■ 黃遵錫 程志斌

（1.云南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，云南昆明 650222；2.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)云南省畜產(chǎn)品加工工程技術(shù)研究中心，云南昆明 650201；3.昆明三正生物科技集團(tuán)有限公司，云南昆明 650217）

產(chǎn)蛋期蛋雞日糧嚴(yán)格禁止使用各類(lèi)抗生素添加劑，以保障禽蛋食品安全（吳萍等，2014；楊蕊，2014；習(xí)欠云等，2015）。然而，蛋雞也是我國(guó)集約化養(yǎng)殖程度最高的畜牧產(chǎn)業(yè)之一，長(zhǎng)期高產(chǎn)蛋雞面臨雜糧、雜粕、高鈣、高磷、霉菌毒素、養(yǎng)殖環(huán)境等諸多應(yīng)激，如何保障蛋雞生產(chǎn)性能及蛋品質(zhì)，一直是營(yíng)養(yǎng)學(xué)家及飼料、養(yǎng)殖企業(yè)不斷探索和追求的目標(biāo)。我國(guó)新版《飼料添加劑品種目錄（2013）》規(guī)范了34種飼用微生態(tài)制劑，而上一版《飼料添加劑品種目錄（2008）》規(guī)范了16種微生態(tài)制劑，充分說(shuō)明：微生態(tài)制劑是我國(guó)安全、高效飼料添加劑的主要發(fā)展方向之一（刁其玉，2014；羅正，2014；王欣等，2014）。大量生產(chǎn)實(shí)踐也證明了飼用微生態(tài)制劑（益生菌）在蛋雞養(yǎng)殖中的應(yīng)用效果（聶金梅，2014；賈久滿(mǎn)等，2015；王翔宇等，2015）。

2013年12月，飼用凝結(jié)芽孢桿菌（Bacillus coagu?lans）正式列入新版《飼料添加劑品種目錄（2013）》，適用于豬、肉雞、水產(chǎn)動(dòng)物。最近的部分研究報(bào)道顯示：日糧添加飼用凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)改善豬（李國(guó)建,2004；翟振亞等，2015）、肉雞（宮秀燕等，2015）及多種水產(chǎn)動(dòng)物（張維娜等，2015；汪波等，2015）的生產(chǎn)性能具有一定的效果。因此，飼用凝結(jié)芽孢桿菌成為近2年來(lái)我國(guó)市場(chǎng)最受關(guān)注的飼用微生態(tài)制劑產(chǎn)品之一（Riazi等，2009；謝麗曲等，2013；趙樹(shù)平等，2014）。

然而，迄今為止沒(méi)有飼用凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能影響的科學(xué)報(bào)道。為促進(jìn)飼用凝結(jié)芽孢桿菌這一新型微生態(tài)制劑在蛋雞養(yǎng)殖領(lǐng)域的推廣，本試驗(yàn)初步研究日糧添加凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能的作用效果。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

1 200只產(chǎn)蛋高峰期新羅曼蛋雞（35周齡）分為4個(gè)處理組，即對(duì)照組和3個(gè)試驗(yàn)組。每個(gè)處理組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)50只。

1.2 飼用凝結(jié)芽孢桿菌制劑

飼用凝結(jié)芽孢桿菌制劑（50×108CFU/g）由昆明三正生物科技集團(tuán)有限公司提供。

1.3 試驗(yàn)日糧

蛋雞試驗(yàn)日糧參考《雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)(NY/T 33—2004)》，并結(jié)合蛋雞品種和飼料市場(chǎng)實(shí)際應(yīng)用情況，基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。試驗(yàn)飼料為粉料。對(duì)照組不添加飼用凝結(jié)芽孢桿菌，試驗(yàn)1～3組預(yù)混料中飼用凝結(jié)芽孢桿菌制劑分別添加60、150、200 g/t（全價(jià)配合飼料）。

表1 試驗(yàn)基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平

1.4 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)蛋雞籠養(yǎng)，自由采食、飲水，專(zhuān)人負(fù)責(zé)飼養(yǎng)記錄。預(yù)飼期7 d，正試期從蛋雞36周齡至43周齡，共56 d。

1.5 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.5.1 產(chǎn)蛋性能

正式試驗(yàn)期間每天記錄采食量、產(chǎn)蛋數(shù)、蛋重，以處理組為單位統(tǒng)計(jì)平均日采食量、平均蛋重、產(chǎn)蛋率、料蛋比。用蛋殼厚度測(cè)定儀測(cè)定蛋殼厚度。

統(tǒng)計(jì)試驗(yàn)全期的破蛋數(shù)量，包括：破殼蛋、薄殼蛋，計(jì)算破蛋率。

統(tǒng)計(jì)試驗(yàn)全期的次蛋數(shù)量，包括：沙殼蛋、陰陽(yáng)蛋、水印蛋，計(jì)算次蛋率。

總不合格蛋率（%）=破蛋率（%）+次蛋率（%）。

1.5.2 代謝試驗(yàn)

蛋雞對(duì)試驗(yàn)日糧氮、磷表觀代謝率的研究采用全收糞法。產(chǎn)蛋期第39周開(kāi)始，從每個(gè)處理組選擇健康、體重相近的10只蛋雞，單籠飼養(yǎng)。記錄每組雞每天采食量，收集糞樣，預(yù)飼期7 d后進(jìn)入正試期后，連續(xù)收集6 d樣品。按照飼料常規(guī)分析方法測(cè)定飼料、糞便中氮和磷的含量，計(jì)算表觀代謝率（程志斌等，2012a）。

1.5.3 血液生化指標(biāo)

在代謝試驗(yàn)的第4 d，參與代謝試驗(yàn)的蛋雞采集血樣。使用全自動(dòng)生化分析儀（Olympus Au 600型）測(cè)定主要血液生化指標(biāo)，分析測(cè)定在云南省動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料科學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室完成。

1.6 統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，使用SAS統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)處理組間進(jìn)行多重比較分析，數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)顯著性均表示為P＜0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 飼用凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能的影響（見(jiàn)表2）

表2 飼用凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能的影響

表2結(jié)果顯示，料蛋比指標(biāo)：試驗(yàn)1組和2組比對(duì)照組分別降低2.91%和3.40%，雖有改善的趨勢(shì)（P＜0.1），但統(tǒng)計(jì)差異不顯著（P＞0.05）；試驗(yàn)3組料蛋比顯著優(yōu)于對(duì)照組（P＜0.05）。破蛋率指標(biāo)，四個(gè)處理組之間統(tǒng)計(jì)差異不顯著（P＞0.05）。然而，次蛋率和總不合格蛋率2個(gè)指標(biāo)，日糧添加飼用凝結(jié)芽孢桿菌的試驗(yàn)1～3組顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）。

2.2 飼用凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)蛋雞血液生化指標(biāo)的影響（見(jiàn)表3）

表3 飼用凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)蛋雞血液生化指標(biāo)的影響

表3結(jié)果顯示，試驗(yàn)1～3組蛋雞血液白蛋白含量顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）。尿素氮指標(biāo)：試驗(yàn)1組和2組比對(duì)照組分別降低7.2%和8.8%，但統(tǒng)計(jì)差異不顯著（P＞0.05）；試驗(yàn)3組蛋雞尿素氮含量顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）。

2.3 飼用凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)蛋雞氮、磷代謝率的影響（見(jiàn)表4）

表4 飼用凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)蛋雞氮、磷代謝率的影響(風(fēng)干基礎(chǔ)，%)

表4結(jié)果顯示：日糧氮表觀代謝率指標(biāo)，試驗(yàn)1組和2組比對(duì)照組分別提高4.8%和6.1%，但統(tǒng)計(jì)差異不顯著（P＞0.05）；試驗(yàn)3組顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）。總磷表觀代謝率指標(biāo)，四個(gè)處理組之間統(tǒng)計(jì)無(wú)顯著差異（P＞0.05）。

3 討論

關(guān)于凝結(jié)芽孢桿菌的最早記錄見(jiàn)于Hammer(1915)發(fā)表的論文。1932年科學(xué)家Horowitz-Wlassowa和Nowotelnow在其發(fā)表的科學(xué)文獻(xiàn)中首次使用了“孢子乳桿菌”（Lactobacillus sporogenes）來(lái)描述凝結(jié)芽孢桿菌（Riazi等，2009）。由于這種菌能產(chǎn)生高濃度的L-乳酸和一種抗菌肽類(lèi)物質(zhì)（凝結(jié)素），1980年學(xué)術(shù)界統(tǒng)一規(guī)范命名為“凝結(jié)芽孢桿菌”，其模式菌株為ATCC（美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心）7050（Riazi等，2009）。隨著研究的深入，微生物學(xué)界發(fā)現(xiàn)凝結(jié)芽孢桿菌廣泛分布在自然界中，可以應(yīng)用于食品、醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)等諸多領(lǐng)域。高書(shū)鋒等（2012）在健康豬的腸道中分離出了一株凝結(jié)芽孢桿菌。孫娜新等（2014）在健康雞的糞便中也發(fā)現(xiàn)了凝結(jié)芽孢桿菌，因此凝結(jié)芽孢桿菌也可以看成一種“腸道內(nèi)源有孢子乳酸菌”，適合飼料工業(yè)與畜牧業(yè)應(yīng)用（高書(shū)鋒等，2012；孫娜新等，2014）。美國(guó)FDA于1989年最早將凝結(jié)芽孢桿菌認(rèn)定為安全的飼用微生態(tài)制劑，應(yīng)用于飼料工業(yè)與養(yǎng)殖業(yè)（謝麗曲等，2013；趙樹(shù)平等，2014）。我國(guó)農(nóng)業(yè)部2013年12月公布的新版《飼料添加劑品種目錄（2013）》認(rèn)定凝結(jié)芽孢桿菌正式可以應(yīng)用于豬、肉雞、水產(chǎn)動(dòng)物3類(lèi)動(dòng)物。

按照生物分類(lèi)學(xué)劃分，凝結(jié)芽孢桿菌屬于芽孢桿菌屬，具備一切芽孢桿菌的優(yōu)勢(shì)，包括：耐熱性、耐胃酸、耐膽鹽等抗逆性?xún)?yōu)良，產(chǎn)多種水解酶類(lèi)、抗菌肽（凝結(jié)素）等，尤其適合制粒加工。而且，由于凝結(jié)芽孢桿菌能分泌L-乳酸，因此凝結(jié)芽孢桿菌也屬于乳酸菌類(lèi)，具備良好的抑菌、殺菌作用，能夠高效調(diào)控畜禽腸道菌群平衡（Zhou等，2010；謝麗曲等，2013；趙樹(shù)平等，2014）。由此可見(jiàn)，凝結(jié)芽孢桿菌具備了芽孢桿菌屬與乳酸菌類(lèi)的雙重優(yōu)勢(shì)。大量科學(xué)試驗(yàn)報(bào)道顯示（李國(guó)建,2004；Zhou等，2010；宮秀燕等，2015；汪波等，2015；翟振亞等，2015；張維娜等，2015）：飼用凝結(jié)芽孢桿菌能夠顯著改善仔豬、肉雞及多種水產(chǎn)動(dòng)物生產(chǎn)性能。然而，迄今為止國(guó)內(nèi)沒(méi)有關(guān)于飼用凝結(jié)芽孢桿菌在蛋雞領(lǐng)域的科學(xué)報(bào)道。本試驗(yàn)初步研究日糧添加凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能的作用效果，彌補(bǔ)這一應(yīng)用領(lǐng)域的空白。

本試驗(yàn)的試驗(yàn)1～3組蛋雞飼料中分別添加60、150、200 g/t（全價(jià)配合飼料）凝結(jié)芽孢桿菌制劑，根據(jù)本試驗(yàn)使用的凝結(jié)芽孢桿菌制劑50×108CFU/g折算，試驗(yàn)1～3組蛋雞日糧含有凝結(jié)芽孢桿菌分別為0.30×106、0.75×106、1.00×106CFU/g（全價(jià)配合飼料）。表2試驗(yàn)結(jié)果顯示：料蛋比指標(biāo)，試驗(yàn)1～3組分別比對(duì)照組降低 2.91%（P＞0.05）、3.40%（P＞0.05）、4.37%（P＜0.05）。采食量、蛋重、產(chǎn)蛋率、蛋殼厚度、蛋殼占蛋重比等指標(biāo)，四個(gè)處理組之間統(tǒng)計(jì)差異不顯著（P＞0.05）。以上結(jié)果說(shuō)明：飼用凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)蛋雞產(chǎn)蛋性能有一定改善作用，主要表現(xiàn)在料蛋比的改善。進(jìn)一步研究蛋雞對(duì)日糧氮代謝率發(fā)現(xiàn)（見(jiàn)表4），試驗(yàn)1～3組氮表觀代謝率分別比對(duì)照組提高4.8%（P＞0.05）、6.1%（P＞0.05）、6.9%（P＜0.05）。這一結(jié)果與料蛋比數(shù)據(jù)相符。綜合以上研究結(jié)果表明，飼用凝結(jié)芽孢桿菌定植腸道增強(qiáng)了蛋雞對(duì)飼料營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、尤其是蛋白質(zhì)的消化利用。

為了解釋以上研究結(jié)果，我們檢測(cè)了蛋雞血液蛋白代謝相關(guān)指標(biāo)。尿素氮指標(biāo)顯示（見(jiàn)表3）：試驗(yàn)1組和2組無(wú)顯著差異（P＞0.05），比對(duì)照組分別降低7.2%和8.8%，但統(tǒng)計(jì)差異不顯著（P＞0.05）；試驗(yàn)3組蛋雞尿素氮含量顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）。尿酸是禽類(lèi)動(dòng)物體內(nèi)氨基酸及核苷酸等含氮化合物代謝的終產(chǎn)物；也是禽類(lèi)動(dòng)物排出體內(nèi)多余氨，維持機(jī)體正常機(jī)能的重要方式之一（程志斌等，2012b）。日糧粗蛋白水平、日糧氨基酸平衡狀況、家禽的生理代謝、健康狀況等多種因素，綜合影響家禽尿酸濃度。一般認(rèn)為，較低尿酸濃度表征家禽對(duì)飼料蛋白質(zhì)和氨基酸的良好代謝利用，有利于家禽的生產(chǎn)性能（程志斌等，2012b）。因此，我們推斷飼用凝結(jié)芽孢桿菌改善蛋雞產(chǎn)蛋性能的作用機(jī)理可能包括：其一，分泌蛋白水解酶等多種消化酶類(lèi)，輔助腸道消化；其二，在增強(qiáng)腸道消化能力的基礎(chǔ)上，維護(hù)長(zhǎng)期高產(chǎn)蛋雞腸道的完整性，增強(qiáng)氨基酸、肽類(lèi)等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用。

本試驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)，雖然蛋殼厚度和破蛋率2個(gè)指標(biāo)，4個(gè)處理組之間統(tǒng)計(jì)差異不顯著（P＞0.05）；然而，次蛋率和總不合格蛋率2個(gè)指標(biāo)，日糧添加了飼用凝結(jié)芽孢桿菌的試驗(yàn)1～3組顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）。進(jìn)一步研究試驗(yàn)蛋雞對(duì)日糧磷代謝率發(fā)現(xiàn)（見(jiàn)表4），雖然日糧磷表觀代謝率指標(biāo)4個(gè)處理組之間統(tǒng)計(jì)無(wú)顯著差異（P＞0.05），但總磷表觀代謝率隨著飼用凝結(jié)芽孢桿菌添加量的增加，有提高改善的趨勢(shì)。破蛋是指破殼蛋、薄殼蛋，次蛋主要包括沙殼蛋、陰陽(yáng)蛋、水印蛋等，產(chǎn)生的主要原因是鈣、磷營(yíng)養(yǎng)元素在腸道吸收問(wèn)題及蛋殼在生殖道的生成問(wèn)題。這兩類(lèi)總不合格蛋給實(shí)際蛋雞養(yǎng)殖生產(chǎn)的經(jīng)濟(jì)效益造成較大的隱性損失。然而，一般的科學(xué)文獻(xiàn)報(bào)道和試驗(yàn)只有破殼蛋的數(shù)據(jù)，總是忽視沙殼蛋、陰陽(yáng)蛋、水印蛋等次蛋的研究與數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)。恰恰對(duì)于我國(guó)集約化高密集養(yǎng)殖的蛋雞產(chǎn)業(yè)來(lái)說(shuō)，長(zhǎng)期高產(chǎn)、飼料原料（雜糧、雜粕、高鈣、高磷、霉菌毒素）、不良養(yǎng)殖環(huán)境等因素，均會(huì)破壞蛋雞腸道完整性，從而直接影響蛋雞生殖道健康，導(dǎo)致養(yǎng)殖生產(chǎn)實(shí)際中沙殼蛋、陰陽(yáng)蛋、水印蛋等不合格蛋十分普遍。

本試驗(yàn)首次發(fā)現(xiàn)飼用凝結(jié)芽孢桿菌顯著降低了高峰期蛋雞產(chǎn)劣質(zhì)蛋的幾率，結(jié)合飼用凝結(jié)芽孢桿菌的理化特性，其作用機(jī)理可能包括：其一，凝結(jié)芽孢桿菌發(fā)揮了乳酸菌類(lèi)益生菌的優(yōu)勢(shì)，通過(guò)分泌L-乳酸、凝結(jié)素等活性物質(zhì)，直接抑菌、殺菌，降低了有害菌對(duì)腸道的危害。其二，凝結(jié)芽孢桿菌發(fā)揮了芽孢桿菌屬益生菌的優(yōu)勢(shì)，通過(guò)定植腸道的占位原理，降低有害菌對(duì)腸道的危害；其三，凝結(jié)芽孢桿菌維護(hù)了長(zhǎng)期高產(chǎn)蛋雞腸道組織結(jié)構(gòu)的完整性，降低有害菌通過(guò)損傷的腸黏膜入侵機(jī)體內(nèi)環(huán)境。由于本試驗(yàn)使用產(chǎn)蛋高峰期蛋雞、飼料原料中雜粕較少，且使用了植酸酶，因此可以推測(cè)：由于薄殼蛋、軟蛋、沙殼蛋、陰陽(yáng)蛋、水印蛋等更易發(fā)生在產(chǎn)蛋后期，飼用凝結(jié)芽孢桿菌改善產(chǎn)蛋后期蛋雞的蛋品質(zhì)效果將更顯著。當(dāng)然，這一推測(cè)尚待我們進(jìn)一步試驗(yàn)驗(yàn)證。

此外，大量研究顯示（Ringo等，2010；Zhou等，2010；刁其玉，2014），一般的飼用微生態(tài)制劑進(jìn)入腸道發(fā)揮調(diào)控菌群、改善畜禽生產(chǎn)性能的有效劑量是106～107CFU/g，本試驗(yàn)同時(shí)證明，飼用凝結(jié)芽孢桿菌能夠在較低劑量發(fā)揮良好的作用效果，這可能與凝結(jié)芽孢桿菌多種優(yōu)勢(shì)有關(guān)，包括：良好的抗逆性、腸道定植穩(wěn)定、產(chǎn)抗菌肽凝結(jié)素等有關(guān)。這一結(jié)果與曾麗莉等（2015）報(bào)道低劑量飼用凝結(jié)芽孢桿菌在鴨上的良好應(yīng)用效果一致。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，日糧中添加0.30×106～1.00×106CFU/g（全價(jià)配合飼料）飼用凝結(jié)芽孢桿菌，對(duì)改善蛋雞生產(chǎn)性能有一定效果，主要表現(xiàn)在料蛋比指標(biāo)。且飼用凝結(jié)芽孢桿菌顯著降低蛋雞產(chǎn)劣質(zhì)蛋的幾率，十分適合應(yīng)用于蛋雞飼料及蛋雞養(yǎng)殖生產(chǎn)。