黃秀枝， 蔡璦安， 尚戰(zhàn)峰， 賢振華

(廣西大學(xué)農(nóng)學(xué)院，廣西 南寧 530005)

自1981年福壽螺引入中國(guó)以來(lái)，其作為外來(lái)入侵物種，在新的環(huán)境和氣候條件下，福壽螺失去了原有天敵的制約，加上盲目引進(jìn)和管理不善，福壽螺大量生長(zhǎng)繁殖，逐步擴(kuò)散到稻田，成為一種新的為害水稻的有害生物［1-2］。隨著螺源的逐年積累，福壽螺已成為為害中國(guó)水稻的惡性水生動(dòng)物，嚴(yán)重威脅水稻生產(chǎn)［3］，被稱為“為害最大的外來(lái)物種之一［4］”、“世界性惡性入侵水生動(dòng)物［5］”和“為害水稻的惡性水生動(dòng)物［6］”。

甲氨基阿維菌素(Methylamino abamectin)是一種新型的高效生物殺蟲(chóng)殺螨劑，具有低毒、無(wú)殘留、無(wú)公害的特點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中。其對(duì)菜青蟲(chóng)、棉鈴蟲(chóng)、甜菜夜蛾、小菜蛾等鱗翅目害蟲(chóng)具有較高的殺蟲(chóng)活性［7-8］，對(duì)福壽螺的防治效果優(yōu)于茶皂素和殺螺胺［9］。

超氧化物歧化酶(SOD)和過(guò)氧化氫酶(CAT)是生物體內(nèi)的重要保護(hù)酶，可以清除細(xì)胞內(nèi)多余的自由基，防止其毒害［10］。楊光研究發(fā)現(xiàn)，5.6 μg/L 以上的阿維菌素長(zhǎng)時(shí)間脅迫對(duì)鯉魚(yú)產(chǎn)生較強(qiáng)的氧化壓力，使得機(jī)體抗氧化防御系統(tǒng)的正常功能受損，造成細(xì)胞或組織的不可逆損傷［11］。食用蟹在亞致死量的阿維菌素(10%)中暴露24 h，其鰓與肝胰腺的SOD活性上升［12］。楊家長(zhǎng)等認(rèn)為低濃度阿維菌素對(duì)鯉魚(yú)SOD活性的影響較大［13］。李世凱發(fā)現(xiàn)伊維菌素對(duì)斑馬魚(yú)肌肉SOD活性表現(xiàn)為低濃度的抑制，高濃度先誘導(dǎo)后抑制［14］。

甲氨基阿維菌素尚未在軟體動(dòng)物中登記使用，其對(duì)福壽螺的毒性機(jī)理尚未清楚。本試驗(yàn)擬以福壽螺中螺為研究對(duì)象，研究甲氨基阿維菌素對(duì)福壽螺肝臟SOD、PO和CAT酶活性的影響，及其對(duì)福壽螺肝臟顯微結(jié)構(gòu)產(chǎn)生的病理變化，以期更系統(tǒng)地了解甲氨基阿維菌素在福壽螺體內(nèi)的毒理。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)螺源

試驗(yàn)螺為人工繁殖的第一代健康福壽螺中螺，體質(zhì)量為(3.5±0.4)g，試驗(yàn)期間不投食。飼養(yǎng)水池保持水體流通，水質(zhì)清新。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 甲氨基阿維菌素急性毒力測(cè)定 取68.3%甲氨基阿維菌素原藥配制成母液，加水稀釋成5個(gè)梯度濃度，分別為 0.80 mg/L、0.40 mg/L、0.20 mg/L、0.10 mg/L、0.05 mg/L，設(shè)清水為對(duì)照處理，每個(gè)處理重復(fù)3次。用桶 (8.75 cm×8.75 cm×16.50 cm)盛適當(dāng)藥液，保證福壽螺能浸泡于藥液中。每桶投螺15只，加蓋紗網(wǎng)，防止福壽螺逃逸。在(25±1)℃的恒溫室浸泡福壽螺，每6 h觀察福壽螺的行為和死亡情況，并清除死螺，48 h后統(tǒng)計(jì)死螺數(shù)，計(jì)算死亡率和校正死亡率。試驗(yàn)數(shù)據(jù)用DPS軟件進(jìn)行處理，計(jì)算福壽螺在48 h的急性毒力回歸方程及LC25、LC50及LC75的濃度值。

1.2.2 福壽螺肝臟抗氧化酶活力測(cè)定 設(shè)置LC25、LC50、LC753個(gè)質(zhì)量濃度和空白對(duì)照，每個(gè)濃度設(shè)3個(gè)重復(fù)，試驗(yàn)開(kāi)始后分別于6 h、12 h、24 h、48 h取樣，每組隨機(jī)選擇12只活螺，用自來(lái)水沖洗表面的藥液，于冰盤上快速取出福壽螺的肝臟，吸干表面水分。快速稱取1 g肝臟置于研缽中，用剪刀剪碎，加入液氮后快速研磨，加入緩沖液稀釋。

1.2.2.1 SOD及PO酶源及活力測(cè)定 按質(zhì)量體積1∶5的比例，即1 g組織中加入5 ml預(yù)冷的0.2 mol/L Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液(pH 6.8)冰浴、勻漿，4℃靜置30 min，冷凍離心(4℃，10 000 r/min)30 min，取上清液作為酶源，上清液中的蛋白含量用考馬斯亮藍(lán)法［15］測(cè)定。鄰苯三酚自氧化速率測(cè)定參考許申鴻和顧含真的方法［16-17］并作如下改進(jìn):依次加入0.1 mol/L Tris-HCl 4.5 ml緩沖液、4.2 ml二次蒸餾水，樣品管加入2.50 mmol/L 0.3 ml鄰苯三酚，于325 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光值。SOD酶活力單位定義為在25℃、pH 8.2時(shí)1 min抑制鄰苯三酚自氧化速率達(dá)50%的酶量［18］。PO酶活力測(cè)定參照Benjamin的方法［19］稍加改進(jìn):在2.0 ml的測(cè)定體系［1.0 ml 0.10 mol/L，pH 6.8的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液和1.0 ml 8.00 mmol/L鄰苯二酚］中加入200 μl酶源上清液，28℃檢測(cè)430 nm處的吸光值。酶活力單位定義為以1 min催化底物氧化增加吸光值0.001的酶量［20］。

1.2.2.2 CAT酶源及活力測(cè)定 取0.6 g肝臟于勻漿器中，加入6.0 ml已預(yù)冷的Tris-HCl緩沖液(0.01 mol/L Tris，0.25 mol/L蔗糖，0.10 mmol/L EDTA，pH 7.5)，在冰浴下10 000 r/min勻漿，冷凍離心10 min［21］。在恒溫25℃條件下，將CAT酶提取液加入H2O2-磷酸鹽緩沖液中，采用1 cm比色皿在250 nm波長(zhǎng)處每隔10 s測(cè)其吸光值。CAT酶活性單位定義為25℃、100 s內(nèi)分解H2O2一半時(shí)的酶量［22］。

1.2.3 福壽螺肝臟顯微結(jié)構(gòu)觀察 分別取清水(CK)、LC25、LC50及 LC75濃度處理6 h、12 h、24 h 及48 h受藥嚴(yán)重且瀕臨死亡的福壽螺肝臟，將其用鹽水洗凈，經(jīng)固定、脫水、包埋、切片、蘇木精-伊紅染色法(HE)染色后在光學(xué)顯微鏡下觀察拍照。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示，組間數(shù)據(jù)用Duncan’s新復(fù)極差法進(jìn)行顯著性比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 急性毒力測(cè)定

試驗(yàn)期間空白對(duì)照組(CK)的福壽螺正常，均無(wú)死亡。低濃度甲氨基阿維菌素給藥處理后，福壽螺出現(xiàn)行動(dòng)稍遲鈍，爬行能力減弱等中毒癥狀;隨著給藥濃度提高，福壽螺呼吸管、觸角及外套膜均出現(xiàn)中毒癥狀。在給藥6 h內(nèi)無(wú)死亡發(fā)生;給藥48 h后，各處理出現(xiàn)了不同程度的死亡。給藥48 h，甲氨基阿維菌素濃度與福壽螺死亡率呈線性相關(guān)關(guān)系(表1)。

表1 甲氨基阿維菌素對(duì)福壽螺的急性毒力試驗(yàn)Table 1 Acute toxicities of methylamino abamectin to Pomacea canaliculata

2.2 甲氨基阿維菌素對(duì)福壽螺肝臟SOD活性的影響

從時(shí)間-效應(yīng)關(guān)系上，甲氨基阿維菌素為L(zhǎng)C25濃度時(shí)，福壽螺肝臟的SOD酶活性在6 h開(kāi)始升高，在24 h時(shí)出現(xiàn)峰值，此時(shí)較對(duì)照組高14.24%，差異極顯著，但之后活性開(kāi)始下降，到48 h時(shí)降至與對(duì)照水平幾乎一致;甲氨基阿維菌素在LC50濃度時(shí)，福壽螺肝臟SOD酶活在給藥6～24 h呈現(xiàn)顯著的激活作用，酶活力在24 h時(shí)達(dá)高峰，約為對(duì)照組的1.4倍，之后回落至低于對(duì)照組水平，整個(gè)過(guò)程呈現(xiàn)出了上升-下降的過(guò)程;甲氨基阿維菌素在LC75濃度時(shí)，福壽螺肝臟內(nèi)SOD酶活性則表現(xiàn)出先升后降的過(guò)程，6～12 h內(nèi)，SOD酶活性均顯著高于對(duì)照，6 h時(shí)達(dá)最大值，較對(duì)照組高28.33%，之后酶活逐步下降，至48 h時(shí)降至最低，較對(duì)照組降低了24.38%(圖1)。從濃度-效應(yīng)關(guān)系分析，在處理6～12 h時(shí)間段，隨著濃度的增大，SOD活力呈現(xiàn)出增加的趨勢(shì)，24 h時(shí)SOD活性則表現(xiàn)出LC50＞LC25＞CK＞LC75，此時(shí)濃度若達(dá)到LC75時(shí)，福壽螺肝臟的SOD活性已經(jīng)受到抑制;48 h時(shí)，SOD活性為L(zhǎng)C25＞CK＞LC50＞LC75。在甲氨基阿維菌素高濃度和長(zhǎng)時(shí)間處理下，福壽螺肝臟體內(nèi)SOD酶活力受到較強(qiáng)抑制(圖1)。

2.3 甲氨基阿維菌素對(duì)福壽螺肝臟PO活性的影響

圖1 甲氨基阿維菌素對(duì)福壽螺肝臟SOD活性的影響Fig.1 Effect of methylamino abamectin on the activity of SOD in the liver of P.canaliculata

福壽螺肝臟PO活性在處理6 h內(nèi)呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，但隨著暴露時(shí)間的延長(zhǎng)，各處理組PO的活性開(kāi)始下降(圖2)。甲氨基阿維菌素濃度為L(zhǎng)C25時(shí)，福壽螺肝臟PO酶活力在6 h急劇上升，6～12 h緩慢下降，之后急劇下降，至48 h時(shí)降至低于對(duì)照組水平;LC50濃度組，6 h時(shí)福壽螺肝臟PO酶活力上升趨勢(shì)較LC25濃度組小，之后PO酶活力開(kāi)始下降，至48 h酶活極顯著低于對(duì)照;LC75濃度組PO酶活力的變化與LC25濃度組相似，均在6 h時(shí)最高，為對(duì)照組的2.4倍(P＜0.01)，但在12～48 h內(nèi)急劇下降，48 h時(shí)PO酶活力極顯著低于對(duì)照組水平(圖2)。從濃度-效應(yīng)關(guān)系分析，在12 h內(nèi)，福壽螺肝臟PO活力表現(xiàn)出LC75＞LC25＞LC50＞CK，但在48 h時(shí)，呈現(xiàn)CK＞LC25＞LC50＞LC75(圖2)。說(shuō)明在長(zhǎng)時(shí)間高濃度甲氨基阿維菌素脅迫下，福壽螺抵抗甲氨基阿維菌素的能力減弱，表現(xiàn)出了明顯的時(shí)間和劑量效應(yīng)。

圖2 甲氨基阿維菌素對(duì)福壽螺肝臟PO活性的影響Fig.2 Effect of methylamino abamectin on the activity of PO in the liver of P.canaliculata

2.4 甲氨基阿維菌素對(duì)福壽螺肝臟CAT活性的影響

如圖3所示，在甲氨基阿維菌素作用下福壽螺肝臟內(nèi)CAT活性總體表現(xiàn)為上升-下降的趨勢(shì)。甲氨基阿維菌素濃度為L(zhǎng)C25時(shí)，福壽螺肝臟CAT酶活力在給藥6 h時(shí)緩慢增大，24 h之后開(kāi)始下降，至48 h時(shí)極顯著低于對(duì)照組;甲氨基阿維菌素濃度為L(zhǎng)C50時(shí)，福壽螺肝臟CAT酶活力在給藥6 h時(shí)顯著升高，隨后逐漸下降，至48 h時(shí)，CAT酶活力較對(duì)照組少30.06%(P＜0.01);甲氨基阿維菌素在LC75濃度時(shí)，福壽螺肝臟CAT酶活性也表現(xiàn)出了先上升后下降的趨勢(shì)，CAT活性在6 h處出現(xiàn)高峰，為對(duì)照組的2.3倍，隨后急劇下降，至48 h時(shí)極顯著低于對(duì)照水平。從濃度-效應(yīng)關(guān)系來(lái)看，6～12 h時(shí)隨著甲氨基阿維菌素濃度的增加，福壽螺體內(nèi)肝臟CAT酶活力呈上升的趨勢(shì)，而后則表現(xiàn)出隨著濃度的增加而下降。說(shuō)明短時(shí)間內(nèi)(6～12 h)處理，甲氨基阿維菌素濃度越高，其對(duì)福壽螺肝臟內(nèi)的CAT活力具有越強(qiáng)的激活作用，隨著作用時(shí)間延長(zhǎng)，福壽螺肝臟CAT酶活力受到抑制作用。

2.5 福壽螺肝臟顯微結(jié)構(gòu)的變化

正常福壽螺的肝臟消化小管結(jié)構(gòu)完整、清晰，肝細(xì)胞未見(jiàn)異常(圖4-1、4-2)。低濃度(LC25)甲氨基阿維菌素處理6 h后，其結(jié)構(gòu)沒(méi)有發(fā)生異常(圖4-3)，濃度為L(zhǎng)C50時(shí)，可見(jiàn)結(jié)締組織中的血管有少量瘀血(圖4-4)，濃度為L(zhǎng)C75時(shí)，瘀血面積加大(圖4-5)。甲氨基阿維菌素處理12 h時(shí)，福壽螺肝臟消化小管的結(jié)締組織明顯擴(kuò)張，血管瘀血加重;消化小管的基膜變薄(圖4-6)。甲氨基阿維菌素處理24 h時(shí)，LC25濃度組福壽螺肝臟整個(gè)結(jié)構(gòu)出現(xiàn)彌漫性瘀血(圖4-9);LC50處理組福壽螺肝臟消化小管的基膜大部分溶解壞死，細(xì)胞開(kāi)始變形(圖4-10)。甲氨基阿維菌素處理48 h時(shí)，福壽螺中毒嚴(yán)重，在低濃度下方可看見(jiàn)消化小管基膜，但結(jié)構(gòu)不完整(圖4-12);LC75組福壽螺肝臟上皮組織出現(xiàn)溶解壞死，結(jié)締組織高度擴(kuò)張，其間可見(jiàn)大量絮狀壞死物，嗜堿性細(xì)胞和消化細(xì)胞變性，細(xì)胞畸形(圖4-14)。

圖3 甲氨基阿維菌素對(duì)福壽螺肝臟過(guò)氧化氫酶活性的影響Fig.3 Effect of methylamino abamectin on the activity of CAT in the liver of P.canaliculata

3 討論

本研究發(fā)現(xiàn)各濃度組的福壽螺在不同的暴露時(shí)間下，其肝臟內(nèi)SOD酶活力的變化趨勢(shì)不同。甲氨基阿維菌素低濃度(LC25)組的福壽螺肝臟SOD酶活力變化不大，長(zhǎng)時(shí)間(48 h)暴露后，與對(duì)照組無(wú)顯著差異;中濃度(LC50)組福壽螺肝臟內(nèi)SOD酶活力在24 h達(dá)到最大值，48 h其酶活力才被顯著抑制;而高濃度(LC75)組的SOD酶活性比低、中濃度組在更快的時(shí)間(6 h)達(dá)到高峰后開(kāi)始持續(xù)下降并在24 h時(shí)被極顯著抑制。福壽螺中毒后，體內(nèi)原有的自由基代謝受到了破壞，發(fā)生氧化損傷，在較輕的損傷程度下，福壽螺靠自身的抵抗防御作用，SOD發(fā)揮自身功能，清除掉多余的自由基，此時(shí)誘導(dǎo)的作用表現(xiàn)為適應(yīng)性反應(yīng)，但福壽螺在48 h高劑量的藥劑下，SOD無(wú)法在較短的時(shí)間抵抗過(guò)多的自由基，防御系統(tǒng)遭到了破壞，SOD活性受到了抑制，解毒功能下降，表現(xiàn)出嚴(yán)重的中毒現(xiàn)象。表明甲氨基阿維菌素對(duì)福壽螺肝臟內(nèi)SOD酶活性具有激活作用，但隨著暴露時(shí)間的延長(zhǎng)和暴露濃度的增加，激活能力下降，最終其肝臟SOD酶活力受到抑制。試驗(yàn)中觀察到的SOD酶活性與其他相關(guān)研究中酶活性的變化類似，均呈先上升后下降的趨勢(shì)［23-24］。

圖4 福壽螺肝臟顯微結(jié)構(gòu)(×100)Fig.4 The microstructure of livers of normal(1 and 2)and methylamino abamectin treated P.canaliculat(3 to 14)

PO以PPO的形式存在于血液淋巴中，是黑色素合成的關(guān)鍵酶，同時(shí)也是昆蟲(chóng)體內(nèi)的重要免疫蛋白。PPO一經(jīng)活化成PO，則參與機(jī)體代謝過(guò)程的細(xì)胞吞噬、黑化作用和傷口愈合等過(guò)程，起防御作用［25］。本研究中暴露于甲氨基阿維菌素12 h的福壽螺，其肝臟PO酶活性波動(dòng)大，以低濃度(LC25)、高濃度(LC75)組的福壽螺肝臟PO酶活性被顯著激活，而中濃度(LC50)對(duì)福壽螺肝臟內(nèi)PO酶活性無(wú)顯著影響。短時(shí)間內(nèi)，福壽螺肝臟內(nèi)的PO先被激活，這與松油烯-4-醇對(duì)家蠅酚氧化酶具有激活作用［26］一致。而高濃度長(zhǎng)時(shí)間(48 h)的暴露，則會(huì)使福壽螺體內(nèi)PO酶活性受到抑制，這可能與破壞了黑色素的形成從而損壞了免疫系統(tǒng)有關(guān)。

短時(shí)間(6 h)脅迫下，福壽螺肝臟CAT酶活性均表現(xiàn)出激活作用，其中以高濃度(LC75)組福壽螺肝臟CAT酶活力激活效應(yīng)顯著，但在長(zhǎng)時(shí)間脅迫下，肝臟內(nèi)產(chǎn)生大量的H2O2，超出CAT的清除能力，機(jī)體受損。國(guó)內(nèi)外也有大量研究表明，CAT酶活力受毒物劑量的影響，當(dāng)濃度較低時(shí)，毒物對(duì)代謝有一定的促進(jìn)作用［27-28］。各濃度組福壽螺肝臟CAT酶活力均呈現(xiàn)先上升后下降的變化趨勢(shì)，這與阿維菌素脅迫下黃河鯉魚(yú)鰓組織中CAT酶活力的變化趨勢(shì)一致［12］。因此，CAT酶活性狀況變化能夠很好地反應(yīng)機(jī)體受甲氨基阿維菌素的損害程度。CAT酶活性與其他兩種酶活性是否具有相關(guān)性或與其他抗氧化酶酶活性及脂質(zhì)過(guò)氧化酶酶活性是否有關(guān)聯(lián)，有待進(jìn)一步研究。

［1］ 劉雨芳，李 菲，李玉峰，等.福壽螺在湖南的分布現(xiàn)狀、危害與擴(kuò)散風(fēng)險(xiǎn)預(yù)警［J］.水生生物學(xué)報(bào)，2011，35(6):1067-1071.

［2］ 王志高，譚濟(jì)才，劉 軍，等.福壽螺綜合防治研究進(jìn)展［J］.中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2009，25(12):201-205.

［3］ 李小慧，胡隱昌，宋紅梅，等.中國(guó)福壽螺的入侵現(xiàn)狀及防治方法研究進(jìn)展［J］.中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2009，25(14):229-232.

［4］ CARLSSON N O L，BR?NMARK C，HANSSON L A.Invading herbivory:The golden apple snail alters ecosystem functioning in Asian wetlands［J］.Ecology，2004，85(6):1575-1580.

［5］ JOSHI R.Managing invasive alien molluse species in rice［J］.International Rice Research Notes，2005，30(2):5-12.

［6］ YUSA Y，Wada T.Impact of the introduction of apple snails and their control in Japan［J］.The ICLARM Quarterly，1999，22(3):9-13.

［7］ 葛 紅，韓 娟，徐 莉，等.甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽應(yīng)用研究概況［J］.金陵科技學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，26(1):90-95.

［8］ 畢富春，徐風(fēng)波.甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽研究概述［J］.農(nóng)藥科學(xué)與管理，2002，23(2):31-33.

［9］ 賈道田.三種藥劑對(duì)福壽螺生長(zhǎng)發(fā)育繁殖影響的研究［D］.桂林:廣西大學(xué)，2012.

［10］田春美，鐘秋平.超氧化物歧化酶的現(xiàn)狀研究進(jìn)展［J］.中國(guó)熱帶醫(yī)學(xué)，2005，5(8):1730-1732.

［11］楊 光.阿維菌素對(duì)鯉魚(yú)毒理效應(yīng)的研究［D］.南京:南京農(nóng)業(yè)大學(xué)，2011.

［12］李燮陽(yáng).阿維菌素對(duì)黃河鯉抗氧化系統(tǒng)和Na+-K+-ATPase活性影響的研究［D］.鄭州:河南農(nóng)業(yè)大學(xué)，2010.

［13］楊家長(zhǎng)，楊 光，馬曉燕，等.低濃度阿維菌素對(duì)鯉魚(yú)超氧化物歧化酶(SOD)的影響［J］.生態(tài)毒理學(xué)報(bào)，2009，4(6):823-826.

［14］李世凱.伊維菌素在斑馬魚(yú)(Danio rerio)和吉富羅非魚(yú)(GIFT，Oreochromis niloticus)體內(nèi)的毒理學(xué)研究［D］.上海:上海海洋大學(xué)，2014.

［15］ BRADFORD M.A rapid and sensitive assay of protein utilizing the principle of dye binding［J］.Analytical Biochemistry，1976，72:248-254.

［16］許申鴻，杭 瑚，李運(yùn)平.超氧化物歧化酶鄰苯三酚測(cè)活法的研究及改進(jìn)［J］.化學(xué)通報(bào)，2001，8(12):516-519.

［17］顧含真，袁勤生，趙 健，等.腎上腺素SOD測(cè)活性法的改進(jìn)及影響因素研究［J］.食品與藥品，2006，8(8A):46-49.

［18］史競(jìng)艷，羅辛茹，鮑江鴻，等.超氧化物歧化酶活性的測(cè)定［J］.湖北大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版，2012，34(4):373-377.

［19］ BENJAMIN N D，MONTGOMERY M W.Polyphenoloxidase of Royal Ann cherries:purification and characterization［J］.J Food Sci，1973，38:799-806.

［20］楊進(jìn)孫，唐小牛，周書(shū)林，等.EDTA與金屬離子對(duì)釘螺酚氧化酶活性的影響［J］.中國(guó)病原生物學(xué)雜志，2007，2(6):457-459.

［21］李紅艷，張 喆，陳海剛，等.三唑磷對(duì)斑節(jié)對(duì)蝦肝胰腺和鰓的氧化脅迫效應(yīng)［J］.農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào)，2013，32(12):2345-2351.

［22］徐鏡波，哀曉凡，郎佩珍.過(guò)氧化氫酶活性及活性抑制的紫外分光光度測(cè)定 J］.環(huán)境化學(xué)，1997，16(1):73-76.

［23］ MATER-MIHAICH E，RICHARD T，DI GIULIO R T.Antioxidant enzyme activities and malonaldehydel，glutathione and methemoglobin concentrations in channel fish exposed to DEF and N-butylmercaptan［J］.Chem And Physiol，1986，85C:427-432.

［24］柯佳穎，肖良豪，黃周英，等.六價(jià)鉻(Cr6+)對(duì)福壽螺肝胰臟抗氧化酶活性和脂質(zhì)過(guò)氧化的影響［J］.南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2013，44(9):1471-1476.

［25］徐亞玲，李文楚.昆蟲(chóng)酚氧化酶作用機(jī)制的研究進(jìn)展［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，38(27):14844-14846.

［26］馬志卿，馮俊濤，郭志波，等.松油烯-4-醇對(duì)家蠅幾種代謝酶及酚氧化酶的影響［J］.浙江大學(xué)學(xué)報(bào):農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版，2008，34(5):509-515.

［27］ MACNAIR M.The genetics of metal tolerance in vascular plants［J］.New Phytophysiology，1993，124:541-559.

［28］ CUMMING J R，TOMSETT A B.Metal tolerance in plants:signal transduction and accumulation mechanisms［C］//ADRIANO D D.Biogeochemistry of trace metals.Boca Raton:Lewis Publishers，1992:329-364.