欽建偉 陳 琳

（蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院，江蘇蘇州215006）

醋炙法對(duì)商陸毒性和藥效影響的實(shí)驗(yàn)研究

欽建偉 陳 琳

（蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院，江蘇蘇州215006）

目的：研究商陸醋炙前后毒性和藥效的變化情況。方法：按照2010版《中國(guó)藥典》商陸項(xiàng)下炮制方法——醋炙法對(duì)商陸進(jìn)行炮制，得炮制品醋商陸。給予小鼠單次不同劑量生、醋商陸煎液灌胃，3h后檢測(cè)小鼠消化系統(tǒng)臟器改變情況。給予家兔不同濃度生商陸混懸液和15.0%醋商陸混懸液滴眼，檢測(cè)藥物對(duì)家兔眼結(jié)膜的刺激性強(qiáng)度。大鼠制作鹽水負(fù)荷模型，分別給予同體積生理鹽水、氫氯噻嗪和生商陸、醋商陸煎液灌胃后，比較各組5h總尿量。小鼠隨機(jī)分組后分別灌胃同體積加入墨汁的生理鹽水、10%芒硝溶液和生商陸、醋商陸煎液，15min后檢測(cè)墨汁推進(jìn)率。結(jié)果：?jiǎn)未?0倍日用量（35.1g/kg）灌胃生商陸后，小鼠消化系統(tǒng)臟器病變率為66.7%，而醋商陸各劑量組未見(jiàn)明顯病變。各劑量生商陸混懸液滴眼后，家兔均表現(xiàn)出充血、水腫、分泌物等眼結(jié)膜刺激性，有確切量效關(guān)系；等劑量生、醋商陸混懸液滴眼后，生商陸組眼結(jié)膜刺激性強(qiáng)于醋商陸組。大鼠灌胃生、醋商陸后，尿量均增加，高劑量醋商陸組尿量顯著高于高劑量生商陸組。小鼠灌胃生、醋商陸后小腸墨汁推進(jìn)率均明顯高于生理鹽水組，生商陸組明顯高于醋商陸組。結(jié)論：醋炙法能夠降低商陸對(duì)黏膜的刺激性，增強(qiáng)利尿功效，緩和瀉下作用。

商陸 醋炙 藥理學(xué) 毒性

商陸系商陸科植物商陸 Phytolacca acinosa Roxb.或垂序商陸Phytolacca americana L.的干燥根，為歷版《中國(guó)藥典》收載品種，具有逐水消腫、通利二便的功效。但由于其藥性峻猛、毒副作用較大，故須經(jīng)嚴(yán)格炮制后方可入藥。商陸的炮制工藝以醋炙為主[1]，本研究對(duì)商陸醋炙前后的黏膜刺激性以及利尿、瀉下作用的變化情況進(jìn)行了對(duì)比研究，以期驗(yàn)證該炮制方法的科學(xué)性。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 藥材 生商陸購(gòu)自安徽省亳州市永剛飲片有限公司（山西產(chǎn)，批號(hào)20100122），經(jīng)南京中醫(yī)藥大學(xué)王春根教授鑒定為商陸科植物商陸Phytolacca acinosa Roxb.的干燥塊根。取生商陸飲片適量，按2010年版《中國(guó)藥典》“醋炙法”項(xiàng)下炮制：加入30%醋拌勻，悶潤(rùn)至醋被吸盡，置炒制容器內(nèi)，120℃炒制30min，取出放涼，得醋商陸[2]。

分別取生商陸、醋商陸飲片100g，加水800mL煎煮30min，過(guò)濾。濾渣再加水600mL煎煮30min，過(guò)濾。合并濾液，濃縮至100mL，得1g/mL水煎液，作為原液。家兔眼刺激性試驗(yàn)中將生商陸、醋商陸飲片真空干燥并粉碎過(guò)200目篩，備用。

1.2 動(dòng)物 ICR雄性小鼠，體重（20±2）g，SPF級(jí)；SD雄性大鼠，體重（200±20）g，SPF級(jí)。大鼠小鼠均由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司提供，許可證號(hào)SCXK（滬）2007-0005。大耳白種家兔，雌雄不限，體重（1.5±0.2）kg，健康，雙眼清亮無(wú)紅腫，由南京市青龍山動(dòng)物繁殖場(chǎng)提供，許可證號(hào)SCXK（蘇）2007-0008。

1.3 試劑 生理鹽水 （南京小營(yíng)藥業(yè)集團(tuán)有限公司，批號(hào)2010031702）；甲醛（分析純，上海久億化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)20100301）。

1.4 儀器 BP211D電子天平 （德國(guó)Sartorius公司），注射器，兔籠，大鼠代謝籠。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 生商陸和醋商陸單次不同劑量給藥后對(duì)小鼠消化道黏膜的刺激作用 ICR小鼠實(shí)驗(yàn)前禁食（不禁水）12h，按體重隨機(jī)分為9組，每組6只，分別為生理鹽水組、生商陸水煎液（1.17、11.7、23.4、35.1g/kg，分別相當(dāng)于臨床日用劑量的1、10、20、30倍）組和醋商陸水煎液（1.17、11.7、23.4、35.1g/kg，分別相當(dāng)于臨床日用劑量的1、10、20、30倍）組。各組小鼠灌胃給藥1次，生理鹽水組灌胃等容量生理鹽水，3h后采集各組小鼠食管、胃、十二指腸、空腸、回腸和結(jié)腸等消化系統(tǒng)臟器，生理鹽水沖洗，并立即浸泡在4%甲醛溶液中，固定3d。常規(guī)取材，脫水，石蠟包埋，制片，HE染色，光學(xué)顯微鏡下閱片，檢查有無(wú)毒性作用引起上述臟器病變。

2.2 生商陸和醋商陸對(duì)家兔眼結(jié)膜刺激作用 取生商陸飲片適量，粉碎后過(guò)200目篩，用生理鹽水分別配成7.5%、10%、12.5%和15%濃度的混懸液，調(diào)節(jié)pH值至中性，備用。取醋商陸飲片適量，粉碎后過(guò)200目篩，用生理鹽水配成15%濃度的混懸液，調(diào)節(jié)pH值至中性，備用。

家兔隨機(jī)分為生理鹽水組、各濃度生品組、15%醋商陸組，每組6只。將兔固定于兔籠內(nèi)，試驗(yàn)時(shí)撩起上下眼瞼，使成杯狀，將藥液分別滴加到兔眼中，每只眼給藥50μL，生理鹽水組予生理鹽水滴眼。給藥后，輕輕使上下眼瞼被動(dòng)閉合10s，使藥液和眼充分接觸，10min后用20mL左右生理鹽水沖洗眼睛至眼中無(wú)任何異物，隨后觀察3h內(nèi)兔眼情況，拍照記錄家兔眼的刺激反應(yīng)情況并打分評(píng)定眼刺激性強(qiáng)度，家兔眼結(jié)膜刺激性試驗(yàn)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表1。

2.3 生商陸和醋商陸的利尿作用 將雄性SD大鼠稱重后，隨即放入已標(biāo)號(hào)的代謝籠中（1只/籠），喂養(yǎng)1～2d，自由飲水，觀察大鼠尿量是否穩(wěn)定。實(shí)驗(yàn)前18h禁食，自由飲水。用藥前以2.5mL/100g蒸餾水灌胃，收集2h尿量，尿量超過(guò)蒸餾水灌胃量40%者為合格動(dòng)物。

表1 家兔眼結(jié)膜刺激試驗(yàn)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

合格的SD大鼠按體重隨機(jī)分為6組，每組8只，分別為生理鹽水組、陽(yáng)性藥組（0.009g/kg氫氯噻嗪）、生商陸和醋商陸低劑量組（相當(dāng)于臨床日用劑量，即0.8g/kg）、生商陸和醋商陸高劑量組（相當(dāng)于臨床日用劑量的2倍，即1.6g/kg）。實(shí)驗(yàn)前將各組動(dòng)物禁食不禁水24h，每組按2.5mL/100g生理鹽水灌胃，形成鹽水負(fù)荷模型。30min后，各給藥組均按1mL/100g體重給藥，生理鹽水組給予同等體積的生理鹽水。給藥后，立即將大鼠放入代謝籠中，每隔1h計(jì)1次尿量，共計(jì)5h，收集5h總尿量。[3]335

2.4 生商陸和醋商陸的瀉下作用 ICR小鼠按體重隨機(jī)分為4組，每組10只，分別為生理鹽水組、陽(yáng)性藥組（10%芒硝）、生商陸和醋商陸組（相當(dāng)于臨床日用劑量，即0.8g/kg）。實(shí)驗(yàn)前將各組藥液中均滴入數(shù)滴墨汁起指示作用，實(shí)驗(yàn)小鼠禁食不禁水24h，每組按0.2mL/10g體重灌胃給藥，生理鹽水組給予同等體積的生理鹽水。15min后脫頸處死，打開(kāi)腹腔分離腸系膜，剪取上端至幽門(mén)、下端至回盲部的腸管，置于托盤(pán)上輕輕擺成直線，測(cè)量所取腸管首尾長(zhǎng)度為“小腸總長(zhǎng)度”，從幽門(mén)至墨汁前沿的距離作為“墨汁在腸內(nèi)推進(jìn)距離”。用公式計(jì)算墨汁推進(jìn)百分率，并注意觀察各組小鼠小腸容積膨脹程度差異。[3]326

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 生商陸和醋商陸單次不同劑量給藥后對(duì)小鼠消化道黏膜的刺激性比較 病理切片結(jié)果顯示，單次大劑量給藥后商陸會(huì)造成的病變主要位于胃。生商陸35.1g/kg組 （相當(dāng)于臨床日用劑量的 30倍）有4只小鼠出現(xiàn)局部胃黏膜上皮細(xì)胞壞死、脫落，可見(jiàn)小灶狀出血，病變率為66.7%；生商陸23.4g/kg組（相當(dāng)于臨床日用劑量的 20倍）有 2只小鼠出現(xiàn)局部胃黏膜上皮細(xì)胞壞死、脫落，病變率為33.3%；生商陸11.7、1.17g/kg組（分別相當(dāng)于臨床日用劑量的10倍、1倍）未見(jiàn)明顯病變。而醋商陸各劑量組均未見(jiàn)明顯病變，表明商陸經(jīng)醋炙后對(duì)小鼠胃黏膜的刺激性顯著減弱。見(jiàn)圖1。

圖1 各組大鼠胃組織改變情況（HE染色，×200倍）

3.2 生商陸和醋商陸對(duì)家兔眼結(jié)膜的刺激性比較 見(jiàn)表2。結(jié)果顯示，在一定濃度范圍內(nèi)，生商陸混懸液的濃度和對(duì)家兔的眼刺激性強(qiáng)度呈現(xiàn)確切的量-效關(guān)系，即濃度越高，對(duì)兔眼的刺激性越強(qiáng)。濃度達(dá)到15%時(shí)，對(duì)兔眼結(jié)膜具有重度刺激性；與15%濃度生商陸混懸液比較，15%濃度醋商陸混懸液對(duì)兔眼的刺激性強(qiáng)度顯著減弱（P＜0.01）。

3.3 生商陸和醋商陸的利尿作用比較 見(jiàn)表3。結(jié)果顯示，生商陸和醋商陸低劑量組排尿量未見(jiàn)顯著差異，生商陸和醋商陸高劑量組在給藥3h后排尿量差異顯著（P＜0.05），醋商陸組排尿量顯著高于生商陸組，表明商陸經(jīng)醋炙后其利尿功效增強(qiáng)。

3.4 生商陸和醋商陸瀉下作用比較 見(jiàn)表4。結(jié)果顯示，與生商陸比較，醋商陸對(duì)小鼠小腸的推動(dòng)作用減弱（P＜0.01），即商陸經(jīng)醋炙后瀉下作用緩和。

4 討論

商陸臨床中毒癥狀主要表現(xiàn)為胃腸道反應(yīng)，如惡心嘔吐、腹痛腹瀉，嚴(yán)重者可出現(xiàn)胃腸道糜爛、潰瘍及出血等[4]。本研究通過(guò)小鼠單次大劑量給藥后消化系統(tǒng)臟器病理切片檢查可知，這種急性刺激性作用主要作用于胃。本研究結(jié)果亦表明，商陸經(jīng)醋炙后，對(duì)動(dòng)物胃黏膜的刺激性顯著減弱。

除了傳統(tǒng)的口服中毒外，商陸粉末與眼、鼻和口腔黏膜接觸會(huì)出現(xiàn)紅腫疼痛等局部刺激性反應(yīng)。本研究亦通過(guò)家兔眼結(jié)膜刺激性試驗(yàn)考察了商陸醋炙前后的刺激性作用變化，結(jié)果表明，商陸經(jīng)醋炙后，對(duì)家兔眼結(jié)膜的刺激性顯著減弱。

商陸為一味峻下逐水藥，功能逐水消腫、通利二便。本研究用大鼠代謝籠試驗(yàn)對(duì)同一品種商陸高低劑量組、同一劑量生品商陸和醋炙商陸的利尿作用進(jìn)行了對(duì)比研究，采用小鼠小腸墨汁推進(jìn)試驗(yàn)對(duì)商陸醋炙前后的瀉下作用進(jìn)行了對(duì)比研究。結(jié)果顯示，商陸在一定范圍內(nèi)劑量越高，利尿作用越強(qiáng)，表明商陸的功效之一是利尿。商陸經(jīng)醋炙后瀉下作用有所緩和，利尿作用有所增強(qiáng)。

表2 各組家兔眼結(jié)膜刺激性評(píng)分比較（±s）

表2 各組家兔眼結(jié)膜刺激性評(píng)分比較（±s）

注：與生理鹽水組比較，**P＜0.01；與7.5%生商陸組比較，▲▲P＜0.01；與15.0%生商陸組比較，##P＜0.01。

得分 平均得分（x ± s）組別 動(dòng)物數(shù)（只）生理鹽水組 6 7 . 5 %生商陸組 6 1 0 . 0 %生商陸組 6充血 水腫 分泌物0 0 0 0 . 0 0 ± 0 . 0 0 3 3 4 1 . 6 7 ± 0 . 4 9**8 1 0 6 4 . 0 0 ± 0 . 1 6**▲▲1 2 . 5 %生商陸組 6 1 5 . 0 %生商陸組 6 1 0 2 0 1 2 7 . 0 0 ± 0 . 0 9**▲▲1 3 3 0 1 2 9 . 1 7 ± 0 . 0 8**▲▲1 5 . 0 %醋商陸組 6 1 0 1 5 7 5 . 3 3 ± 0 . 1 0**##

表3 各組大鼠給藥后不同時(shí)段尿量比較（±s）

表3 各組大鼠給藥后不同時(shí)段尿量比較（±s）

注：與生理鹽水組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與等劑量生商陸組比較，▲P＜0.05；與同一品種低劑量組比較，●P＜0.05，●●P＜0.01。

0～5 h劑量（g / k g）組別 動(dòng)物數(shù)（只）生理鹽水組 8氫氯噻嗪組 8給藥后尿量（m L）0～2 h 0～3 h 0～4 h 0 . 0 0 9 3 . 8 5 ± 0 . 9 7**0～1 h - 1 . 7 8 ± 0 . 3 7 2 . 8 3 ± 0 . 5 0 3 . 1 0 ± 0 . 3 4 3 . 2 0 ± 0 . 4 0 3 . 2 3 ± 0 . 3 9 5 . 0 8 ± 0 . 8 6**6 . 0 3 ± 0 . 7 8**6 . 9 0 ± 1 . 3 4**7 . 0 5 ± 1 . 3 4**生商陸低劑量組 8生商陸高劑量組 8 0 . 8 2 . 3 2 ± 0 . 4 3*3 . 4 8 ± 0 . 4 1*4 . 0 8 ± 0 . 3 4**4 . 2 7 ± 0 . 3 0**4 . 2 7 ± 0 . 3 0**1 . 6 2 . 7 5 ± 0 . 4 8**4 . 2 2 ± 0 . 4 4**●4 . 7 0 ± 0 . 2 8**●4 . 9 5 ± 0 . 3 0**●5 . 0 3 ± 0 . 2 4**●醋商陸低劑量組 8醋商陸高劑量組 8 0 . 8 2 . 2 3 ± 0 . 4 0 3 . 5 2 ± 0 . 4 0*4 . 0 7 ± 0 . 3 2**4 . 1 5 ± 0 . 2 7**4 . 1 8 ± 0 . 2 8**1 . 6 2 . 9 7 ± 0 . 3 7**●4 . 3 8 ± 0 . 3 7**●5 . 0 3 ± 0 . 1 9**▲●●5 . 3 3 ± 0 . 2 4**▲●●5 . 3 5 ± 0 . 2 2**▲●●

表4 各組小鼠小腸墨汁推進(jìn)運(yùn)動(dòng)情況與腸容積變化情況比較（±s）

表4 各組小鼠小腸墨汁推進(jìn)運(yùn)動(dòng)情況與腸容積變化情況比較（±s）

注：與生理鹽水組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與生商陸組比較，▲▲P＜0.01。

組別 動(dòng)物數(shù)（只）生理鹽水組 1 0 1 0 %芒硝組 1 0生商陸組 1 0醋商陸組 1 0小腸總長(zhǎng)度（c m）4 4 . 0 8 ± 1 . 9 8墨汁推進(jìn)距離（c m） 墨汁推進(jìn)率（%）腸容積變化2 5 . 7 9 ± 1 . 1 1 5 8 . 6 2 ± 3 . 6 6無(wú)變化4 3 . 8 6 ± 2 . 4 7 4 4 . 7 0 ± 2 . 3 0 3 2 . 4 6 ± 2 . 0 3 7 2 . 6 1 ± 2 . 6 9**稍膨脹4 3 . 6 9 ± 2 . 8 8 2 7 . 7 0 ± 2 . 7 1 6 3 . 3 6 ± 3 . 9 5*▲▲稍膨脹3 1 . 8 9 ± 2 . 1 7 7 2 . 7 2 ± 3 . 0 8**膨脹

綜上，醋炙法是商陸的傳統(tǒng)炮制方法，本研究結(jié)果表明，商陸經(jīng)醋炙后刺激性降低，瀉下作用緩和，逐水作用增強(qiáng)，即達(dá)到了減毒增效的目的，此結(jié)論驗(yàn)證了商陸傳統(tǒng)炮制法的科學(xué)性。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典（一部）.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：304

[2] 陳琳，吳皓，王媚，等.醋商陸飲片的炮制工藝研究.中草藥，2011，42（6）：1101

[3] 陳奇.中藥藥理研究方法學(xué).2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2006

[4] 李一飛，姚廣濤.商陸藥理作用及毒性研究進(jìn)展.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011，17（13）：248

編輯：吳 寧

R282.71

A

1672-397X（2015）01-0077-03

欽建偉（1975-），男，本科學(xué)歷，主管中藥師，主要從事中藥藥理研究。qinjianwei8@126.com

2014-09-15