn)Ⅰ組添加黃芪多糖可溶性粉的量為0.05%。從表2中顯示5月27日檢測(cè)18號(hào)豬免疫抗體結(jié)果為陰性，其它9個(gè)豬瘟免疫抗體陽(yáng)性，抗體陽(yáng)性率為90%，抗體效價(jià)OD450值平均為0.761。6月27日檢測(cè)18號(hào)豬免疫抗體陰性，其它9個(gè)豬瘟免疫抗體陽(yáng)性，抗體陽(yáng)性率為90%，抗體效價(jià)OD450值平均為0.761。

3.3.3 試驗(yàn)Ⅱ組抗體檢測(cè)結(jié)果。具體結(jié)果見(jiàn)表3。

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試驗(yàn)Ⅱ組添加黃芪多糖可溶性粉的量為0.1%。從表3可看出,5月27日檢測(cè)27號(hào)豬免疫抗體為可疑，28號(hào)為免疫抗體陰性，其它8個(gè)豬瘟免疫抗體陽(yáng)性，抗體陽(yáng)性率為80%，OD450值平均為0.818。6月27日檢測(cè)28號(hào)豬為免疫抗體陰性，其它9個(gè)豬瘟免疫抗體陽(yáng)性，抗體陽(yáng)性率為90%，OD450值平均為0.892。

3.3.4 試驗(yàn)Ⅲ組抗體檢測(cè)結(jié)果。具體結(jié)果見(jiàn)表4。

試驗(yàn)Ⅲ組添加黃芪多糖可溶性粉的量為0.2%，表4中顯示5月27日檢測(cè)免疫抗體結(jié)果全部為陽(yáng)性，抗體陽(yáng)性率為100%，OD450值平均為0.857。6月27日檢測(cè)免疫抗體結(jié)果全部為陽(yáng)性，抗體陽(yáng)性率為100%，OD450值平均為0.975。

3.3.5 試驗(yàn)Ⅳ組抗體檢測(cè)結(jié)果。

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試驗(yàn)Ⅳ組黃芪多糖可溶性粉的添加量為0.3%，從表5看出,5月27日檢測(cè)Ⅳ組免疫抗體結(jié)果全部為陽(yáng)性，抗體陽(yáng)性率為100%，OD450值平均為0.813；6月27日檢測(cè)免疫抗體全部為陽(yáng)性，抗體陽(yáng)性率為100%，OD450值平均為0.904。

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6 小結(jié)

從試驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，空白對(duì)照組的免疫抗體合格率為70%，抗體陽(yáng)性O(shè)D450值平均為0.641；試驗(yàn)組整體抗體陽(yáng)性率達(dá)92.5%，抗體陽(yáng)性O(shè)D450值平均為0.812，表明日糧中添加適量的黃芪多糖可溶性粉能增強(qiáng)仔豬免疫功能，并促進(jìn)免疫抗體水平效價(jià)的提高；試驗(yàn)Ⅲ組(基礎(chǔ)日糧+0.2%黃芪多糖可溶性粉)的5月27日檢測(cè)免疫抗體全部為陽(yáng)性，抗體陽(yáng)性率為100%，OD450值平均為0.857。6月27日檢測(cè)免疫抗體全部為陽(yáng)性，抗體陽(yáng)性率為100%，OD450值平均為0.975,免疫效果最好，抗體效價(jià)最高；試驗(yàn)Ⅲ組(基礎(chǔ)日糧+0.2%黃芪多糖可溶性粉)與試驗(yàn)Ⅳ組(基礎(chǔ)日糧+0.3%黃芪多糖可溶性粉)檢測(cè)抗體陽(yáng)性率均為100%，并無(wú)明顯抗體效價(jià)水平差異，從中可以得出在基礎(chǔ)日糧中添加0.2%黃芪多糖可溶性粉為最適宜，可達(dá)到理想的免疫增強(qiáng)效果；豬瘟疫苗在免疫60天后可達(dá)到較好的免疫效果，在基礎(chǔ)日糧中添加黃芪多糖可溶性粉的試驗(yàn)組免疫效價(jià)提升相對(duì)較高，免疫增強(qiáng)效果顯著；未在基礎(chǔ)日糧中添加黃芪多糖可溶性粉的空白對(duì)照組發(fā)生免疫應(yīng)激反應(yīng)較大，在基礎(chǔ)日糧中添加黃芪多糖可溶性粉的試驗(yàn)組免疫應(yīng)激反應(yīng)最小，機(jī)體抗病能力強(qiáng)。

通過(guò)此次試驗(yàn)，可以得出以下初步結(jié)論：在免疫疫苗前后15天左右添加黃芪多糖可溶性粉，有效添加量為基礎(chǔ)日糧的0.2%黃芪多糖可溶性粉，有利于加強(qiáng)機(jī)體的免疫系統(tǒng)功能，解除免疫抑制，提高抗體效價(jià)水平，緩解由環(huán)境應(yīng)激造成的免疫功能紊亂，有利于預(yù)防和早期控制傳染性及條件性疾病。

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[2] 王志祥，呂美，戚鑫，等.黃芪多糖可溶性粉對(duì)肉仔雞生長(zhǎng)、免疫器官發(fā)育及抗氧化功能的影響[J].中國(guó)畜牧雜志，2006,17(42）：30-31.

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S858.28

A

1006-4907（2014）04-0007-04

10.3969/j.issn.1006-4907.2014.04.003

2014-06-12