趙晨翔，張雅敏，劉宏勝

綜述

單味中藥對免疫性肝損傷保護作用實驗研究進展

趙晨翔1，張雅敏2，劉宏勝3

機體的免疫應答反應所介導的肝組織及細胞損傷已成為當前眾多肝臟疾病發(fā)病的重要原因之一，單味中藥及其提取物對免疫性肝損傷有一定的保護作用。文章就近5年來單味中藥及其提取物對免疫性肝損傷保護作用的實驗研究進行了綜述。

中藥；提取物；免疫性肝損傷

免疫性肝損傷的重要特征是肝組織內有大量的炎癥細胞浸潤,產生免疫炎癥應答,從而導致免疫反應為基礎的肝臟損傷。已有研究表明，在許多肝臟疾病的病理過程中，均存在不同程度的肝臟免疫應答介導的炎癥反應及其引起的肝實質損傷。而且免疫性肝損傷是肝纖維化、肝硬化乃至肝臟腫瘤等終末病變發(fā)生發(fā)展的重要因素以及重要步驟,它決定了疾病的轉歸和發(fā)生發(fā)展[1-2]。中醫(yī)藥是我國巨大的寶藏，近年來通過實驗研究，發(fā)現了大量對免疫性肝損傷具有保護作用的單味中藥及其提取物，本文就近5年中藥治療免疫性肝損傷的實驗研究進展綜述如下。

1　黃芪

用于研究和治療免疫性肝損傷疾病的黃芪，主要活性成分是黃芪多糖（Astragalus pdysaccharides,APS），張晨等[3]研究發(fā)現黃芪多糖具有一定的保護肝臟和抗肝纖維化的作用。王忠利等[4]報道，利用不同劑量的APS對卡介苗（bacillus calmette-guerin,BCG)加脂多糖(lipopolysaccharides,LPS）誘導的大鼠肝損模型進行連續(xù)灌胃，發(fā)現APS各組在降低小鼠血清中丙氨酸氨基轉移酶（ALT）、門冬氨酸氨基轉移酶（AST）水平的同時，可抑制模型大鼠肝臟指數、脾臟指數的增加,使腫瘤壞死因子（tumour necrosis factor-α，TNF-α）、白細胞介素6（interleukin-6，IL-6）水平降低而抑制性卡巴蛋白表達增高。APS對肝損傷的這種保護作用具有一定的劑量依賴性，其機制可能是APS降低炎癥因子水平，抑制NF-κB通路，進而抑制炎癥反應的發(fā)生而實現。鐘振東等[5]利用LPS聯合D-半乳糖(α-D-galactopyranose，D-GlaN)建立小鼠免疫性肝損傷模型，用黃芪多糖進行灌胃，與模型組比較，給藥組小鼠肝組織誘導型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）、一氧化氮（nitric oxide，NO）、和細胞間黏附分子-1（intercelluar adhesion molecule-1，ICAM-1）含量均發(fā)生極顯著減少,顯微鏡下肝臟細胞嗜酸性變性、壞死、出血等病變顯著降低,肝臟組織P56蛋白熒光OD值極顯著減少。說明黃芪多糖可能通過其保肝降酶、抗炎以及抑制小鼠肝臟細胞細胞質中NF-κB家族P56蛋白的表達，進而減少INOS、ICAM-1和NO的生成從而對LPS聯合D-GlaN誘導的小鼠免疫性肝損傷產生保護作用。

2　陳皮

研究證明，陳皮含有的橙皮苷（hesperidin,HDN）具有抗脂質過氧化、抗炎、免疫調節(jié)等藥理作用[6]。陳茂劍等[7]研究橙皮苷預處理減輕刀豆蛋白A(concanavalin A，ConA)所致小鼠急性免疫性肝損傷，發(fā)現橙皮苷預處理能降低模型小鼠肝和脾指數，降低血清中ALT和AST水平及MDA含量，提高SOD活性；明顯抑制肝細胞凋亡，上調B淋巴細胞瘤-2基因（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）表達，下調Bax。實驗證明，HDN預處理能保護ConA所致小鼠急性免疫性肝損傷，其機制可能與橙皮苷增強機體抗氧化和清除自由基的能力，調控Bcl-2和Bax的表達進而抑制肝細胞凋亡有關。

3　重樓

現代藥理研究表明，重樓具有抑菌、止血、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、祛痰、抗早孕殺滅精子和抗細胞毒等作用。洪燕等[8]觀察重樓醇提物對ConA介導的急性免疫性肝損傷小鼠的保護作用，采用不同劑量的鐘樓醇提取物對小鼠進行灌胃。結果顯示，各劑量組均能顯著降低肝損傷小鼠血清AST、ALT水平，顯著提高超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）水平和谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）活性，從而增強機體抗氧化能力。又可降低丙二醛（Malondialdehyde，MDA）從而降低免疫性肝損傷的脂質過氧化物含量，同時可明顯減輕肝臟炎癥細胞浸潤和壞死程度。實驗說明，重樓醇提物通過加速氧自由基的清除，提高小鼠機體抗脂質過氧化能力以及提高過氧化物分解酶的含量，進而對ConA所致免疫性肝損傷小鼠起到保護作用。

4　野菊花

李國棟等[9]研究野菊花中萜類和黃酮類化合物對ConA所致小鼠免疫性肝損傷的保護作用，利用野菊花各提取部位高、中、低劑量組分別對小鼠進行灌胃。結果顯示，與模型組比較，野菊花各部位對免疫性肝損傷大鼠血清中AST、ALT、TNF-α、細胞因子γ干擾素（interferon-γ，IFN-γ）水平的升高具有不同程度的抑制作用，病理組織學觀察可見其對免疫性肝損傷病變均有改善作用。說明野菊花中萜類和黃酮類化合物對ConA致小鼠免疫性肝損傷均具有一定的保肝作用。

5　五味子

李麗波等[10]探討五味子乙素(γ-Schizandrin B，Sch B)對刀豆蛋白誘導小鼠肝損傷的保護作用與熱休克蛋白27 (HSP-27)和熱休克蛋白70(HSP-70)的關系,采用Sch B和熱休克蛋白抑制劑槲皮素灌胃給藥。結果，Sch B能使小鼠肝臟HSP27和HSP70在蛋白水平和mRNA水平的表達均顯著增加，同時肝細胞壞死程度明顯減輕、小鼠血清轉氨酶水平顯著降低。說明Sch B可以保護ConA所致的小鼠免疫性肝損傷，其中的一條重要機制是誘導HSP27和HSP70的表達。

6　紅背葉根

沈海容等[11]對紅背葉根4種提取物水提物、石油醚提取物、乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物對ConA誘導的小鼠急性肝損傷的保護作用進行研究。用以上不同提取物的高、中、低劑量對小鼠進行灌胃，結果發(fā)現，紅背葉根4種不同提取物不僅可顯著降低血清中ALT、AST，還可以改善肝臟的組織形態(tài)。說明紅背葉根4種不同提取物對ConA誘導的免疫性肝損傷具有一定的保護作用。

7　天麻

主要有效成分是天麻素、對羥基苯甲醇、對羥基苯甲醛、多糖、維生素A類物質等成分。李峰等[12]研究天麻多糖對BCG聯合LPS所致小鼠免疫性肝損傷的保護作用，結果發(fā)現，天麻多糖能顯著降低小鼠血清中ALT、AST、NO活性及TNF-ɑ與IL-1的含量，抑制肝臟中的MDA水平和提高SOD的活性，顯著提升脾T、B淋巴細胞增殖能力，且提高了小鼠的脾臟、胸腺指數，降低了肝臟指數。說明天麻多糖通過調節(jié)機體內的免疫功能、產生了平衡細胞因子，減少了TNF-ɑ、IL-1和NO的產生從而達到對BCG聯合LPS所致小鼠免疫性肝損傷的保護作用。

8　睡蓮花

睡蓮花維醫(yī)稱“內魯帕爾”，屬多年生水生草本植物雪白睡蓮Nymphaea candidaC.Presl的干燥花蕾,具有清熱解毒、鎮(zhèn)靜安神的功效。王雪等[13]觀察維藥睡蓮花提取物對BCG聯合LPS所致小鼠免疫性肝損傷模型的保護作用，發(fā)現睡蓮花提取物可顯著降低模型小鼠血清ALT、AST水平，顯著降低肝損傷小鼠的肝臟系數，使肝組織SOD、GSH-Px活性顯著升高,MDA與NO含量顯著降低。睡蓮花提取物對BCG聯合LPS誘導的免疫性肝損傷模型均具有明顯的保護作用,其機制可能與其提高抗氧化物酶的活性和降低脂質過氧化物水平,減少炎性介質NO的產生等有關。

9　三七

三七總皂苷（panax notoginsenosides，PNS）是三七的主要有效活性成分，研究表明，其具有調節(jié)免疫、抗炎、抗氧化、抗纖維化等藥理作用。韋維等[14]研究三七有效成分三七總皂苷、總黃酮及多糖對BCG、LPS所致小鼠免疫性肝損傷的保護作用，結果發(fā)現，三七總皂苷組（C組）、三七總黃酮組（D組）、三七多糖組（E組）小鼠肝、脾、胸腺指數、血清ALT水平明顯降低，IL-4、總超氧化物歧化酶（total superoxide dismutase，T-SOD）顯著升高。病理學示C、D、E組肝臟炎癥細胞浸潤、水腫和點狀、片狀壞死程度均比模型組組明顯減輕。三七總皂苷、三七總黃酮和三七多糖對免疫性肝損傷的保護作用可能是通過抑制炎性介質的分泌、增強機體抗氧化能力，加速自由基的清除。

10　波棱瓜子

陳璐等[15-16]采用BCG聯合LPS建立小鼠免疫性肝損傷模型，分別觀察波棱瓜子乙酸乙酯提取物和波棱瓜子脂肪油對其的保護作用。給予小鼠不同濃度的波棱瓜子乙酸乙酯提取物，觀察發(fā)現，各劑量組均可顯著降低肝損傷小鼠的肝臟指數及脾臟指數，改善肝臟組織病理學變化，降低肝損傷小鼠血清中ALT、AST水平，升高肝勻漿中SOD活性，降低MDA含量，但對血清中的NO含量無顯著影響。證明波棱瓜子乙酸乙酯提取物對BCG聯合LPS所致小鼠免疫性肝損傷具有明顯的保護作用。樊利娜研究藏藥波棱瓜子總木脂素對ConA所致小鼠免疫性肝損傷保護作用及其可能機制。按照不同劑量灌胃給藥，結果發(fā)現，各個劑量的波棱瓜子總木脂素均能降低肝損傷小鼠血清中的AST、ALT、ALP活力，以及小鼠血清NO、MDA含量和一氧化氮合酶(nitric oxide synthase，NOS)、過氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）活性，升高SOD、GHS-Px的活性。此外，波棱瓜子總木脂素各個劑量組能提高肝損傷小鼠肝組織中IL-10的表達水平，能使小鼠肝組織中IFN-γ、TNF-α、NF-κB表達水平明顯降低。病理檢查，波棱瓜子總木脂素各劑量組與模型組比較，損傷程度較輕，炎性細胞浸潤也減少。提示波棱瓜子總木脂素對ConA致免疫性肝損傷作用可能與抗脂質過氧化，清除自由基和調節(jié)Th1/Th2平衡，抑制炎性因子，促進抗炎性因子表達，減少炎性細胞在炎癥和組織損傷區(qū)域的聚集有關。

11　丹參

宋雨鴻等[17]研究丹參多糖對BCG聯合LPS所致小鼠急性肝損傷的保護作用。采用丹參多糖高、中、低劑量組，結果丹參多糖能顯著改善免疫性肝損傷小鼠的胸腺、肝臟、脾臟系數，降低血清中ALT、AST、NO的活性以及肝組織勻漿中TNF-α、白介素1β（interleukin-1β，IL-1β）的含量，使肝細胞腫脹、壞死及炎性細胞浸潤現象明顯好轉。說明丹參多糖對BCG聯合LPS所致小鼠免疫性肝損傷具有顯著的保護作用，機制可能與抑制TNF-α、IL-1β和NO的產生有一定關系。

12　木犀草

張琦[18]研究發(fā)現，木犀草素預處理能顯著降低ConA所致急性免疫性肝損傷小鼠血清中ALT和AST水平，減輕肝臟炎癥細胞浸潤及減少肝細胞的凋亡。此外，木犀草素能顯著抑制關鍵致病性細胞因子TNF-α和IFN-γ的表達。說明其保護ConA誘導肝損傷的機制，可能與其抑制了肝內炎癥介質對肝臟的攻擊作用有關。

13　人參

其主要活性成分為人參皂苷，人參皂苷Rg1是人參皂苷的主要有效成分之一。楊逸等[19]探討人參皂苷Rg1對小鼠免疫性肝損傷的保護作用及機制。實驗采用Rg1高、中、低劑量對小鼠進行灌胃，實驗末采用ConA制備免疫性肝損傷小鼠模型，取材檢測發(fā)現，與模型組比較，Rg1高、中、低劑量組小鼠血清中AST、ALT含量明顯降低，中、高劑量Rg1組小鼠血清中TNF-α、IFN-γ水平明顯下降。組織學觀察顯示，Rg1各劑量組小鼠肝損傷程度明顯輕于模型組。實驗說明Rg1對小鼠免疫性肝損傷具有一定保護作用，其機制可能與降低炎性細胞因子、減輕T淋巴細胞毒性作用有關。

14　美洲大蠊

張鵬等[20]研究美洲大蠊及其不同提取物對ConA致小鼠急性免疫性肝損傷時肝臟功能的保護作用。分別采用美洲大蠊的蟲粉混懸物、醇提取物、水提取物、醇水雙提取物對小鼠進行灌胃，結果發(fā)現，與模型組比較，給藥組均有降低ConA致小鼠急性免疫性肝損傷肝脾指數，降低血清中ALT、AST活性和肝臟組織中MDA的活性，升高肝臟組織中的SOD、GSH的活性，減輕小鼠肝臟病理損傷。美洲大蠊及其提取物存在藥效差別，蟲粉混懸組及水提取組作用優(yōu)于其醇提取組和醇水雙提取組。說明美洲大蠊及其提取物對ConA引起的小鼠急性免疫性肝損傷具有一定保護作用。

15　金花茶

鄒登峰等[21]研究金花茶多糖(camellia chrysantha polysaccharide，CNP)對卡介苗聯合脂多糖誘導的免疫性肝損傷小鼠的保護作用。與模型組比較，CNP顯著降低肝臟和脾臟指數，并增加胸腺指數，同時降低肝組織中TNF-α、IL-6和NO的含量，并減輕了肝損傷病變。說明金花茶多糖能夠減輕卡介苗聯合脂多糖所致的小鼠免疫性肝損傷，CNP可能是通過抑制肝內的炎癥反應和細胞毒性作用來介導保肝作用。

16　貫葉連翹

程啟閏等[22]觀察貫葉連翹提取物(hypericum perforatum. L，HPL)對ConA誘導的小鼠急性免疫性肝損傷的保護作用，結果發(fā)現，與模型組比較，HPL可顯著降低小鼠肝脾指數、血清ALT、AST、γ-谷氨酰轉肽酶（γ-GT）、球蛋白及膽紅素的升高水平，降低肝組織中MDA含量和Toll樣受體4(Toll-like receptors 4，TLR4)的表達，提高SOD活性，提示HPL反應發(fā)揮肝臟保護作用。病理結果同樣顯示，HPL組小鼠肝組織損傷程度明顯減輕。提示HPL可能通過抗氧化應激，抑制肝組織中TLR4表達，減少肝臟炎癥反應，從而減輕肝臟損傷程度。

單味中藥及其提取物能改善動物模型的肝功能，減輕肝組織的壞死程度，減少致炎和凋亡相關介質的產生，反映出中藥及其提取物對于ILI的治療潛力巨大。初步研究表明，中藥及其提取物對ILI的保護作用是多靶點，多作用，多層次，多途徑，主要與抗脂質過氧化，調節(jié)免疫功能，減少炎性介質的產生有關。但是現階段的研究存在一些不足，今后的研究應對以下兩個方面加以重視：⑴由于ILI機制的復雜性以及人和動物間的種屬差別，當前單一的動物模型尚未能完全模擬人的ILI過程，故用單一動物模型來驗證藥物的療效有一定的局限性，應建立符合疾病發(fā)展整體過程的復合動物模型，貼近臨床實際。⑵單味中藥有效成分的提取分離以及中藥本身的不良反應應加以重視。研究者往往著眼于研究藥物的效果但卻忽視了對其毒理性的研究，如何判斷在對ILI具有治療作用的前題下，確定其毒理性的大小，從而能夠更好地為將來應用于臨床提供更科學的理論依據。因而對不同種單味中藥或提取物進行橫向比較，甄選出效果最佳，毒副作用最小的藥物，從而對進一步研究乃至臨床開發(fā)具有更重要的應用價值。

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（收稿：2015-06-26修回：2015-08-02）

（責任編輯張靜喆屈振亮）

R657.3

A

1007-6948(2015)05-0522-04

10.3969/j.issn.1007-6948.2015.05.027

國家自然科學基金面上項目（81370576）；天津市應用基礎與前沿技術研究計劃（14JCYBJC24800）

1.天津中醫(yī)藥大學研究生院（天津 300193）

2.天津市第一中心醫(yī)院肝膽外科（天津 300192）

3.天津市第一中心醫(yī)院衛(wèi)生部危重病急救醫(yī)學重點實驗室（天津 300192）

張雅敏，E-mail：zhangyamin@medmail.com.cn