■葉 滔 楊靜美 閆 凱 劉櫞利 代珍青 逯佩鳳 周玉巖

（1.廣東海納川生物科技股份有限公司，廣東佛山 528515；2.仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院，廣東廣州 510225）

抗菌肽（antibacterial peptides）又稱(chēng)抗微生物肽（antimicrobial peptides，AMPs），是多種生物產(chǎn)生具有天然免疫反應(yīng)的生物活性分子，通過(guò)入侵病原微生物發(fā)揮細(xì)胞宿主防御作用[1]?？咕木哂袕V譜抗菌活性、低毒和低耐藥性，同時(shí)作為高等生物免疫調(diào)節(jié)劑被認(rèn)為是一種未來(lái)具有前途和潛在的候選藥物，屬于環(huán)保型抗生素[2]。除抗微生物活性功能外，抗菌肽還作為藥物傳遞載體、抗腫瘤劑、促有絲分裂劑、避孕劑、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子以及飼料添加劑[3]。

菌絲霉素（Plectasin）是Mygind等研究小組于2005年通過(guò)篩查腐生子囊菌(Pseudoplectania nigrella)分泌蛋白的cDNA庫(kù)，從中找出一些與無(wú)脊柱動(dòng)物防御素序列高度相似的片段，并篩選分離出來(lái)的首例真菌防御素[4]。目前，抗菌肽類(lèi)防御素研究進(jìn)展一直緩慢，其主要障礙就是它們?cè)诖笠?guī)模生產(chǎn)時(shí)成本過(guò)于高昂。而Plectasin的發(fā)現(xiàn)打破了一直局限在高等生物如哺乳動(dòng)物、昆蟲(chóng)和植物中分離防御素的現(xiàn)狀，將防御素的來(lái)源拓展到具有廣闊開(kāi)發(fā)前景的低等生物真菌中，從真菌中提取防御素獲得成功，必將大幅降低防御素類(lèi)抗菌藥物的研究和生產(chǎn)成本，從而加速這類(lèi)新型抗菌藥物的開(kāi)發(fā)和應(yīng)用具有重要意義[5]?？咕木哂袕V泛的應(yīng)用前景，但是由于它自身的特點(diǎn)，與其他輔料混合、造粒過(guò)程中容易受多種微量元素、酸堿、外源蛋白酶的影響極大，同時(shí)造粒過(guò)程瞬時(shí)高溫也會(huì)影響其生物活性；另外，抗菌肽易溶于水，大大降低其預(yù)防和治療活性。

為了更好地提高抗菌肽菌絲霉素的穩(wěn)定性，同時(shí)利用現(xiàn)有的多肽制備技術(shù)將其制成腸溶包衣制劑、膠囊、微丸、微乳、脂質(zhì)體、微粒、納米粒等劑型，但是微乳、復(fù)乳制劑在包封率與穩(wěn)定性方面較差，無(wú)法滿足抗菌肽的包封需求；而脂質(zhì)體由于用藥量大、包封率低、穩(wěn)定性差等缺點(diǎn)，不能滿足抗菌肽制劑的制備要求；而腸溶包衣制劑、微粒、微囊和納米粒又存在制備工藝復(fù)雜，成本較高，難以實(shí)現(xiàn)大規(guī)?；a(chǎn)已及不適合抗菌肽制劑的制備[6]。因此，本研究旨在研制一種抗菌肽菌絲霉素成膜劑，以及對(duì)該成膜劑膜性能進(jìn)行研究，解決現(xiàn)有抗菌肽制劑制備方法包封率低、穩(wěn)定性差及成本高的問(wèn)題，為此類(lèi)獸藥制劑的研究提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

BMGY培養(yǎng)基：酵母提取物10 g、蛋白胨20 g，定容至700 ml，121℃高壓蒸汽滅菌20 min后，添加滅菌的10%甘油100 ml，13.4%無(wú)氨基酸酵母氮源（YNB）100 ml，0.02%生物素2 ml，1 mol/l磷酸緩沖液（pH值6.0）100 ml。

BMMY培養(yǎng)基：酵母提取物10 g、蛋白胨20 g，定容至700 ml，121℃高壓蒸汽滅菌20 min后，添加滅菌的5%甲醇100 ml，13.4%無(wú)氨基酸酵母氮源(YNB)100 ml，0.02%生物素 2 ml、1 mol/l、磷酸緩沖液(pH值6.0)100 ml。

羧甲基纖維素鈉（CMC-Na）、95%乙醇購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；Tween-80購(gòu)自上海圓創(chuàng)生物科技有限公司；熒光素鈉、氮酮（Azone）、聚乙烯醇（PVA）均購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；無(wú)水氯化鈣（CaCl2）、NaNO2購(gòu)自天津市永大化學(xué)試劑有限公司；甘油購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.2 方法

1.2.1 重組抗菌肽Plectasin的酵母表達(dá)[7]

將重組抗菌肽Plectasin酵母陽(yáng)性轉(zhuǎn)化子接種于含 BMGY（含 Zeocin 500 μg/ml）培養(yǎng)基的試管中，30℃、220 r/min搖床培養(yǎng)24 h。將部分菌液轉(zhuǎn)移至BMMY誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，30℃、220 r/min繼續(xù)培養(yǎng)，每24 h補(bǔ)加1%的含量100%甲醇。共培養(yǎng)120 h。

1.2.2 成膜劑組方的優(yōu)化

PVA劑量篩選：稱(chēng)取PVA重量為0、1、2、3、4、5 g共6組，分別加入100 ml菌絲霉素溶液充分?jǐn)嚢瑁蛊涑浞秩苊?8 h，然后95℃恒溫水浴使其充分溶解，將溶液用40目鋼篩過(guò)濾。每組取3次，每次取2 ml溶液，均勻涂抹在3×4 cm2兔腹部，記錄每組成膜時(shí)間與外觀質(zhì)量進(jìn)行評(píng)估。設(shè)PVA的最適濃度為A。

Tween-80劑量選擇：選取PVA最適濃度A，按照成膜劑配方方法，采用單因素方法對(duì)成膜時(shí)間及外觀質(zhì)量影響進(jìn)行檢測(cè)。選取Tween-80不同用量范圍，取最適范圍。量取含PVA濃度為A的菌絲霉素溶液3組（每組50ml），依次加入0.5、0.75、1.0 ml的Tween-80，40℃水浴攪勻，靜置常溫，然后加入4.33 ml Azone，攪勻即可。取2 ml混合液均勻涂抹于3×4 cm2兔腹部，評(píng)估每組成膜時(shí)間與外觀質(zhì)量。選取Tween-80用量為B ml，再量取含PVA菌絲霉素溶液分為四組，每組50 ml，依次加入Tween-80（B-0.10）ml、（B-0.05）ml、（B+0.05）ml和（B+0.10）ml，處理方法同上，評(píng)估每組成膜時(shí)間與外觀質(zhì)量，選最好組Tween-80用量為C ml。

甘油劑量選擇：選取PVA最適濃度A的菌絲霉素溶液5組（每組100 ml），依次加入Tween-80 C ml，40 ℃水浴攪勻，再依次加入0、2.5、5、7.5、10 ml的甘油，然后放入40℃水浴攪勻，靜置至常溫，加入4.33 ml Azone，攪勻即可。取2 ml混合溶液，均勻涂抹于3×4 cm2兔腹部，評(píng)估每組成膜時(shí)間與外觀質(zhì)量。選取甘油的用量為D ml，取含PVA的菌絲霉素溶液分為4組（每組50 ml），將其依次加入Tween-80 C ml，放置40 ℃水浴攪勻，再依次加入甘油（D-1.0）、（D-2.0）、（D-3.0）ml和（D-4.0）ml，處理同上，評(píng)估每組成膜時(shí)間與外觀質(zhì)量。選最好組甘油用量為E ml。

CMC-Na劑量篩選：一般CMC-Na的濃度在1%～2%之間時(shí)作為凝膠劑。由上述PVP、Tween-80、甘油劑量選擇試驗(yàn)得出的試驗(yàn)結(jié)果配制5組溶液（每組50 ml），將其放入55℃水浴鍋中預(yù)熱，分別加入1.0%、1.1%、1.2%、1.3%、1.4%、1.5%、1.6%、1.7%、1.8%、1.9%和2.0%的CMC-Na并用無(wú)水乙醇浸潤(rùn)，攪拌至充分溶解。取2 ml溶液，均勻涂抹于3×4 cm2兔腹部，評(píng)估每組成膜時(shí)間與外觀質(zhì)量。選最好組CMC-Na劑量Fml。

正交試驗(yàn)選擇最佳配方：選取L9(34)正交試驗(yàn)，將成膜時(shí)間與外觀質(zhì)量作為評(píng)價(jià)。對(duì)Tween-80、甘油和CMC-Na三個(gè)因素進(jìn)行正交試驗(yàn)因素與水平篩選（見(jiàn)表1），按正交試驗(yàn)選取最佳劑量。

1.2.3 膜劑性能研究

膜劑黏附力試驗(yàn)：黏附力的大小決定了藥物的吸收，以及藥物的作用時(shí)間[8]。根據(jù)正交試驗(yàn)篩選的最佳組合，配制3組菌絲霉素成膜劑，每組試驗(yàn)重復(fù)3次，分別將9組藥液均勻涂在3×4 cm2兔腹部。其中待成膜完全后，將靠近兔腹內(nèi)側(cè)一端膜掀起大約0.5 cm，用夾子夾住下方，夾子上系一塑料袋，用橡膠導(dǎo)管向塑料袋中勻速滴加水，直到膜破裂為止，記錄水的重量。

表1 正交試驗(yàn)因素與水平篩選

膜劑透氣性試驗(yàn)：將菌絲霉素成膜劑均勻涂抹在6×6 cm2兔腹部，待成膜完全后，整張取下，選取膜（厚度為0.1～0.2 μm）進(jìn)行試驗(yàn)。將5 g無(wú)水CaCl2放入透氣裝置中，用藥膜將瓶口密封（瓶?jī)?nèi)含飽和NaNO2溶液），放入RH≥65%，37℃的恒溫箱中。每小時(shí)記錄1次稱(chēng)量。其中透氣裝置的重量（g）將隨時(shí)間變化，反映出水蒸氣在藥膜表面的透過(guò)率。以質(zhì)量變化與時(shí)間的關(guān)系求出斜率，并根據(jù)Q公式求出薄膜的透氣量：Q=（S/A）[g/（h·m2）]。式中：S為直線的斜率，A為試樣的測(cè)試面積。

線性關(guān)系的考察：將蛋白標(biāo)準(zhǔn)品用蒸餾水稀釋?zhuān)謩e配制濃度為0、1.67、3.34、5.01、6.68、10.02、13.36 μg/ml和 16.7 μg/ml溶液。測(cè)定吸收值 A595nm，以吸收值為縱坐標(biāo)，蛋白標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μg/ml）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

膜劑釋藥性試驗(yàn)：用生理鹽水填充皮下內(nèi)環(huán)境，將釋藥裝置放入37℃水浴鍋中，在兔皮表面3×4 cm2面積上均勻涂2 ml藥液，每隔0.5 h在取藥口吸取5 ml液體，再用5 ml生理鹽水補(bǔ)充。將吸出溶液注入比色皿中，于λ=595 nm處進(jìn)行紫外掃描，根據(jù)試驗(yàn)線性方程計(jì)算釋藥濃度。

1.2.4 藥物的皮膚、黏膜刺激性試驗(yàn)

1.2.4.1 皮膚刺激性試驗(yàn)

選取月齡3～4個(gè)月的健康兔子12只，雌、雄各半，用脫毛器將兔子背腹部進(jìn)行脫毛。然后將兔子隨機(jī)分為2組，每組6只。其中，完整性皮膚刺激試驗(yàn)：將兔子背部?jī)蓚?cè)脫毛；損傷性皮膚刺激試驗(yàn)：將兔子背部?jī)蓚?cè)脫毛，進(jìn)行皮膚消毒后，用無(wú)菌注射器針頭呈“#”字形劃破左右兩側(cè)皮膚，使皮膚出現(xiàn)滲血，破損區(qū)面積3×3 cm2，劃痕間距0.5 cm。在家兔右側(cè)脫毛區(qū)每隔12 h給藥一次，每次1 ml，每次給藥均勻覆蓋。左側(cè)噴生理鹽水1 ml為陰性對(duì)照。

①單次給藥試驗(yàn)：首次給藥12 h后去除藥物，肉眼觀察30～60 min、24 h、48 h和72 h涂敷部位有無(wú)紅斑和水腫等情況。

②多次給藥試驗(yàn)：每次去除藥物后1 h及再次貼敷前觀察涂敷部位是否有紅斑、水腫、色素沉著、出血點(diǎn)、皮膚粗糙或皮膚菲薄情況及其發(fā)生和消退時(shí)間。連續(xù)用藥7 d，末次貼敷后，在去除藥物后30～60 min、24 h、48 h和72 h肉眼觀察涂敷部位有無(wú)紅斑和水腫等情況。

1.2.4.2 黏膜刺激性試驗(yàn)

首選家兔6只，隨機(jī)分為2組，每組3只。試驗(yàn)前24 h內(nèi)對(duì)每只動(dòng)物的雙眼進(jìn)行檢查（使用熒光素鈉檢查）。有眼睛刺激癥狀、角膜缺陷和結(jié)膜損傷的動(dòng)物不能用于試驗(yàn)。試驗(yàn)采用同體左右側(cè)自身對(duì)比法。試驗(yàn)組每只眼睛上100 mg的防止奶牛乳房炎菌絲霉素成膜劑，然后輕合眼瞼約10 s，不需沖洗眼睛；對(duì)照組每只眼睛滴入同劑量的生理鹽水。

單次給藥眼刺激試驗(yàn)，在給藥后1、2、4、24、48 h和72 h對(duì)眼部進(jìn)行檢查，也可根據(jù)受試物的特點(diǎn)適當(dāng)調(diào)整觀察時(shí)間。

1.2.5 臨床應(yīng)用試驗(yàn)

試驗(yàn)動(dòng)物與分組：選取年齡4～6歲、產(chǎn)后3～5個(gè)月的奶牛，采用CMT法篩選20頭健康奶牛和20頭隱性乳房炎奶牛進(jìn)行試驗(yàn)。治療組：隱形性奶牛乳房炎20頭，分為兩組，試驗(yàn)組10頭用試驗(yàn)藥物，對(duì)照組10頭用乳寶Ⅰ號(hào)；預(yù)防組：健康奶牛20頭，分為兩組，試驗(yàn)組10頭用試驗(yàn)藥物，對(duì)照組10頭用乳寶Ⅰ號(hào)。

試驗(yàn)藥物：防治奶牛乳房炎菌絲霉素成膜劑；乳寶Ⅰ號(hào)，西安漢隆化工科技有限公司（批號(hào)120415），5 L/桶。

治療方案：治療組和預(yù)防組在用藥前先用溫水清洗病牛乳區(qū)，用干毛巾擦干后，每個(gè)乳區(qū)涂抹防治奶牛乳房炎成膜劑5 g左右，2次/d，7 d為一個(gè)療程。對(duì)照組用乳寶一號(hào)藥浴，2次/d，7 d為一個(gè)療程。分別在0、3、5、7 d采乳樣，對(duì)乳樣進(jìn)行全乳分析。最后根據(jù)體細(xì)胞數(shù)計(jì)算奶牛隱性乳房炎治愈率及奶牛乳房炎的預(yù)防率。

1.2.6 數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)利用SPSS17.0軟件進(jìn)行分析。

2 結(jié)果

2.1 成膜劑組方的優(yōu)化

PVA劑量篩選：當(dāng)PVA濃度為5%時(shí)，成膜性好。

Tween-80劑量選擇：當(dāng)Tween-80用量為0.7 ml，評(píng)價(jià)最高，Tween-80的最適用量范圍為0.6～0.8 ml（按體積分?jǐn)?shù)為1.4%～1.6%）。

甘油劑量選擇：甘油用量為7.0 ml，評(píng)價(jià)最高，甘油的最適用量范圍為6.0～8.0 ml（按體積分?jǐn)?shù)為6%～8%）。

CMC-Na劑量篩選：CMC-Na的用量為2%，評(píng)價(jià)最高。即CMC-Na的最適用量范圍按質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.9%～2.1%。

正交試驗(yàn)選擇最佳配方：按照表1的方案選取L9(34)正交試驗(yàn)，將成膜時(shí)間與外觀質(zhì)量作為評(píng)價(jià)。對(duì)Tween-80、甘油和CMC-Na三個(gè)因素進(jìn)行正交試驗(yàn)因素與水平篩選（見(jiàn)表2），按正交試驗(yàn)選取最佳劑量。

表2 正交試驗(yàn)結(jié)果

由表2結(jié)果顯示：因素c的影響較大，因素b次之，各因素的最優(yōu)組合初步確定為a2b2c3，即按體積分?jǐn)?shù)比為甘油占7%、Tween-80占1.5%及CMC-Na占2.1%。

2.2 膜劑性能研究

膜劑黏附力試驗(yàn)：根據(jù)正交試驗(yàn)篩選的最佳組合，選取3組菌絲霉素成膜劑，分別將9組藥液均勻涂布在3×4 cm2兔的腹部成膜，然后將靠近兔腹內(nèi)側(cè)一端膜折疊0.5 cm，用夾子夾一塑料袋并用橡膠管向塑料袋中勻速滴水，直至膜破裂為止，試驗(yàn)重復(fù)3次，記錄重量。結(jié)果顯示：該菌絲霉素成膜劑膜黏附力范圍為153.41～230.36 g，即該藥的吸收和作用時(shí)間都較長(zhǎng)。

膜劑透氣性試驗(yàn)：將菌絲霉素成膜劑均勻涂布于6×6 cm2兔腹部成膜，然后選取厚度0.1～0.2 μm的膜進(jìn)行試驗(yàn)。將6 g無(wú)水CaCl2放入透氣裝置中，用藥膜將瓶口密封置于（RH≥75%、37℃）恒溫箱中，每小時(shí)稱(chēng)量1次。以質(zhì)量變化與時(shí)間之間的關(guān)系求出斜率，并根據(jù)Q公式求出薄膜的透氣量Q=（S/A）[g/（h·m2）]，式中：S為直線的斜率；A為試樣的測(cè)試面積。結(jié)果顯示（見(jiàn)表3）：以時(shí)間為橫坐標(biāo)，質(zhì)量變化為縱坐標(biāo)，所得標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.004 9x+0.000 1，R2=0.999 9，在0～4 h內(nèi)具有良好的線性關(guān)系（見(jiàn)圖1）。這說(shuō)明透氣裝置隨著時(shí)間重量發(fā)生變化的速率，反映了水蒸氣在藥物膜中的透過(guò)速率。

表3 透氣性試驗(yàn)結(jié)果

根據(jù)線性回歸方程得到直線斜率為0.004 9。由斜率與透氣量的計(jì)算公式得出膜的透氣率，由表3可知，膜劑的平均透氣率范圍7.45～9.05 g/(h·m2)。

圖1 透氣性試驗(yàn)質(zhì)量變化與時(shí)間的關(guān)系

線性關(guān)系的考察：將牛血清蛋白標(biāo)準(zhǔn)品用蒸餾水稀釋成濃度為10、20、30、40、60、80 μg/ml和100 μg/ml溶液。測(cè)定吸收值A(chǔ)595nm，以吸收值為縱坐標(biāo)，蛋白標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。試驗(yàn)結(jié)果顯示：以蛋白濃度為橫坐標(biāo)，吸光值變化為縱坐標(biāo)，所得標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.006 9x+0.041 9，R2=0.998 3，在10～100 μg/ml內(nèi)具有良好的線性關(guān)系(見(jiàn)圖2)。

膜劑釋藥試驗(yàn)：用生理鹽水填充兔皮下內(nèi)環(huán)境，然后將釋藥裝置放置37℃水浴鍋中，將2 ml藥液均勻涂在兔皮3×4 cm2表面上，每隔1/2 h從取藥口吸取5 ml液體，再用5 ml生理鹽水補(bǔ)充。將吸出的液體注入石英比色皿中，測(cè)定吸光度A595nm，由試驗(yàn)（3）中線性方程計(jì)算膜劑的釋藥濃度。結(jié)果表明：膜劑釋藥量隨時(shí)間逐漸遞增，在300 min之后該膜劑釋藥量達(dá)到平衡(見(jiàn)圖3)。

圖2 吸光值與蛋白標(biāo)準(zhǔn)品濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖3 菌絲霉素成膜劑的釋藥曲線

2.3 藥物皮膚、黏膜刺激試驗(yàn)

皮膚刺激試驗(yàn)(單次、多次給藥試驗(yàn))，黏膜刺激性試驗(yàn)結(jié)果表明：通過(guò)單次和多次給藥試驗(yàn)顯示本藥物對(duì)皮膚無(wú)刺激性。對(duì)黏膜無(wú)刺激，對(duì)眼有輕微的刺激。

2.4 膜劑臨床應(yīng)用試驗(yàn)

根據(jù)臨床試驗(yàn)治療方案，由CMT法篩選出治療組隱性乳房炎陽(yáng)性奶區(qū)共21個(gè)，用藥7 d后共治愈11個(gè)乳區(qū)（據(jù)體細(xì)胞數(shù)的變化觀察）。結(jié)果表明：其菌絲霉素成膜劑對(duì)奶牛隱性乳房炎初步治療率達(dá)52.38%，對(duì)照組隱性乳房炎陽(yáng)性奶區(qū)共25個(gè)，7 d后有35個(gè)乳區(qū)呈陽(yáng)性；其中預(yù)防組在經(jīng)過(guò)7 d的預(yù)防后，有2個(gè)乳區(qū)被感染，預(yù)防率可達(dá)到95%，而對(duì)照組在7 d之后有15個(gè)乳區(qū)被感染呈陽(yáng)性。同時(shí)菌絲霉素成膜劑對(duì)單次產(chǎn)奶量、乳蛋白、乳糖、乳脂率及非脂固形物的影響均無(wú)顯著性差異（見(jiàn)圖4）。由此該成膜劑應(yīng)用于奶牛隱性乳房炎有明顯的預(yù)防效果。

圖4 菌絲霉素成膜劑對(duì)單次產(chǎn)奶量、乳蛋白、乳糖、乳脂率及非脂固形物變化的影響

3 討論

自20世紀(jì)40年代以來(lái)，膜劑作為一種新的劑型已經(jīng)迅速地發(fā)展起來(lái)，如工業(yè)、醫(yī)藥及食品等等[9]。目前，成膜劑的組方、工藝的選擇及優(yōu)化技術(shù)已發(fā)展很成熟，但在獸醫(yī)藥領(lǐng)域相關(guān)的膜劑研究比較少，對(duì)膜劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)定位還是模糊不清。其中，據(jù)2010年中國(guó)藥典[10]對(duì)膜劑質(zhì)量要求記載基本都是立足于藥物自身，而無(wú)關(guān)于膜劑性能的研究質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并且膜劑的性能不但影響藥物的療效，而且影響皮膚正常功能的發(fā)揮[11]。

抗菌肽是一種具有生物活性的小分子多肽，具有強(qiáng)堿、熱穩(wěn)定性及抗菌譜廣等特點(diǎn)。目前，研究人員已從細(xì)菌、真菌、兩棲類(lèi)、昆蟲(chóng)、植物、哺乳動(dòng)物乃至人體中發(fā)現(xiàn)并分離獲得具有抗菌活性的多肽物質(zhì)。由于這些多肽對(duì)細(xì)菌具有高效殺菌活性，因此被命名為“antibacterial peptides,ABP”。隨著研究的進(jìn)一步深入，人們發(fā)現(xiàn)某些抗菌肽對(duì)部分真菌、原蟲(chóng)、病毒及癌細(xì)胞等均具有殺傷作用。Plectasin也稱(chēng)為菌絲霉素，是由Hans-Henrik Kristensen課題組于2005年首次從Pseudoplectania nigrella的一種真菌中分離得到的。其中體外試驗(yàn)表明：Plectasin對(duì)于多種細(xì)菌具有很強(qiáng)的殺菌活性；而體內(nèi)試驗(yàn)表明，在肺炎鏈球菌感染小鼠引起的腹膜炎和肺炎模型中，Plectasin的療效分別與萬(wàn)古霉素和青霉素相當(dāng)。此外，Plectasin具有選擇性殺滅作用，安全性高。Plectasin與細(xì)菌細(xì)胞壁形成的前體物質(zhì)LipidⅡ具有很強(qiáng)的親和性，可以通過(guò)與LipidⅡ結(jié)合阻止病菌細(xì)胞壁的形成，從而阻止病菌繁殖。同時(shí)Plecta?sin獨(dú)特的作用機(jī)制不易誘導(dǎo)產(chǎn)生耐藥性菌株[12]。

奶牛乳房炎主要致病菌為金黃色葡萄球菌、鏈球菌和大腸桿菌，其發(fā)病率很高。目前治療奶牛乳房炎已從最初采用抗生素治療，轉(zhuǎn)變?yōu)橹兴幆煼ǎ侵兴幹委熌膛Ｈ榉垦子昧看?、療效慢，已不是最理想治療方法。因此，尋找一種高效、安全的新藥代替目前普遍使用的抗生素和中藥是目前防治奶牛乳腺炎的重要手段，也是畜牧業(yè)研究與生產(chǎn)的熱點(diǎn)問(wèn)題。目前治療奶牛乳腺炎的方法主要有：①中藥提取物，如蒲公英、金銀花、紫花地丁、連翹、沒(méi)藥等，但效果均不是非常理想；②疫苗，如奶牛乳房炎多聯(lián)疫苗，對(duì)鏈球菌有一定的作用，大腸埃希菌J5苗，在控制桿菌性乳房炎有良好應(yīng)用前景，但由于乳房炎病原菌的多樣性，目前還沒(méi)有非常合適的疫苗。

本試驗(yàn)以綠色環(huán)保藥物抗菌肽菌絲霉素為研究對(duì)象，旨在解決現(xiàn)有抗菌肽制劑制備方法包封率低、穩(wěn)定性差及成本高的問(wèn)題，為抗菌肽新制劑的臨床應(yīng)用研究提供依據(jù)。其中在制備成膜劑的過(guò)程中，成膜材料首選聚乙烯醇（PVA），其性能具有很好的抗拉強(qiáng)度、柔軟性、吸濕性和溶水性，并且無(wú)毒、無(wú)副作用，被廣泛用于生物醫(yī)用材料[13]。為了保證成膜劑膜的質(zhì)量、穩(wěn)定性及舒適性，還需向成膜材料中加入增塑劑（甘油）、表面活性劑（Tween-80）及抗氧化劑等添加劑。Schroeder等[14]通過(guò)試驗(yàn)證明溶液的抗拉強(qiáng)度、斷裂伸長(zhǎng)率等機(jī)械性能指標(biāo)與皮膚的親和力之間的相關(guān)性和水蒸汽透過(guò)性與體內(nèi)外相關(guān)性都不好，由此本試驗(yàn)對(duì)膜劑性能研究以活體皮膚進(jìn)行考察標(biāo)準(zhǔn)。該試驗(yàn)研究表明，其成膜劑不僅工藝簡(jiǎn)單，包封率高，穩(wěn)定性好，成本低廉，可進(jìn)行大規(guī)模化生產(chǎn)，而且還可以直接起到保護(hù)作用，迅速殺死細(xì)菌，防止炎癥進(jìn)一步感染，對(duì)感染有很好的治療效果，并且該成膜劑中含有保濕劑成分，可吸收患處滲出液及水分，起到較好的保濕作用，對(duì)皮膚具有良好的親和性和透氣性。