武凌寧，胡龍才，楊 波(武漢大學(xué)人民醫(yī)院心內(nèi)科，武漢 430060;湖北省咸寧市通城縣人民醫(yī)院內(nèi)二科;通訊作者，E-mail:Yangbo@sina．com)

原發(fā)性高血壓是心血管系統(tǒng)較為常見疾病。原發(fā)性高血壓在其疾病發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)生諸多病理生理改變。其中全身血管異常舒縮在原發(fā)性高血壓的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要的作用［1］。血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(angiotensin converting enzyme，ACE)作為RAS中的重要組成部分，在血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)的產(chǎn)生以及緩激肽的降解中起著至關(guān)重要作用。［1］?，F(xiàn)有報(bào)道指出不同地區(qū)不同種族中ACE基因第16內(nèi)含子的插入/缺失(I/D)多態(tài)性可以直接影響血清ACE及血漿AngⅡ水平［2-3］。ACE基因I/D基因多態(tài)性在原發(fā)性高血壓中發(fā)揮著重要的作用［4］。為此，本研究通過采用限制性片段長度多態(tài)性聚合酶鏈反應(yīng)探討荊門地區(qū)ACE基因I/D多態(tài)性與原發(fā)性高血壓易感性關(guān)系以及ACE基因I/D多態(tài)性飲酒在原發(fā)性高血壓中的交互作用。

1 對(duì)象與方法

1．1 研究對(duì)象

病例組選取2014-02～2015-08于我院心內(nèi)科醫(yī)院心內(nèi)科罹患高血壓的住院患者;健康個(gè)體作為對(duì)照人群，對(duì)照組人群要求無血糖調(diào)節(jié)受損。受試者年齡范圍45-86歲，最終納入原發(fā)性高血壓120例和對(duì)照140例。原發(fā)性高血壓診斷符合《原發(fā)性高血壓診斷與治療指南》(2014)診斷標(biāo)準(zhǔn)。本文若男性酒精消耗大于140 g/周，女性大于＞70 g/周至少2年則定義飲酒。

1．2 研究方法

1．2．1 一般資料的收集 通過詢問及形態(tài)學(xué)測(cè)量，收集受試者的年齡性別高血壓家族史以及體重身高等一般資料。

1．2．2 生化指標(biāo)檢測(cè) 抽取受試者空腹靜脈血，全部采用日本東芝全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定所有受試者的血清總膽固醇(TC)，甘油三酯(TG)，高密度脂蛋白(HDL-C)，低密度脂蛋白(LDL-C)，空腹血糖(FPG)。

1．2．3 ACE基因I/D多態(tài)性性檢測(cè) 采取經(jīng)典酚-氯仿方法提取外周血基因組DNA。根據(jù)eNOS基因的核苷酸序列設(shè)計(jì)各個(gè)位點(diǎn)的擴(kuò)增引物，使用PCR擴(kuò)增目的基因片段。PCR擴(kuò)增引物序列:eNOS(rs1799983)引物為:上游:5＇-TGGCCTTGCCAGAGCCGGGG-3＇;下游:5＇-CTCTTTACTCCCCGCTCCGAC-3＇;PCR 反應(yīng)體系(25 μl)包含100 ng 提取 DNA，1．0 U Taq酶，2 μl上游以及下游引物2×PCR buffer。PCR反應(yīng)條件:95℃變性6 min;94℃ 30 s，60℃ 30 s，72℃ 45 s 30個(gè)循環(huán);最后72℃延伸10 min。限制性內(nèi)切酶BsaHⅠ，NlaⅢ酶切。酶切產(chǎn)物進(jìn)行3%瓊脂糖電泳;EB染色成像以此判定酶切基因型。

1．3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS19．0進(jìn)行資料數(shù)據(jù)分析?；蛐秃偷任换蝾l率比較采用非條件Logistic回歸分析，基因型Hardy-Weinberg平衡法χ2檢驗(yàn)。計(jì)量資料符合正態(tài)分布則采用±s表示，用t檢驗(yàn)。運(yùn)用Logistic分析ACE基因I/D多態(tài)性在高血壓中作用。通過非條件Logistic以及Bootstrap方法估ACE基因I/D多態(tài)與飲酒間的相加交互作用［5］，計(jì)算相對(duì)超額危險(xiǎn)度比(RERI)、歸因比(AP)和交互作用指數(shù)(S)及其95%CI。如RERI和AP值95%CI包括0、S值95%CI包括1，表明不存在相加交互作用。以P＜0．05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 一般情況

病例組和對(duì)照組年齡、性別、體質(zhì)量指數(shù)無明顯差異(見表1)。而吸煙、飲酒、高血壓家族史方面有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P ＜0．05)。

表1 兩組患者一般資料比較Table 1 Comparison of clinical characteristics between two groups

2．2 ACE基因I/D多態(tài)性與高血壓易感性

PCR酶切產(chǎn)物EB染色成像圖見圖1。高血壓組以及對(duì)照組ACE基因I/D基因型頻分布見表2，ACE基因I/D對(duì)照組和病例組均符合Hardy-Weinberg平衡法(χ2=0．34，P=0．24;χ2=0．41，P=0．19);ACE基因I/D基因型DI的患病風(fēng)險(xiǎn)是基因型DD的1．14倍(OR=1．14，95%CI 1．05-1．52，P=0．038);II基因型者患病風(fēng)險(xiǎn)是基因型DD的1．54倍(OR=1．54，95%CI 1．22-2．89，P=0．000);I基因攜帶者(II+DI)患病風(fēng)險(xiǎn)是非I基因攜帶者(DD)的1．44倍(OR=1．44，95%CI 1．28-2．61，P=0．000)。利用非條件Logistic回歸分析校正吸煙、飲酒、高血壓家族等因素，I基因攜帶者(II+DI)患病風(fēng)險(xiǎn)是非I基因攜帶者(DD)1．53倍(OR=1．53，95%CI 1．31-3．01，P=0．000，見表2)。

2．3 ACE基因I/D多態(tài)性與飲酒交互作用

圖1 PCR酶切產(chǎn)物EB染色成像圖Figure 1 Electrophoretogram of amplified and digested PCR products

采用非條件Logistic分析ACE基因I/D多態(tài)性與飲酒交互作用，與攜帶DD基因不飲酒個(gè)體相比，攜帶DI/II基因型不飲酒個(gè)體罹患高血壓風(fēng)險(xiǎn)增加1．26 倍(OR=1．26，95%CI 1．12-1．97，P=0．024)，攜帶DD基因型飲酒個(gè)體罹患高血壓風(fēng)險(xiǎn)增加1．19倍(OR=1．19，95%CI 1．06-2．14，P=0．041)，攜帶DI/II基因型飲酒個(gè)體罹患高血壓風(fēng)險(xiǎn)增加3．39倍(OR=3．39，95%CI 2．66-5．36，P=0．000)(RERI=1．83，95%CI 1．21-2．78;AP=0．46，95%CI 0．28-0．76;S=1．31，95%CI 1．08-2．17)。RERI和 AP 值95%CI不包括0、S值95%CI不包括1，表明ACE基因I/D多態(tài)性與飲酒在原發(fā)性高血壓中存在交互作用(OR=1．67，95%CI 1．21-2．87，校正 Padd=0．000);相乘交互作用表明ACE基因I/D多態(tài)性與飲酒在原發(fā)性高血壓中存在交互作用(OR=1．47，95%CI 1．09-2．01，校正 Pmulti=0．011，見表 3)。

表2 ACE基因I/D基因型與高血壓易感性關(guān)系Table 2 ACE I/D polymorphism and susceptibility to essential hypertension

表3 ACE基因I/D多態(tài)性與飲酒二者在高血壓中交互作用Table 3 Interaction between drinking and ACE I/D polymorphism in essential hypertension

3 討論

人類ACE基因位于染色體因定位于染色體17q23 區(qū)［7，8］，目前發(fā)現(xiàn)該基因存在多個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)，ACE基因第16內(nèi)含子的插入/缺失(I/D)多態(tài)性可以直接影響血清ACE及血漿AngⅡ水平［2，3］。高血壓發(fā)病除與生活環(huán)境有關(guān)外，還與飲食以及遺傳密切相關(guān)［1］。現(xiàn)已有研究報(bào)道提示，ACE基因I/D多態(tài)性與各種心腦血管易感性密切相關(guān)［7］。近年來，流行病學(xué)不斷證實(shí)遺傳因素在高血壓發(fā)病中發(fā)揮著重要作用。從遺傳易感性角度確定高血壓高危人群，并進(jìn)行針對(duì)性的預(yù)防是目前降低高血壓發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的有效措施。迄今為止，國內(nèi)外均可見ACE基因I/D多態(tài)性與高血壓易感性的關(guān)系相關(guān)報(bào)道。研究發(fā)現(xiàn)在我國西南四川地區(qū)人群中高血壓發(fā)病ACE基因I/D多態(tài)性有明顯相關(guān)［8］。而另外一位學(xué)者發(fā)現(xiàn)上海地區(qū)男性高血壓發(fā)病與ACE基因I/D多態(tài)性無明顯的相關(guān)［9］。上述結(jié)果提示，不同地區(qū)ACE基因I/D多態(tài)性與高血壓的關(guān)聯(lián)性表現(xiàn)出一定的差異。荊門處于我國華中地區(qū)，為此我們選取湖北荊門地區(qū)個(gè)體為研究對(duì)象，探討荊門地區(qū)人群ACE基因I/D多態(tài)性與易感性關(guān)聯(lián)性及多態(tài)性與飲酒交互作用。

本研究通過病例-對(duì)照研究分析發(fā)現(xiàn)ACE基因I/D攜帶C(II/DI)基因個(gè)體患病風(fēng)險(xiǎn)較非C基因攜帶者(DD)風(fēng)險(xiǎn)明顯增加1．44倍。吸煙、家族史、飲酒為高血壓的危險(xiǎn)因素［1］。為了排除這些混雜因素在ACE基因I/D多態(tài)性與高血壓關(guān)聯(lián)性研究中的影響，本文采取非條件Logistic回歸予以校正，校正后發(fā)現(xiàn)ACE基因I/D多態(tài)性與高血壓仍有顯著的關(guān)聯(lián)性。眾所周知，高血壓患病是個(gè)體遺傳因素與外界環(huán)境因素共同作用的結(jié)果［1］，為了進(jìn)一步探討ACE基因I/D多態(tài)性與飲酒對(duì)高血壓患病是否有交互作用，本文采用非條件Logistic回歸分析予以驗(yàn)證。結(jié)果表明攜帶II/DI基因型飲酒個(gè)體高血壓罹患風(fēng)險(xiǎn)是攜帶DD基因非飲酒個(gè)體3．39倍，提示ACE基因I/D多態(tài)性與飲酒在高血壓發(fā)病中存在協(xié)同作用。ACE基因I/D多態(tài)性和飲酒在高血壓病及其他疾病中交互作用鮮見報(bào)道，其機(jī)制目前尚無法闡明。參照ACE基因I/D多態(tài)性可以影響血清ACE及血漿 AngⅡ水平［2，3］，飲酒既可直接增加高血壓易感性，同時(shí)也可以影響ACE及血漿AngⅡ水平而間接增加高血壓易感性而發(fā)揮協(xié)同效應(yīng)［10，11］。本研究存在一定不足，最顯著的是診斷時(shí)只考慮了是否飲酒，而沒有充分考慮飲酒的嚴(yán)重程度。其次，本文僅僅考慮飲酒，而沒有考慮生活習(xí)慣以及環(huán)境因素的影響。再次，研究中樣本量較小，需要進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量。

總之，ACE基因I/D多態(tài)性可以增加個(gè)體高血壓罹患風(fēng)險(xiǎn)，且和飲酒在高血壓發(fā)病中發(fā)揮著協(xié)同作用。本研究存在一定不足，為更好研究ACE基因I/D多態(tài)性在高血壓易感性以及與飲酒的交互作用，尚需要開展更大樣本量、設(shè)計(jì)更嚴(yán)謹(jǐn)?shù)难芯俊?/p>

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