韓艷琴 (赤峰學(xué)院第二附屬醫(yī)院檢驗科，內(nèi)蒙古 赤峰 024000)

比較采用三種檢測技術(shù)檢測超光譜B-內(nèi)酰胺酶(ESBLs)的檢出率，對產(chǎn)ESBLs細(xì)菌的耐藥現(xiàn)狀進(jìn)行深入分析。筆者旨在對236株腸桿菌科細(xì)菌用 WITEK32測定ESBLs，同時用復(fù)合紙片法、確證試驗及雙紙片協(xié)同法進(jìn)行對照檢測?，F(xiàn)將具體情況總結(jié)報告如下。

1 材料和方法

1.1 菌株:試驗菌株系我院2011年5月～2013年12月從門診和住院患者的尿、痰、膿汁等標(biāo)本中分離的，肺炎克雷伯菌和大腸埃希菌共236株，ESBLs陰性質(zhì)控菌為大腸埃希菌ATC2599，ESBLs陽性質(zhì)控菌為肺炎克雷伯菌ATCC700603。

1.2 儀器檢測ESBLs:應(yīng)用WITEK32及CNS-NT卡、GNSF2和GNS-506卡檢測，通過測定頭孢他啶、頭孢噻肟兩種抗生素與酶抑制劑克拉維酸的聯(lián)合制劑與單純頭孢他啶、頭孢噻肟的最低抑菌濃度值比≥4時，判定為ESBLs陽性。

1.3 確證法:選用經(jīng)頭孢噻肟(CTX)及頭孢他啶(CAZ)等三代頭孢紙片初篩試驗疑為產(chǎn)ESBLs株者，再用CAZ和CAZ/CA及CTX和CTX/CA兩組紙片同時測定，接種方法按紙片擴散法進(jìn)行。結(jié)果判斷:2000年(NCCLS)標(biāo)準(zhǔn)即含克拉維酸和不含克拉維酸紙片的抑菌環(huán)直徑之差≥5 mm可確認(rèn)為ESBLs菌株。

1.4 雙紙片協(xié)同法:底物選用頭孢噻肟(CTX)或頭孢他啶(CAZ)，含酶抑制劑藥物為阿莫西林/克拉維酸(AMC)，阿莫西林/克拉維酸與底物紙片貼附于已涂抹待測菌液的瓊脂上，兩紙片中心距離為25 mm，接種方法按紙片擴散法進(jìn)行。結(jié)果判斷:孵育18～24 h，觀察阿莫西林/克拉維酸一側(cè)的抑菌區(qū)加強者判為ESBLs陽性。

1.5 藥敏試驗:采用紙片擴散法(K-B法)，判讀標(biāo)準(zhǔn)按NCCLS1999年版。

2 結(jié)果

2.1 三種測試法檢測ESBLs的陽性率比較:詳見表1。

2.2 ESBLs菌株與非ESBLs菌株對12種常用抗菌藥物耐藥率比較:詳見表2。

表1 三種測試方法檢測ESBLs的陽性率(%)

表2 ESBLs陽性菌株與ESBLs陰性株的耐藥率比較(%)

3 討論

由表1可見，按儀器法從臨床標(biāo)本分離的162株大腸埃希氏菌和74株肺炎克雷伯菌中共檢出ESBLs菌48株，平均陽性率為21.7%，其中肺炎克雷伯菌ESBLs檢出率25.6%高于大腸埃希菌的17.9%。VITEK儀器法對ESBLs檢出率達(dá)99.5%，方法快速、準(zhǔn)確，陽性率高。確證法與儀器法對照陽性率稍低，但因其操作簡便，不受實驗室條件限制和紙片間距影響，容易普及。雙紙片法敏感性在85.0%左右，本組資料結(jié)果表明，雙紙片法陽性率低于儀器法與確證法，原因在于此種方法會受到紙片間距離的影響以及人工判讀結(jié)果存在較大差異，使得漏檢的幾率增加，但因其價格較低，紙片易于購買，一般實驗室應(yīng)用較為廣泛。濃度梯度法結(jié)果準(zhǔn)確，陽性率較高，但因價格問題，一般用于科研。以上資料表明，檢測ESBLs選擇儀器法與復(fù)合紙片確證法是較為理想的［1-2］。表2結(jié)果表明，產(chǎn)ESBLs菌與非產(chǎn)酶菌株比較，其對常用抗菌藥物耐藥率相對更高，顯示出高度耐藥狀態(tài)，應(yīng)予以高度重視。

綜上所述，合理選擇檢測方法，快速、準(zhǔn)確地提高ESBLs菌株的陽性檢出率，在臨床上具有不可低估的作用。

［1］ 孔海深，顧 毅.超廣譜B-內(nèi)酰胺酶肺炎克雷伯菌和大腸埃希菌的耐藥性［J］.中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2000，23(1):23.

［2］ 陳彩貞.腸桿菌科細(xì)菌產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶的檢測及耐藥性分析［J］.臨床和實驗醫(yī)學(xué)雜志，2010，9(18):1383.