喬宇　廖+李　汪蘭　等

摘要：以山藥（Dioscorea opposita）皮和山藥粉為原料，通過(guò)水超聲波提取尿囊素，采用 Agilent ZORBAX Ecilipse XDB-C18液相色譜柱，以0.025 mol/L磷酸二氫鈉緩沖液（pH 3.0）-甲醇（95/5，V/V）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)224 nm，建立了山藥粉和山藥皮中尿囊素的測(cè)定方法，結(jié)果表明該方法在0.1～1 mg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系，平均回收率為 96.77%，RSD為1.90%，該法條件穩(wěn)定、操作簡(jiǎn)單、精密度及回收率較好，定量結(jié)果準(zhǔn)確可靠，適用于分析3種山藥的山藥皮和山藥粉中的尿囊素含量。

關(guān)鍵詞：山藥（Dioscorea opposita）；山藥皮；山藥粉；尿囊素；液相色譜

中圖分類(lèi)號(hào)：TS202.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2014）22-5528-03

山藥（Rhizoma Dioscoreae）為薯蕷科多年生宿根蔓性草本植物的地下塊莖，又名白苕、土薯、大薯、薯藥。山藥有健胃、補(bǔ)肺、固腎、益精的功能[1]。近年來(lái)山藥作為保健食品風(fēng)靡國(guó)內(nèi)外，我國(guó)已將山藥列入藥食兩用植物名錄。山藥的活性成分及藥理研究已引起人們高度關(guān)注。山藥的成分主要有薯蕷皂苷元、黏液質(zhì)、淀粉、多糖、氨基酸、尿囊素等[2]。其中尿囊素是山藥的活性成分之一，與山藥的功效密切相關(guān)，常作為活性成分評(píng)價(jià)山藥品質(zhì)。尿囊素已被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、化妝品和農(nóng)業(yè)種植，可用于治療皮膚干燥癥，治療鱗屑性皮膚病及潰瘍，具有促進(jìn)上皮細(xì)胞生長(zhǎng)、軟化角質(zhì)、增加皮膚的柔軟性、彈性和光澤的作用[3]，還是優(yōu)良的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，可刺激植物生長(zhǎng)，對(duì)小麥、柑桔、水稻、蔬菜、大豆等均有顯著增產(chǎn)效果，并有固果早熟作用[4]。本試驗(yàn)建立了尿囊素的高效液相色譜分析方法，并檢測(cè)了湖北地區(qū)菜山藥、蘄山藥、利川山藥的皮和粉（塊莖）中尿囊素的含量，篩選尿囊素含量較高的山藥品種，為山藥的種質(zhì)資源開(kāi)發(fā)提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

蘄山藥由湖北省蘄春縣高溪山藥合作社提供，利川山藥由湖北省利川市匯川現(xiàn)代農(nóng)業(yè)有限公司提供，菜山藥購(gòu)于湖北省武漢市武商量販超市；甲醇為色譜純；磷酸二氫鈉、磷酸均為分析純，由國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司提供；尿囊素對(duì)照品購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所。

1.2 儀器

LC-20AT高效液相色譜儀（日本島津公司）；PE3102S電子天平（上海梅特勒-托利多儀器有限公司）；TG16-WS高速萬(wàn)能粉碎機(jī)（浙江屹立工貿(mào)有限公司）；JY5002漩渦振蕩器（天津凱通化學(xué)試劑有限公司）；PB-10型pH計(jì)（北京賽多利斯儀器有限公司）；KQ-50B數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；LXJ-B臺(tái)式高速離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）；

1.3 方法

1.3.1 色譜條件 Agilent ZORBAX Ecilipse XDB-C18色譜柱，檢測(cè)波長(zhǎng)224 nm，柱溫35 ℃，流速0.8 mL/min，進(jìn)樣量10 μL。流動(dòng)相為0.025 mol/L磷酸二氫鈉緩沖液（pH 3.0）-甲醇（95/5，V/V）。

1.3.2 溶液配制 稱取經(jīng)100℃減壓干燥至恒重的尿囊素對(duì)照品53 mg，以去離子水定容至50 mL，得1.062 0 mg/mL對(duì)照品貯備溶液；將對(duì)照品貯備液以去離子水稀釋?zhuān)渲瞥?.106 2、0.212 4、0.531 0、0.637 2、0.849 6、1.062 0 mg/mL系列濃度溶液。

1.3.3 樣品制備 將山藥表皮清洗干凈，去皮，塊莖切片，分別取山藥片和皮于50 ℃下烘干，粉碎，過(guò)80目篩，得山藥粉和山藥皮粉。精密稱取1.00 g山藥樣品于具塞三角燒瓶中，加入40 mL 去離子水，超聲浸提30 min，提取溫度30 ℃，超聲頻率70 Hz，取提取液離心，取上清液定容至50 mL，再經(jīng)過(guò)0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，濾液待測(cè)。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

吸取不同濃度對(duì)照品溶液，以待測(cè)物峰面積（Y）和質(zhì)量濃度（X）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為Y=9 682.6X+602.08，相關(guān)系數(shù)（R）=0.999 5，在0.1～1.0 mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2 精密度試驗(yàn)

精密吸取同一濃度的樣品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄色譜峰面積，測(cè)得尿囊素峰面積平均值為25 189.16 mAU，RSD為1.90%。

2.3 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批山藥樣品，按樣品制備方法平行制備5份，計(jì)算尿囊素含量及RSD，測(cè)得尿囊素的平均含量為4.18%，RSD為1.45%。

2.4 回收率試驗(yàn)

取已知尿囊素含量的山藥樣品分別加入3.99、5.42、9.25、11.87 mg尿囊素標(biāo)準(zhǔn)品，按上述方法測(cè)定尿囊素含量，結(jié)果見(jiàn)表1。其中平均加樣回收率為96.76%，RSD為4.82，說(shuō)明本方法的準(zhǔn)確度良好。

2.5 不同品種山藥粉和山藥皮中尿囊素含量比較

稱取不同山藥樣品1.00 g，分別按樣品方法制備。測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。

由表2可知，利川山藥和蘄山藥的山藥皮和山藥粉中尿囊素的含量差異較大。利川山藥和蘄山藥的山藥皮中尿囊素含量最高，菜山藥粉的尿囊素含量高于利川山藥粉和蘄山藥粉。本研究供試樣品的尿囊素含量普遍高于黃玉仙等測(cè)定的18種不同種質(zhì)資源的山藥，可能是品種及生長(zhǎng)環(huán)境不同引起的，特別是蘄山藥，其形狀不規(guī)則，形似手掌，塊莖短而粗，長(zhǎng)度只有菜山藥的1/5，表皮厚而粗糙，毛多而長(zhǎng)，是大別山獨(dú)有的野生品種。本研究結(jié)果顯示利川山藥和蘄山藥皮中尿囊素含量都大于5%，是優(yōu)質(zhì)山藥資源。由于山藥皮是山藥加工過(guò)程中的廢棄物，對(duì)其中的有效活性成分進(jìn)行高效利用，將可變廢為寶，提高附加值，具有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。

3 小結(jié)與討論

現(xiàn)有測(cè)定尿囊素的方法中[5-10]，大多采用乙醇、甲醇作為尿囊素的提取溶劑，本研究在前期對(duì)比了不同濃度的甲醇、乙醇和水溶液對(duì)尿囊素的提取效果，發(fā)現(xiàn)水超聲提取尿囊素的效果最好，用水做溶劑不但成本低而且避免使用有機(jī)溶劑，無(wú)毒，適合在食品中應(yīng)用。預(yù)試驗(yàn)曾比較了甲醇-水（5∶95，V/V）與磷酸二氫鉀緩沖液（pH 3.0）-甲醇（95∶5，V/V）2種流動(dòng)相，結(jié)果發(fā)現(xiàn)流動(dòng)相體系中加入磷酸鹽緩沖液調(diào)整pH可改善樣品中尿囊素與雜質(zhì)的分離效果。

本試驗(yàn)利用 Agilent ZORBAX Ecilipse XDB-C18液相色譜柱， 0.025 mol/L磷酸二氫鈉緩沖液（pH值3.0）-甲醇（95/5，V/V）為流動(dòng)相，建立了山藥粉和山藥皮中尿囊素的測(cè)定方法，該方法線性范圍為0.1～1.0 mg/mL，標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)為0.999 5，平均回收率為 96.77%，重現(xiàn)性（n=5）RSD為1.45%，該法簡(jiǎn)便、重現(xiàn)性好、結(jié)果準(zhǔn)確。利用該法分析了3種山藥粉和山藥皮中尿囊素的含量，結(jié)果顯示利川山藥皮和蘄山藥皮中尿囊素含量最高，菜山藥粉的尿囊素含量高于利川山藥粉和蘄山藥粉。

參考文獻(xiàn)

[1] 張 兵，謝九皋.山藥營(yíng)養(yǎng)成分的研究[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，1996， 41（6）：56-58.

[2] 袁書(shū)林.山藥的化學(xué)成分和生物活性作用研究進(jìn)展[J].食品研究與開(kāi)發(fā)，2008，29（3）：176-179.

[3] 陳佳希，李多偉.山藥的功能及有效成分研究進(jìn)展[J].西北藥學(xué)雜志，2010，25（5）：398-340

[4] 曲 玲，羅 青，曹有龍，等.尿囊素浸種對(duì)豌豆幼苗生長(zhǎng)發(fā)育的影響.寧夏農(nóng)林科技，2001（3）：30-31.

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[8] 白 雁.HPLC法測(cè)定不同產(chǎn)地山藥中尿囊素的含量[J].中草藥，2003，34（2）：79-80.

[9] 王洪倫，李玉林，丁晨旭，等.正交試驗(yàn)研究白刺種子尿囊素提取工藝[J].天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā)，2006，18（5）：833-835.

[10] 沈永權(quán)，王明金.山藥生品與麩炒品中尿囊素的含量對(duì)比[J]. 中國(guó)中醫(yī)藥，2011，9（15）：75.

（責(zé)任編輯 周有祥）

3 小結(jié)與討論

現(xiàn)有測(cè)定尿囊素的方法中[5-10]，大多采用乙醇、甲醇作為尿囊素的提取溶劑，本研究在前期對(duì)比了不同濃度的甲醇、乙醇和水溶液對(duì)尿囊素的提取效果，發(fā)現(xiàn)水超聲提取尿囊素的效果最好，用水做溶劑不但成本低而且避免使用有機(jī)溶劑，無(wú)毒，適合在食品中應(yīng)用。預(yù)試驗(yàn)曾比較了甲醇-水（5∶95，V/V）與磷酸二氫鉀緩沖液（pH 3.0）-甲醇（95∶5，V/V）2種流動(dòng)相，結(jié)果發(fā)現(xiàn)流動(dòng)相體系中加入磷酸鹽緩沖液調(diào)整pH可改善樣品中尿囊素與雜質(zhì)的分離效果。

本試驗(yàn)利用 Agilent ZORBAX Ecilipse XDB-C18液相色譜柱， 0.025 mol/L磷酸二氫鈉緩沖液（pH值3.0）-甲醇（95/5，V/V）為流動(dòng)相，建立了山藥粉和山藥皮中尿囊素的測(cè)定方法，該方法線性范圍為0.1～1.0 mg/mL，標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)為0.999 5，平均回收率為 96.77%，重現(xiàn)性（n=5）RSD為1.45%，該法簡(jiǎn)便、重現(xiàn)性好、結(jié)果準(zhǔn)確。利用該法分析了3種山藥粉和山藥皮中尿囊素的含量，結(jié)果顯示利川山藥皮和蘄山藥皮中尿囊素含量最高，菜山藥粉的尿囊素含量高于利川山藥粉和蘄山藥粉。

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[10] 沈永權(quán)，王明金.山藥生品與麩炒品中尿囊素的含量對(duì)比[J]. 中國(guó)中醫(yī)藥，2011，9（15）：75.

（責(zé)任編輯 周有祥）

3 小結(jié)與討論

現(xiàn)有測(cè)定尿囊素的方法中[5-10]，大多采用乙醇、甲醇作為尿囊素的提取溶劑，本研究在前期對(duì)比了不同濃度的甲醇、乙醇和水溶液對(duì)尿囊素的提取效果，發(fā)現(xiàn)水超聲提取尿囊素的效果最好，用水做溶劑不但成本低而且避免使用有機(jī)溶劑，無(wú)毒，適合在食品中應(yīng)用。預(yù)試驗(yàn)曾比較了甲醇-水（5∶95，V/V）與磷酸二氫鉀緩沖液（pH 3.0）-甲醇（95∶5，V/V）2種流動(dòng)相，結(jié)果發(fā)現(xiàn)流動(dòng)相體系中加入磷酸鹽緩沖液調(diào)整pH可改善樣品中尿囊素與雜質(zhì)的分離效果。

本試驗(yàn)利用 Agilent ZORBAX Ecilipse XDB-C18液相色譜柱， 0.025 mol/L磷酸二氫鈉緩沖液（pH值3.0）-甲醇（95/5，V/V）為流動(dòng)相，建立了山藥粉和山藥皮中尿囊素的測(cè)定方法，該方法線性范圍為0.1～1.0 mg/mL，標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)為0.999 5，平均回收率為 96.77%，重現(xiàn)性（n=5）RSD為1.45%，該法簡(jiǎn)便、重現(xiàn)性好、結(jié)果準(zhǔn)確。利用該法分析了3種山藥粉和山藥皮中尿囊素的含量，結(jié)果顯示利川山藥皮和蘄山藥皮中尿囊素含量最高，菜山藥粉的尿囊素含量高于利川山藥粉和蘄山藥粉。

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[10] 沈永權(quán)，王明金.山藥生品與麩炒品中尿囊素的含量對(duì)比[J]. 中國(guó)中醫(yī)藥，2011，9（15）：75.

（責(zé)任編輯 周有祥）