■張瑞星 黃 凱 宋明明 徐 丹 王 赫

（青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，山東青島 266109）

霉菌毒素是霉菌在生長(zhǎng)繁殖過程中產(chǎn)生的有毒次級(jí)代謝產(chǎn)物，霉菌毒素廣泛存在于飼料及飼料原料中，對(duì)人和動(dòng)物健康產(chǎn)生了極大的威脅。霉菌毒素對(duì)動(dòng)物的損害主要是免疫毒性、神經(jīng)毒性、氧化損傷以及器官毒性等[1]，有些霉菌毒素具有很強(qiáng)的致畸、致癌、致突變作用[2-3]。Cast等[4]的調(diào)查結(jié)果顯示，近幾年飼料中黃曲霉毒素B1（aflatoxinB1，AFB1）的污染情況并未減輕，而煙曲霉毒素B1（umitremorginB1，F(xiàn)B1）、嘔吐毒素（vomitoxin，DON）、玉米赤霉烯酮（zearalenone，ZEN）的檢出率和超標(biāo)率均有增高趨勢(shì)。因此飼料及原料去霉問題亟待解決，吸附劑法是目前去除霉菌毒素最行之有效的一種方法，現(xiàn)在常用的吸附劑有膨潤(rùn)土、酵母細(xì)胞壁和酯化葡甘露聚糖（ esterification of glucomannan，EGM）等，但是各種吸附劑都有自己的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)，復(fù)合霉菌毒素吸附劑是把幾種吸附劑按比例配合在一起，通過體外吸附試驗(yàn)篩選最優(yōu)組合來達(dá)到理想的吸附效果。本試驗(yàn)旨在利用本實(shí)驗(yàn)室研制的復(fù)合霉菌毒素吸附劑（主要成分為膨潤(rùn)土、酵母細(xì)胞壁、酯化葡甘露聚糖）對(duì)肉雞的保護(hù)作用，為其在實(shí)際生產(chǎn)中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與處理

選取60羽1日齡的AA肉公雛雞，隨機(jī)分為3組，每組20羽，設(shè)4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)5羽。第1組為對(duì)照組，飼喂基礎(chǔ)日糧；第2組為霉變飼料組，飼喂霉變飼料；第3組為霉變飼料+復(fù)方霉菌毒素吸附劑組，在霉變飼料中添加0.2%復(fù)合霉菌毒素吸附劑。

1.2 基礎(chǔ)日糧和霉變飼料

基礎(chǔ)日糧購(gòu)自某飼料公司。把基礎(chǔ)日糧置于陰暗潮濕處使其自然霉變，對(duì)照組和霉變飼料飼喂前都添加0.15%的丙酸鈣抑制霉菌生長(zhǎng)，添加誘食劑促進(jìn)采食。在正式試驗(yàn)前用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定霉變飼料中AFB1、FB1、ZEN、DON的含量。見表1。

表1 試驗(yàn)飼料中霉菌毒素含量

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)雞均籠養(yǎng)，自由采食、飲水，按照肉雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行飼養(yǎng)。

7日齡，新城疫Ⅳ系、傳支H120二聯(lián)凍干苗，雙倍點(diǎn)眼滴鼻免疫；新城疫、禽流感二聯(lián)油苗，注射免疫。13日齡，禽傳染性法氏囊疫苗，雙倍飲水免疫；21日齡，新城疫Ⅳ系疫苗，雙倍飲水。預(yù)試期7 d，正式試驗(yàn)期35 d。

1.4 試驗(yàn)儀器設(shè)備

MK3型酶標(biāo)儀（賽默飛世爾儀器有限公司）；TDL-5型臺(tái)式離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）。

1.5 藥品和試劑

復(fù)合霉菌毒素吸附劑由青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)代謝病與中毒病實(shí)驗(yàn)室研制；谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、超氧化物歧化酶（SOD）、總抗氧化能力（T-AOC）、羥自由基（·OH）、丙二醛（MDA）、干擾素-γ（IFN-γ）、白介素-2（IL-2）、白介素-4（IL-4）、白介素-12（IL-12）等檢測(cè)試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程有限公司；ZEN、DON、FB1、和 AFB1、雞新城疫抗體、雞傳染性法氏囊抗體和禽流感抗體ELISA檢測(cè)試劑盒購(gòu)自上海勁馬生物科技有限公司。

1.6 檢測(cè)指標(biāo)及方法

1.6.1 血漿生化指標(biāo)檢測(cè)

試驗(yàn)至42 d，每重復(fù)組隨機(jī)撲殺3羽雞，翅下采血，3 000 r/min離心取血漿。檢測(cè)血漿中AST、ALT、SOD活性，MDA、·OH、T-AOC含量。

1.6.2 血漿細(xì)胞因子檢測(cè)

試驗(yàn)至42 d，酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血漿中干擾素-γ（IFN-γ）、白介素-2（IL-2）、白介素-4（IL-4）、白介素-12（IL-12）的含量。

1.6.3 血漿中IBDV、H9N1V和NDV抗體水平的檢測(cè)

試驗(yàn)至42 d，酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血漿中IBDV、H9N1V和NDV抗體水平。

1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析（one-way ANOVA）和最小顯著差異（least significant difference,LSD）檢驗(yàn)法對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行多重比較，結(jié)果用Xˉ±SD表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 霉變飼料中添加復(fù)合霉菌毒素吸附劑對(duì)肉雞血漿生化指標(biāo)的影響（見表2）

表2 霉變飼料中添加復(fù)合霉菌毒素吸附劑對(duì)肉雞血漿生化指標(biāo)的影響

試驗(yàn)至42 d，第3組SOD活性與第1、第2組差異不顯著（P＞0.05），第2組顯著低于第1組（P＜0.05）。第3組MDA含量顯著低于第2組（P＜0.05），第3組和第1組差異不顯著（P＞0.05）。第3組·OH活性顯著低于第2組（P＜0.05），第3組顯著高于第1組（P＜0.05）。第3組ALT活性顯著低于第2組（P＜0.05），第3組和第1組差異不顯著（P＞0.05）。第3組AST活性顯著低于第2組（P＜0.05），第3組和第1組差異不顯著（P＞0.05）。

2.2 霉變飼料中添加復(fù)合霉菌毒素吸附劑對(duì)肉雞血漿中細(xì)胞因子的影響（見表3）

表3 霉變飼料中添加復(fù)合霉菌毒素吸附劑對(duì)肉雞血漿中細(xì)胞因子的影響

試驗(yàn)至42 d，第3組IFN-γ的含量顯著高于第2組（P＜0.05），第3組顯著低于第1組（P＜0.05）。第3組IL-2的含量顯著高于第2組（P＜0.05），第3組和第1組差異不顯著（P＞0.05）。第3組IL-4的含量和第1、第2組差異不顯著（P＞0.05），第2組顯著低于第 1組（P＜0.05）。第 3組 IL-12的含量和第 1、第2組差異不顯著（P＞0.05），第2組顯著低于第1組（P＜0.05）。

2.3 霉變飼料中添加復(fù)合霉菌毒素吸附劑對(duì)肉雞血漿中IBDV、H9N1V和NDV抗體水平的影響（見表4）

表4 霉變飼料中添加復(fù)合霉菌毒素吸附劑對(duì)肉雞42 d血漿中疫苗免疫抗體的影響

試驗(yàn)至42 d，第3組H9N1-Ab含量和第1、第2組差異不顯著（P＞0.05），第2組顯著低于第1組（P＜0.05）。第3組IBDV-Ab含量顯著低于第2組（P＜0.05），第3組和第1組差異不顯著（P＞0.05）。第3組NDV-Ab含量顯著高于第1、第2組（P＜0.05），第2組顯著低于第1組（P＜0.05）。

3 討論

霉菌毒素危害動(dòng)物健康的主要病理學(xué)基礎(chǔ)為氧化損傷。SOD和MDA是反映機(jī)體抗氧化能力的重要指標(biāo)。Kouadio等[5]報(bào)道，DON和ZEN能阻斷鞘磷脂代謝，使細(xì)胞MDA產(chǎn)生增加，導(dǎo)致脂質(zhì)過氧化。Abel等[6]報(bào)道FB1可以誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生自由基，從而導(dǎo)致氧化損傷。本試驗(yàn)結(jié)果顯示添加復(fù)合霉菌毒素吸附劑組MDA含量和·OH、AST、ALT活性顯著低于霉變飼料組。李華等[7]、馬小明等[8]、付學(xué)鋒等[9]發(fā)現(xiàn)，在添加T-2、DON、ZEN的小鼠飼料中添加0.1%酯化葡甘露聚糖（EGM）可以顯著扭轉(zhuǎn)霉菌毒素對(duì)小鼠的氧化損傷。王留等[10]報(bào)道，在豬的日糧中添加0.1%～0.2%霉菌毒素吸附劑能夠消除黃曲霉毒素對(duì)生長(zhǎng)育肥豬生產(chǎn)性能的影響，使豬血漿丙二醛（MDA）的含量降低，并顯著提高血漿超氧化物歧化酶（SOD）活性和總抗氧化能力（T-AOC），從而減輕霉菌毒素對(duì)機(jī)體的氧化損傷。ALT和AST是反映肝臟有無損傷的重要指標(biāo)。何學(xué)軍等[11]研究表明，與霉變飼料組相比，霉變飼料中添加由葡甘露聚糖和膨潤(rùn)土組成的復(fù)合吸附劑能顯著提高血漿中SOD活性，降低AST和ALT活性。由此可以看出復(fù)合霉菌毒素吸附劑可以扭轉(zhuǎn)霉菌毒素對(duì)肉雞的氧化損傷以及對(duì)肝臟的損傷。

霉菌毒素對(duì)動(dòng)物的毒性除了氧化損傷外，另一方面就是免疫毒性。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)霉菌毒素能顯著降低IFN-γ、IL-2、NDV-Ab的含量，而添加復(fù)合霉菌毒素吸附劑則能使其顯著升高。李振等[12]發(fā)現(xiàn)在霉變飼料中添加0.2%酵母細(xì)胞壁吸附劑，可顯著提高IL-6和IFN-γ mRNA相對(duì)表達(dá)量。Ibrahim等[13]研究表明，肉雞飼料中分別添加鈉基膨潤(rùn)土能有效地改善黃曲霉毒素對(duì)肉雞細(xì)胞吞噬功能和促進(jìn)新城疫抗體的形成。李振等[12]發(fā)現(xiàn)在霉變飼料中添加0.2%酵母細(xì)胞壁吸附劑，能顯著提高新城疫抗體滴度水平。付雙喜等[14]在肉雞飼料中分別添加水合硅鋁酸鈉鈣和0.05%的EGM，發(fā)現(xiàn)肉雞NDV抗體滴度增加了27.24%和76.34%。由此可以看出復(fù)合霉菌毒素吸附劑可有效緩解霉菌毒素對(duì)肉雞的免疫毒性，維持疫苗抗體水平。

4 結(jié)論

霉變飼料對(duì)肉雞具有氧化損傷和免疫毒性。在霉變飼料中添加復(fù)合霉菌毒素吸附劑可以顯著扭轉(zhuǎn)霉菌毒素對(duì)肉雞的氧化損傷和免疫毒性，提高疫苗免疫效果。