張維娜， 夏 飛， 謝 駿， 高 亮， 孫 梅， 陳秋紅， 匡 群， 鄒蘇艷，張憲中

(1.江蘇省蘇微微生物研究有限公司，江蘇 無(wú)錫 214063;2.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)無(wú)錫漁業(yè)學(xué)院，江蘇 無(wú)錫 214081;3.中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院淡水漁業(yè)研究中心，江蘇 無(wú)錫 214081;4.江蘇宜興天石飼料有限公司，江蘇 宜興 214200;5.無(wú)錫市水產(chǎn)技術(shù)指導(dǎo)站，江蘇 無(wú)錫 214000)

在水產(chǎn)養(yǎng)殖中，水生動(dòng)物頻繁遭受各類應(yīng)激因子的刺激，容易導(dǎo)致其機(jī)體免疫力降低，病害頻繁發(fā)生。目前，有關(guān)魚(yú)類病害的傳統(tǒng)防治方法多是使用抗生素，大量、盲目使用抗生素不但防治效果差，并且還容易造成藥物殘留、耐藥性增加、魚(yú)類內(nèi)臟機(jī)能損傷等許多不良后果［1］。近年來(lái)，在水產(chǎn)養(yǎng)殖中益生菌的使用已日趨普遍。Verschuere等［2］認(rèn)為，益生菌是一類活的微生物制劑，通過(guò)改善養(yǎng)殖環(huán)境、增強(qiáng)機(jī)體抗病能力、提高飼料營(yíng)養(yǎng)價(jià)值或飼料利用率、調(diào)節(jié)宿主或環(huán)境微生物菌群平衡而對(duì)宿主產(chǎn)生有益作用。目前，益生菌在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中的應(yīng)用方式主要包括3種:改良養(yǎng)殖水體的水質(zhì);控制病原，生物防治;作為營(yíng)養(yǎng)性飼料添加劑，提高動(dòng)物生長(zhǎng)性能。益生菌因其安全、有效的優(yōu)點(diǎn)正逐步替代抗生素在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的使用。

芽孢桿菌是水產(chǎn)養(yǎng)殖行業(yè)應(yīng)用最廣泛的益生菌之一［3-5］。芽孢桿菌能夠分泌蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶等，促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)在水生動(dòng)物消化道的分解和吸收，提高飼料的利用率和消化率。同時(shí)，芽孢桿菌被證明具有抗菌活性，能夠產(chǎn)生細(xì)菌素(抗菌肽)，對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物具有免疫刺激作用。凝結(jié)芽孢桿菌是一種既產(chǎn)乳酸又產(chǎn)芽孢的乳酸菌，已被中國(guó)農(nóng)業(yè)部列入飼料添加劑質(zhì)量保護(hù)期內(nèi)的新型飼料添加劑，美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)也將凝結(jié)芽孢桿菌列為“普遍認(rèn)為安全”的桿菌類。凝結(jié)芽孢桿菌作為一種新型的芽孢桿菌，在水產(chǎn)養(yǎng)殖中具有廣闊的應(yīng)用前景。但是目前凝結(jié)芽孢桿菌在水產(chǎn)養(yǎng)殖應(yīng)用方面的研究較少，考察其對(duì)異育銀鯽生長(zhǎng)、免疫影響的報(bào)道很少。因此，本試驗(yàn)在異育銀鯽基礎(chǔ)日糧中添加凝結(jié)芽孢桿菌JSSW-07粉劑，考察凝結(jié)芽孢桿菌作為飼料添加劑對(duì)鯽魚(yú)生長(zhǎng)、生理生化指標(biāo)的影響，為研究微生態(tài)制劑對(duì)水生動(dòng)物的作用機(jī)理提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 菌株來(lái)源

凝結(jié)芽孢桿菌(菌株JSSW-07)制劑(菌濃度為5.0×108CFU/g)由江蘇省蘇微微生物研究有限公司經(jīng)發(fā)酵、過(guò)濾、烘干制備而得，經(jīng)中國(guó)科學(xué)院微生物研究所鑒定為凝結(jié)芽孢桿菌(Bacillus coagulans)。

1.2 試驗(yàn)魚(yú)及飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)用異育銀鯽幼魚(yú)由中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院淡水漁業(yè)研究中心南泉基地提供，采用循環(huán)流水控溫系統(tǒng)進(jìn)行養(yǎng)殖。試驗(yàn)前，先用基礎(chǔ)飼料馴養(yǎng)14 d。選擇健康、質(zhì)量基本一致［初始體質(zhì)量為 (17.7±0.07)g］的異育銀鯽，隨機(jī)分為4組，每組3次重復(fù)，每個(gè)重復(fù)30尾魚(yú)。試驗(yàn)期間，每天投喂2次(8∶00至8∶30，15∶30至16∶00)，直至表觀飽食為止，日投餌量為魚(yú)體質(zhì)量的3% ～4%，并且根據(jù)生長(zhǎng)和攝食的情況作適當(dāng)調(diào)整。養(yǎng)殖期間水溫為24.5℃左右，pH 7.6～7.8，溶氧大于5 mg/L，氨態(tài)氮小于0.01 mg/L。試驗(yàn)周期為42 d。

1.3 日糧

對(duì)照組飼喂的基礎(chǔ)日糧為鯽魚(yú)商品料(表1)，由通威公司提供。試驗(yàn)日糧為基礎(chǔ)日糧分別添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%、0.3%、0.5% 凝結(jié)芽孢桿菌制劑(菌濃度為5.0×108CFU/g)。

表1 異育銀鯽基礎(chǔ)日糧Table 1 The basal diet of Carassius gibelio

1.4 樣品采集

采樣前禁食24 h，每次采樣于上午8∶00開(kāi)始，環(huán)境溫度控制在26℃左右，每個(gè)桶隨機(jī)選取3尾魚(yú)，每組9尾異育銀鯽幼魚(yú)，每次采樣都是在同等條件下進(jìn)行。將幼魚(yú)迅速撈起，尾靜脈采血，每尾魚(yú)的血液均分為2份，一份血液加入抗凝管中，24 h內(nèi)進(jìn)行血細(xì)胞測(cè)定，另一份血液于4℃條件下10 000 r/min離心5 min，制備得到的血清于-20℃凍存?zhèn)溆谩２赏暄蟮聂~(yú)稱質(zhì)量、量體長(zhǎng)，并且剖開(kāi)腹部，剝離出肝臟稱質(zhì)量。

1.5 測(cè)定方法

1.5.1 血液常規(guī)參數(shù)的測(cè)定 白細(xì)胞(WBC)、紅細(xì)胞(RBC)數(shù)量及血紅蛋白(HGB)濃度在深圳邁瑞全自動(dòng)五分類動(dòng)物血液細(xì)胞分析儀(BC-5300 VEt)上測(cè)定，試劑購(gòu)自深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司。

1.5.2 血液生化指標(biāo)的測(cè)定 血糖(Glu)、膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、總蛋白質(zhì)(TP)含量和谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)活性均在深圳邁瑞全自動(dòng)生化分析儀(BS-400)上測(cè)定，試劑盒購(gòu)自深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司。

1.5.3 肝臟抗氧化指標(biāo)的測(cè)定 肝臟樣品解凍后，用4℃生理鹽水沖洗干凈并用濾紙吸干，稱質(zhì)量。將樣品與生理鹽水按1︰9的比例在冰浴中勻漿，制成10%勻漿液。勻漿液在4℃、3 000 r/min條件下離心10 min，上清液保存于-80℃冰箱中。肝臟上清液蛋白質(zhì)含量采用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定。過(guò)氧化物酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、總抗氧化能力(T-AOC)分別采用嘌呤氧化酶法、紫外比色法、氧化還原法比色法、WST-1法測(cè)定，測(cè)定試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所。測(cè)定方法參照試劑盒說(shuō)明書(shū)。

1.6 生長(zhǎng)性能相關(guān)指標(biāo)的計(jì)算

按照下列公式［6］計(jì)算異育銀鯽幼魚(yú)生長(zhǎng)性能相關(guān)指標(biāo):增質(zhì)量率WGR=100×(Wt-W0)/W0，特定生長(zhǎng)率SGR=100×(lnWt-lnW0)/t，餌料系數(shù)FCR=FI/(Wt-W0)，成活率SR=100×Nt/N0，肝體比HSI=100 × Wh/Wb，肥滿度CF=100×Wb/L3，式中，W0為試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)魚(yú)平均體質(zhì)量，Wt為結(jié)束時(shí)平均體質(zhì)量，t為飼喂天數(shù)，F(xiàn)I為每尾魚(yú)平均攝食飼料總質(zhì)量(風(fēng)干樣)，Nt為收獲尾數(shù)，N0為放養(yǎng)尾數(shù)，Wh為結(jié)束時(shí)每尾魚(yú)肝臟質(zhì)量，Wb為結(jié)束時(shí)每尾魚(yú)體質(zhì)量，L為結(jié)束時(shí)每尾魚(yú)體長(zhǎng)。

1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

采用SPSS(Ver.11.5)軟件Duncan’s多重比較檢驗(yàn)各組間的差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 日糧中不同含量凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)異育銀鯽幼魚(yú)生長(zhǎng)性能的影響

由表2可知，與對(duì)照組相比，在基礎(chǔ)日糧中添加0.3%、0.5%凝結(jié)芽孢桿菌能夠顯著提高魚(yú)體的增質(zhì)量率、特定增長(zhǎng)率(P＜0.05)，并能夠顯著降低餌料系數(shù)(P＜0.05)，存活率、肝體比、肥滿度與對(duì)照組相比均無(wú)顯著差異(P＞0.05)。基礎(chǔ)日糧中添加0.1%凝結(jié)芽孢桿菌的試驗(yàn)組與對(duì)照組相比各指標(biāo)間均無(wú)顯著差異(P＞0.05)。

2.2 日糧中不同含量凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)異育銀鯽幼魚(yú)血液常規(guī)指標(biāo)的影響

試驗(yàn)結(jié)果(表3)顯示，各組之間白細(xì)胞和紅細(xì)胞數(shù)量及血紅蛋白濃度無(wú)顯著差異(P＞0.05)。

表2 日糧中不同含量凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)異育銀鯽幼魚(yú)生長(zhǎng)性能的影響Table 2 Effect of various B.coagulans levels on growth performance of juvenile C.gibelio

表3 日糧中不同含量凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)異育銀鯽幼魚(yú)血常規(guī)參數(shù)的影響Table 3 Effect of various B.coagulans levels on blood parameters of juvenile C.gibelio

2.3 日糧中不同含量凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)異育銀鯽幼魚(yú)血清生化指標(biāo)的影響

試驗(yàn)至第14 d，添加0.5%凝結(jié)芽孢桿菌試驗(yàn)組堿性磷酸酶(ALP)活性和總蛋白質(zhì)(TP)含量均顯著低于添加0.1%和0.3%凝結(jié)芽孢桿菌試驗(yàn)組及對(duì)照組(P＜0.05)，第28 d時(shí)各試驗(yàn)組及對(duì)照組之間ALP活性和TP含量均無(wú)顯著差異(P＞0.05);至第42 d時(shí)添加0.5%凝結(jié)芽孢桿菌試驗(yàn)組血清中ALP活性和TP含量均顯著高于0.1%、0.3%凝結(jié)芽孢桿菌試驗(yàn)組及對(duì)照組(P＜0.05)，而添加0.1%、0.3%凝結(jié)芽孢桿菌試驗(yàn)組ALP活性和TP含量與對(duì)照組無(wú)顯著差異(P＞0.05)(表4)。

表4 凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)異育銀鯽血清生化指標(biāo)的影響Table 4 Effect of B.coagulans on serum biochemical indexes of juvenile C.gibelio

與對(duì)照組相比，在飼料中添加0.1%、0.3%、0.5%凝結(jié)芽孢桿菌制劑試驗(yàn)組異育銀鯽幼魚(yú)血清中總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、葡萄糖(GLU)含量均無(wú)顯著差異(P＞0.05)，其中血清中GLU含量隨著養(yǎng)殖時(shí)間的延長(zhǎng)呈現(xiàn)不斷上升的趨勢(shì)。

試驗(yàn)前期(14 d)及中期(28 d)，各試驗(yàn)組及對(duì)照組之間異育銀鯽幼魚(yú)血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)活性、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)活性無(wú)顯著差異(P＞0.05)。至第42 d，0.5%凝結(jié)芽孢桿菌制劑試驗(yàn)組魚(yú)體中AST活性顯著高于0.1%、0.3%凝結(jié)芽孢桿菌制劑試驗(yàn)組及對(duì)照組(P＜0.05)，而0.3%凝結(jié)芽孢桿菌制劑試驗(yàn)組魚(yú)體中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)活性顯著低于0.1%、0.5%凝結(jié)芽孢桿菌制劑試驗(yàn)組及對(duì)照組(P＜0.05)。

2.4 凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)異育銀鯽幼魚(yú)肝臟抗氧化指標(biāo)的影響

試驗(yàn)至42 d，添加0.3%、0.5%凝結(jié)芽孢桿菌試驗(yàn)組魚(yú)體總抗氧化能力(T-AOC)顯著高于第14 d、第28 d魚(yú)體T-AOC(P＜0.05)。與對(duì)照組相比，試驗(yàn)前期、中期各試驗(yàn)組T-AOC與對(duì)照均無(wú)顯著差異(P＞0.05)，至后期，添加0.3%、0.5%凝結(jié)芽孢桿菌的試驗(yàn)組T-AOC顯著高于對(duì)照組與添加0.1%凝結(jié)芽孢桿菌試驗(yàn)組(P＜0.05)，添加0.1%凝結(jié)芽孢桿菌試驗(yàn)組T-AOC與對(duì)照組無(wú)顯著差異(P＞0.05)(圖1)。

圖1 凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)異育銀鯽幼魚(yú)總抗氧化能力(T-AOC)的影響Fig.1 Effects of B.coagulans on total antioxidant capacity(TAOC)of juvenile C.gibelio

第42 d，添加0.1%、0.3%、0.5%凝結(jié)芽孢桿菌試驗(yàn)組以及對(duì)照組魚(yú)體超氧化物歧化酶(SOD)活性均顯著高于第14 d、第28 d(P＜0.05)，呈現(xiàn)不斷升高的趨勢(shì)。與對(duì)照組相比，試驗(yàn)前期、中期，各試驗(yàn)組及對(duì)照組間SOD活性均無(wú)顯著差異(P＞0.05)。至42 d，添加0.3%、0.5%凝結(jié)芽孢桿菌的試驗(yàn)組SOD活性均顯著高于對(duì)照組(P＜0.01);添加0.1%凝結(jié)芽孢桿菌試驗(yàn)組SOD活性與對(duì)照組間無(wú)顯著差異(P＞0.05)(圖2)。

圖2 凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)異育銀鯽幼魚(yú)超氧化物歧化酶(SOD)活性的影響Fig.2 Effects of B.coagulans on superoxide dismutase(SOD)activity of juvenile C.gibelio

第42 d，添加0.1%、0.3%、0.5%凝結(jié)芽孢桿菌試驗(yàn)組過(guò)氧化氫酶(CAT)活性較第14 d、第28 d均顯著提高(P＜0.05)，對(duì)照組CAT活性無(wú)顯著變化(P＞0.05)(圖3)。第14 d時(shí)，各試驗(yàn)組與對(duì)照組無(wú)顯著差異(P＞0.05)，但至試驗(yàn)中、后期，添加0.3%、0.5%凝結(jié)芽孢桿菌試驗(yàn)組CAT活性均顯著高于0.1%凝結(jié)芽孢桿菌試驗(yàn)組和對(duì)照組(P＜0.05)。試驗(yàn)后期，飼料中添加0.1%凝結(jié)芽孢桿菌試驗(yàn)組CAT活性顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)。

圖3 凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)異育銀鯽幼魚(yú)過(guò)氧化氫酶(CAT)活性的影響Fig.3 Effects of B.coagulans on catalase(CAT)activity of juvenile C.gibelio

在試驗(yàn)過(guò)程中，0.1%凝結(jié)芽孢桿菌試驗(yàn)組和對(duì)照組丙二醛(MDA)含量呈現(xiàn)逐漸上升的趨勢(shì)。0.3%、0.5%凝結(jié)芽孢桿菌試驗(yàn)組MDA含量均顯著低于對(duì)照組(P＜0.05)，且兩組間無(wú)顯著差異(P＞0.05)(圖4)。試驗(yàn)前期、中期，0.1%凝結(jié)芽孢桿菌試驗(yàn)組MDA含量與0.3%、0.5%凝結(jié)芽孢桿菌試驗(yàn)組無(wú)顯著差異(P＞0.05)，但第42 d時(shí)，0.1%凝結(jié)芽孢桿菌試驗(yàn)組MDA含量顯著高于另外兩組(P＜0.05)，但顯著低于對(duì)照組(P＜0.05)。

圖4 凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)異育銀鯽幼魚(yú)丙二醛(MDA)含量的影響Fig.4 Effects of B.coagulans on malonaldehyde(MDA)content of juvenile C.gibelio

3 討論

3.1 凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)異育銀鯽幼魚(yú)生長(zhǎng)的影響

益生菌菌體含有豐富的蛋白質(zhì)，可作為蛋白質(zhì)源餌料或飼料添加劑。益生菌可在水產(chǎn)動(dòng)物腸道內(nèi)定殖，同時(shí)產(chǎn)生多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，參與水產(chǎn)動(dòng)物的新陳代謝，有利于水產(chǎn)動(dòng)物的生長(zhǎng)。潘康成等［7］發(fā)現(xiàn)在鯉魚(yú)飼料中添加0.1%的芽孢桿菌，對(duì)鯉魚(yú)生長(zhǎng)具有明顯的促進(jìn)作用。慈麗寧等［8］在團(tuán)頭魴基礎(chǔ)日糧中添加乳酸芽孢桿菌(M.amblycephala)，結(jié)果表明與對(duì)照組相比，添加乳酸芽孢顯著提高了魚(yú)體增質(zhì)量率、蛋白質(zhì)效率、特定生長(zhǎng)率。

本試驗(yàn)結(jié)果表明，與對(duì)照相比，飼料中添加0.3%和0.5%的凝結(jié)芽孢桿菌均能顯著提高魚(yú)體的增質(zhì)量率、特定增長(zhǎng)率，顯著降低餌料系數(shù)，這可能是由于飼料中添加的凝結(jié)芽孢桿菌能夠在腸道內(nèi)分泌脂肪酶、蛋白酶等多種消化酶類，促進(jìn)異育銀鯽幼魚(yú)對(duì)飼料中營(yíng)養(yǎng)成分的利用，進(jìn)而加強(qiáng)了飼料的利用價(jià)值，促進(jìn)異育銀鯽幼魚(yú)的生長(zhǎng)。但飼料中添加0.1%的凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)異育銀鯽的生長(zhǎng)性能沒(méi)有顯著的促進(jìn)作用，這說(shuō)明在飼料中添加的凝結(jié)芽孢桿菌需要達(dá)到一定的量才能促進(jìn)異育銀鯽的生長(zhǎng)。因此，結(jié)合當(dāng)前凝結(jié)芽孢桿菌微生態(tài)制劑及異育銀鯽的市場(chǎng)行情，在飼料中添加適宜濃度的凝結(jié)芽孢桿菌可降低養(yǎng)殖成本，促進(jìn)養(yǎng)殖戶增產(chǎn)增收。

3.2 凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)異育銀鯽幼魚(yú)血液常規(guī)指標(biāo)的影響

血液作為魚(yú)體內(nèi)一個(gè)非常重要的組成成分，與魚(yú)類的機(jī)體代謝、營(yíng)養(yǎng)狀況以及疾病等有著非常密切的關(guān)系。因此，血液常規(guī)指標(biāo)的變化被廣泛地用來(lái)評(píng)價(jià)魚(yú)類的健康、營(yíng)養(yǎng)以及對(duì)環(huán)境的適應(yīng)狀況，是重要的生理、病理和毒理學(xué)指標(biāo)［9-11］。

本試驗(yàn)中，凝結(jié)芽孢桿菌試驗(yàn)組異育銀鯽幼魚(yú)的紅細(xì)胞數(shù)量和血紅蛋白濃度與對(duì)照組相比均沒(méi)有顯著性差異，也沒(méi)有隨凝結(jié)芽孢桿菌在飼料中添加量的增加而發(fā)生變化，此結(jié)果與微生態(tài)制劑(EM)對(duì)建鯉(Cyprinus carpio var.Jiaon)［12］、大口黑鱸(Micropterus salmoides)及鯽魚(yú)(Carassius auratus)［13］血液指標(biāo)影響的試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞數(shù)量及血紅蛋白濃度有增加的趨勢(shì)但沒(méi)有顯著性差異的結(jié)果一致。凝結(jié)芽孢桿菌不能促進(jìn)異育銀鯽血液中血細(xì)胞和血紅蛋白的生成。試驗(yàn)中異育銀鯽血液中白細(xì)胞數(shù)量沒(méi)有顯著變化，表明魚(yú)體處于健康狀態(tài)，凝結(jié)芽孢桿菌沒(méi)有致病性。

3.3 凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)異育銀鯽幼魚(yú)血液生化指標(biāo)的影響

血清總蛋白主要由血清球蛋白和血清白蛋白構(gòu)成，血清總蛋白含量高，說(shuō)明動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)狀況良好［14］。與對(duì)照組相比，飼料中添加0.5%凝結(jié)芽孢桿菌的試驗(yàn)組魚(yú)體血清總蛋白含量顯著提高，添加0.1%、0.3%凝結(jié)芽孢桿菌試驗(yàn)組與對(duì)照組之間差異不顯著。因此，在飼料中添加適量的凝結(jié)芽孢桿菌制劑能夠提高魚(yú)體的循環(huán)抗體水平，促進(jìn)機(jī)體對(duì)蛋白質(zhì)的吸收。

堿性磷酸酶(ALP)是生物體內(nèi)普遍存在并參與生命活動(dòng)的一種重要的代謝調(diào)控酶，在水產(chǎn)養(yǎng)殖中，水產(chǎn)動(dòng)物正常生命活動(dòng)受到動(dòng)物自身ALP活性大小的影響［15］。本試驗(yàn)中，試驗(yàn)至第42 d，飼料中添加0.5%凝結(jié)芽孢桿菌的試驗(yàn)組魚(yú)體ALP活性較第14 d時(shí)顯著提高，且活性遠(yuǎn)高于添加0.1%、0.3%凝結(jié)芽孢桿菌試驗(yàn)組與對(duì)照組，而添加0.1%、0.3%凝結(jié)芽孢桿菌試驗(yàn)組和對(duì)照組ALP活性較第14 d時(shí)顯著降低。說(shuō)明凝結(jié)芽孢桿菌在魚(yú)體中要達(dá)到一定的濃度才能對(duì)血清中的ALP活性產(chǎn)生影響，本試驗(yàn)結(jié)果與慈麗寧等［7］的結(jié)果相似。

葡萄糖是機(jī)體所需能量的主要來(lái)源，許多研究結(jié)果表明其含量可以作為反映物理因子引起的壓力或污染物脅迫的指標(biāo)［16］。本試驗(yàn)中，試驗(yàn)組和對(duì)照組魚(yú)體的血糖含量均明顯增加，但試驗(yàn)組與對(duì)照組之間無(wú)顯著差異(P＞0.05)。說(shuō)明魚(yú)體未受到外界壓力或者有毒物質(zhì)的威脅，凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)異育銀鯽的血糖無(wú)顯著影響。

膽固醇是動(dòng)物體內(nèi)的一種重要類酯，通過(guò)生物轉(zhuǎn)變，在動(dòng)物生命代謝活動(dòng)中發(fā)揮重要的作用［17］。甘油三酯也是動(dòng)物體內(nèi)一種重要成分，但血清中甘油三酯過(guò)高有可能影響魚(yú)類脂肪代謝進(jìn)而形成營(yíng)養(yǎng)性脂肪肝［18］。本試驗(yàn)中，無(wú)論總膽固醇或甘油三酯含量，添加凝結(jié)芽孢桿菌試驗(yàn)組與對(duì)照組相比，均無(wú)顯著差異(P＞0.05)。說(shuō)明飼料中添加凝結(jié)芽孢桿菌沒(méi)有引起魚(yú)體脂肪代謝障礙，但同時(shí)也說(shuō)明凝結(jié)芽孢桿菌不能促進(jìn)異育銀鯽的脂肪代謝。

谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)是臨床上檢查肝功能是否正常的重要指標(biāo)。試驗(yàn)結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，飼料中添加0.5%凝結(jié)芽孢桿菌試驗(yàn)組AST活性顯著高于添加0.1%、0.3%凝結(jié)芽孢桿菌試驗(yàn)組和對(duì)照組(P＜0.05);0.3%凝結(jié)芽孢桿菌試驗(yàn)組ALT活性顯著低于對(duì)照組和0.1%、0.5%凝結(jié)芽孢桿菌試驗(yàn)組(P＜0.05)。說(shuō)明飼料中添加適量的凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)肝細(xì)胞能起到一定的保護(hù)作用，但添加過(guò)量會(huì)對(duì)肝細(xì)胞造成一定程度的損害，其原因有待進(jìn)一步研究。

3.4 凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)異育銀鯽幼魚(yú)肝臟抗氧化指標(biāo)的影響

水生動(dòng)物在新陳代謝過(guò)程中，活性氧自由基的產(chǎn)生和消除保持著一種動(dòng)態(tài)平衡。過(guò)多的氧自由基會(huì)引起脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)［19］。丙二醛是脂質(zhì)過(guò)氧化物的主要成分，具有很強(qiáng)的生物毒性［20］，其含量可間接反映細(xì)胞受損情況。超氧化物歧化酶具有很強(qiáng)的抗氧化防御功能，過(guò)氧化氫酶能催化H2O2生成水和氧氣，清除多余的自由基，減少脂質(zhì)的過(guò)氧化損傷［21］。因此，超氧化物歧化酶和過(guò)氧化氫酶的活性能夠反映機(jī)體在環(huán)境脅迫下抗氧化系統(tǒng)的變化［22］。總抗氧化能力是近幾年廣泛應(yīng)用于衡量機(jī)體抗氧化系統(tǒng)功能狀況的綜合性指標(biāo)。沈文英等［23］在養(yǎng)殖水體中使用芽孢桿菌后，三角帆蚌血清中的總抗氧化能力和SOD活性均顯著升高。

本試驗(yàn)中，與對(duì)照組相比，飼料中添加0.3%、0.5%凝結(jié)芽孢桿菌能夠顯著提高肝臟的總抗氧化能力、過(guò)氧化氫酶及超氧化物歧化酶活性，有效抑制丙二醛的生成。該結(jié)果與沈文英等［24］的飼料中添加枯草芽孢桿菌試驗(yàn)結(jié)果相一致。相關(guān)研究結(jié)果表明芽孢桿菌和乳酸菌均具有清除機(jī)體羥自由基、提高CAT活性以及抗脂質(zhì)過(guò)氧化的能力［25-26］。凝結(jié)芽孢桿菌兼具乳酸菌與芽孢桿菌的特點(diǎn)，其抗氧化作用可能有2個(gè)方面:一利用乳酸菌的特性，通過(guò)提高SOD活性和還原型谷胱甘肽(GSH)含量，促進(jìn)機(jī)體的抗氧化作用;二利用芽孢桿菌的特性，通過(guò)分泌抗氧化酶或者作為激活劑促進(jìn)機(jī)體分泌抗氧化酶，清除自由基，阻止脂質(zhì)過(guò)氧化，抑制丙二醛的生成。因此，凝結(jié)芽孢桿菌作為一種新型的微生態(tài)制劑可有效提高水產(chǎn)動(dòng)物的抗氧化功能，降低自由基對(duì)機(jī)體的損傷，預(yù)防和控制養(yǎng)殖過(guò)程中的病害發(fā)生和傳播。綜合本試驗(yàn)結(jié)果，在異育銀鯽飼料中添加0.3%凝結(jié)芽孢桿菌較適宜。

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