王嬌嬌 高衛(wèi)萍

干眼的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ图搬槾讨委熝芯窟M(jìn)展

王嬌嬌 高衛(wèi)萍

干眼影響人們的工作學(xué)習(xí)，發(fā)病呈上升趨勢(shì)，目前尚無有針對(duì)性的療法，探究有效的治療方法是近年來研究的熱點(diǎn)。針刺治療干眼在臨床上取得滿意療效，其機(jī)制研究尚處在起步階段?，F(xiàn)對(duì)干眼的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ图搬槾讨委熯M(jìn)行綜述，系統(tǒng)介紹動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究的造模方法、常見分類以及針刺對(duì)干眼動(dòng)物模型的影響，以期對(duì)針刺治療干眼的實(shí)驗(yàn)研究及機(jī)理研究提供參考和思路。

干眼；針刺；動(dòng)物實(shí)驗(yàn)；綜述

干眼是一種因淚液質(zhì)或量異?；騽?dòng)力學(xué)異常，導(dǎo)致淚膜穩(wěn)定性下降，并伴有眼部不適和潛在眼表組織病變，淚液滲透壓升高和眼表炎癥反應(yīng)〔1〕的常見眼表疾病，可由多種因素引起。根據(jù)諸多文獻(xiàn)記載，中醫(yī)針刺治療干眼效果明顯〔2-4〕，其作用機(jī)理有待動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的進(jìn)一步闡釋?，F(xiàn)將干眼實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ图搬槾讨委熝芯窟M(jìn)展綜述如下。

1 干眼的動(dòng)物模型

目前在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，干眼模型的建立也是通過多種方法進(jìn)行。干眼動(dòng)物模型可分為淚液缺乏型和蒸發(fā)過強(qiáng)型2種。1.1淚液缺乏型干眼模型

1.1.1 藥物造模:藥物制造干眼模型是實(shí)驗(yàn)中常用的方法。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，包括阿托品造模法〔5-6〕、東莨菪堿造模法〔7-8〕、高滲鹽水造模法和局部點(diǎn)用防腐劑造模法等。阿托品為副交感神經(jīng)阻斷劑，可阻斷副交感神經(jīng)的興奮性傳導(dǎo)，而副交感神經(jīng)興奮可使淚液分泌增加，因此，阿托品可通過阻斷副交感神經(jīng)的興奮性傳遞減少淚液分泌而制造干眼模型。施煒等〔9〕運(yùn)用1%的硫酸阿托品滴眼液，4次/d滴眼，檢測(cè)兔淚流量，實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)阿托品滴眼能夠制作兔干眼模型。東莨菪堿與阿托品的藥理作用不同，有較強(qiáng)的外周抗膽堿作用，可以誘導(dǎo)兔淚液分泌減少。仇晶晶等〔10〕通過皮下注射氫溴酸東莨菪堿，給藥1 h后檢測(cè)兔淚流量，結(jié)果證實(shí)氫溴酸東莨菪堿可以減少淚液分泌量。李晶等〔11〕采用高滲鹽水滴眼對(duì)照試驗(yàn)的方法，觀察高滲鹽水對(duì)小鼠淚液分泌量及角膜上皮細(xì)胞的影響。結(jié)果表明高滲鹽水實(shí)驗(yàn)使淚液滲透壓升高，在小鼠眼表造成類似干眼的病理損害。熊翠菊等〔12〕用0.1%的潔爾滅滴眼液滴一側(cè)眼，對(duì)側(cè)眼做空白對(duì)照組，分別于給藥前及給藥后第3、5、7和14天行Schirmer試驗(yàn)、1%熒光素鈉染色（FL），1%虎紅染色（RB），結(jié)果顯示給藥后第7天起實(shí)驗(yàn)組Schirmer試驗(yàn)值減少（P＜0.001）并逐漸下降，第5天起FL染色計(jì)分增加（P＜0.001）并逐漸上升，第3天起RB染色計(jì)分增加（P＜0.001）并逐漸上升，實(shí)驗(yàn)表明局部應(yīng)用潔爾滅滴眼液可構(gòu)建兔干眼模型。

1.1.2 維生素A缺乏造模:維生素和微量元素在視力改變和眼部疾病的發(fā)病中占有重要地位〔13〕。維生素A是眼的重要營(yíng)養(yǎng)來源，參與維持視力和免疫系統(tǒng)功能的正常。維生素A缺乏也可以導(dǎo)致干眼。國(guó)內(nèi)學(xué)者〔14〕運(yùn)用完全不含維生素A的飼料喂養(yǎng)干眼模型兔，采用隨機(jī)對(duì)照實(shí)驗(yàn)的方法觀察兔角膜的變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明維生素A缺乏可導(dǎo)致淚腺腺體萎縮，使角膜上皮及結(jié)膜干燥引發(fā)干眼。

1.1.3 手術(shù)造模:睪酮作為一種性激素，它的含量降低可以對(duì)眼部產(chǎn)生重要影響。睪酮含量降低可以導(dǎo)致淚腺上皮細(xì)胞萎縮，杯狀細(xì)胞減少，淚液分泌量減少而致干眼?；诖?，在目前實(shí)驗(yàn)研究中，常用“去勢(shì)”法制作干眼模型。張?jiān)旅返取?5〕用手術(shù)切除雄兔睪丸及附睪，結(jié)扎精索靜脈及輸精管，成功制成去勢(shì)干眼模型。姚小磊等〔16〕采用分組對(duì)照的方法，經(jīng)腹腔手術(shù)行兔雙側(cè)卵巢切除術(shù)進(jìn)行比較觀察，實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)該法可成功制作兔干眼模型。李森等〔17〕通過摘除大鼠眶外淚腺和眶內(nèi)淚腺的方法觀察術(shù)后大鼠淚液分泌量，成功制造干眼模型。施煒等〔18〕采用第三眼瞼及部分哈氏腺聯(lián)合板層角膜切開成功制作反射缺乏型干眼兔模型。謝漢平等〔19〕運(yùn)用手術(shù)摘除淚腺及第三眼瞼，并用三氯醋酸對(duì)結(jié)膜表面的副淚腺及杯狀細(xì)胞進(jìn)行燒灼破壞，成功制作干眼癥狀程度更為嚴(yán)重的兔干眼模型。

1.2 蒸發(fā)過強(qiáng)型干眼模型

1.2.1 藥物造模:有文獻(xiàn)報(bào)道有學(xué)者采用腎上腺素阻塞法〔20〕和氫氧化鈉燒灼法〔21〕制造干眼模型，這兩種方法都造模成功，但存在諸多不足，實(shí)際應(yīng)用較少。

1.2.2 減少瞬目頻率造模:劉盛春等〔22〕采用固定家兔眼瞼控制瞬目次數(shù)的方法，加快淚液蒸發(fā)，使眼部長(zhǎng)期干澀導(dǎo)致角膜上皮細(xì)胞壞死制作干眼模型。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該模型主要通過減少瞬目頻率，使淚液蒸發(fā)過多，淚液中黏蛋白缺乏，眼表組織繼而干燥失活，角膜上皮細(xì)胞壞死缺損，由此引起角膜上皮屏障功能的損害而出現(xiàn)干眼的表現(xiàn)。

1.2.3 環(huán)境誘導(dǎo)造模:陳蔚等〔23〕通過創(chuàng)建智能環(huán)境控制系統(tǒng)（ICES），有效調(diào)控環(huán)境的濕度、溫度和氣體流量，并在ICES中創(chuàng)建一個(gè)單純環(huán)境因素誘導(dǎo)的小鼠干眼模型，結(jié)果表明，低濕、高氣體流量的環(huán)境會(huì)導(dǎo)致正常小鼠淚液分泌量減少，并出現(xiàn)眼表上皮病變以及凋亡標(biāo)志物的高表達(dá)。

總之，根據(jù)不同的發(fā)病機(jī)制，許多干眼動(dòng)物模型被建立起來。實(shí)驗(yàn)者應(yīng)根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)?zāi)康募皩?shí)驗(yàn)條件選取合適的干眼模型。

2 針刺對(duì)干眼動(dòng)物模型的影響

劉雪等〔24〕運(yùn)用阿托品滴眼法制造家兔干眼模型，采用對(duì)照法觀察針刺、中藥及針?biāo)幗Y(jié)合對(duì)干眼模型兔淚液分泌量及淚腺中乙酰膽堿含量的影響。針刺取穴睛明、攢竹、絲竹空、太陽、瞳子髎。結(jié)果顯示針刺、中藥以及針刺結(jié)合中藥均可以提高干眼模型兔淚液分泌量。實(shí)驗(yàn)第10、17天針?biāo)幗M淚腺中乙酰膽堿的含量顯著高于模型組（P＜0.05）。該結(jié)果表明針刺可以促進(jìn)干眼模型兔淚腺的分泌，提高淚腺中乙酰膽堿的含量，對(duì)干眼模型兔具有治療作用。張?jiān)旅返取?5〕將新西蘭兔隨機(jī)分為正常組、干眼組和針刺組，干眼組和針刺組摘除雙側(cè)睪丸，去勢(shì)2周后兔干眼模型建立，并對(duì)針刺組穴位選取睛明、攢竹、絲竹空、瞳子髎、太陽針刺治療，后觀察實(shí)驗(yàn)兔淚流量、角膜熒光染色、淚腺組織病理學(xué)以及淚腺上皮細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Fas、FasL的變化。淚流量觀測(cè)表明針刺可以促進(jìn)淚液分泌，在針刺4周后達(dá)到正常水平，針刺組和干眼組相比有顯著差異；角膜熒光染色觀察結(jié)果顯示針刺組從針刺開始染色評(píng)分下降，到去勢(shì)后6周趨于正常水平；干眼組從去勢(shì)1周后角膜熒光染色積分大幅上升，去勢(shì)4周后上升幅度趨于平緩；正常組角膜熒光染色基本不變。淚腺組織病理觀察顯示干眼組淚腺上皮細(xì)胞萎縮，細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)減少；針刺組淚腺上皮細(xì)胞未見萎縮，胞漿充盈。而對(duì)Fas、FasL的觀察結(jié)果顯示Fas/FasL的表達(dá)在針刺組和干眼組中均上調(diào)，在干眼組中多為較強(qiáng)表達(dá)，而在針刺組中表達(dá)較低，且多為較弱表達(dá)，干眼組與針刺組有明顯差異（P＜0.05），針刺組與正常組無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的差異（P＞0.05）。以上觀察結(jié)果表明，針刺可以增加干眼模型兔的淚液分泌量，改善干眼對(duì)角膜和淚腺的病理損害，減緩淚腺上皮細(xì)胞的凋亡，對(duì)干眼具有控制和治療作用。龔嵐等〔26〕針刺兔右側(cè)眼部攢竹、絲竹空、太陽穴，進(jìn)針后行提插捻轉(zhuǎn)手法，針刺得氣后留針20 min，觀察該療法對(duì)兔淚液分泌的影響及淚腺形態(tài)的變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)針刺能刺激淚腺分泌淚液，且可維持一定時(shí)間，針刺后的淚腺組織結(jié)構(gòu)完整，腺上皮結(jié)構(gòu)清晰，腺小葉中腺泡內(nèi)物質(zhì)大量排空，腺體分泌旺盛，表明針刺可以促進(jìn)淚液分泌，進(jìn)而改善干眼癥狀。在隨后的實(shí)驗(yàn)中他們證實(shí)針刺可以增加淚腺組織中神經(jīng)肽血管活性腸肽（vasoactive intestinal polypeptide，VIP）濃度來刺激腺體的分泌，且能維持較長(zhǎng)時(shí)間〔27〕，該實(shí)驗(yàn)為針刺治療干眼提供了理論基礎(chǔ)。張義彪等〔28-29〕采用阿托品滴眼液造模，觀察針刺對(duì)干眼模型兔淚液分泌量的影響，并采用電鏡微觀觀察針刺前后淚腺的形態(tài)結(jié)構(gòu)變化，結(jié)果顯示針刺能促進(jìn)淚腺腺體的分泌，改善淚腺腺體形態(tài)，針刺后淚腺中乙酰膽堿的含量有所增加，作者認(rèn)為神經(jīng)反射和神經(jīng)遞質(zhì)在針刺治療干眼中發(fā)揮了一定作用。以上這些研究從多個(gè)角度展示了針刺對(duì)干眼的治療作用，并對(duì)其作用機(jī)理進(jìn)行初步探析。

3 討論

干眼在中醫(yī)中屬“白澀癥”“神水將枯病”等范疇。《黃帝內(nèi)經(jīng)》認(rèn)為眼目之所以能視萬物，全靠五臟六腑精氣的濡養(yǎng)，若經(jīng)絡(luò)不通，氣血不能上榮于目，則雙目干澀，眼目不舒。目前，西醫(yī)對(duì)干眼治療主要依靠局部應(yīng)用人工淚液〔30-31〕，其治療目的是緩解其癥狀，并非針對(duì)其病因的有效治療，停藥后易復(fù)發(fā)。淚點(diǎn)栓塞等手術(shù)療法〔32-33〕有一定的療效，但也存在不足。中醫(yī)對(duì)干眼是針對(duì)病因病機(jī)進(jìn)行治療，采用的方法主要有辨證內(nèi)服中藥、針刺等，既往文獻(xiàn)〔34-36〕顯示均有較好療效。針刺可以促進(jìn)淚腺主動(dòng)分泌淚液，改善干眼癥狀，療效穩(wěn)定。近年來隨著干眼動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究不斷發(fā)展，造模方法日趨完善，人們對(duì)于針刺治療干眼的作用機(jī)制做了一些探索，包括從分子水平，或圍繞調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡、改善淚腺的形態(tài)與功能、調(diào)節(jié)性激素等方面從不同角度探討了針刺治療干眼的機(jī)理。已有的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明針刺可以提高淚液分泌，降低干眼對(duì)角膜的損害和淚腺腺體的損傷，改善干眼癥狀。目前針刺治療干眼的實(shí)驗(yàn)研究仍處于起步階段，有很多問題尚不明確，但有理由相信隨著動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的深入，針刺治療干眼的作用機(jī)制會(huì)逐步被解釋，為臨床治療干眼不斷提供新的科學(xué)依據(jù)。

［1］Lemp M A，F(xiàn)oulks G N.The definition and classification of dry eye disease［J］.The Ocular Surface，2007，5（2）:75-92.

［2］劉慧瑩，彭清華，姚曉磊，等.針刺治療干眼癥的臨床研究［J］.中國(guó)中醫(yī)眼科雜志，2009，19（3）:148-150.

［3］吳魯化，周劍，何萍，等.辯證針刺治療不同證型干眼的療效觀察［J］.中國(guó)中醫(yī)眼科雜志，2015，25（1）:19-22.

［4］覃光輝，曲環(huán)汝，田雨，等.針刺干眼穴治療干燥綜合征干眼癥臨床觀察［J］.中醫(yī)學(xué)報(bào)，2012，27（11）:1530-1531.

［5］黃楚龍，王延?xùn)|，李瑜，等.野菊花滴眼液治療實(shí)驗(yàn)性干眼癥的治療觀察［J］.中藥材，2012，35（8）:1308-1311.

［6］李凱，王育良，張傳偉，等.鬼針草對(duì)2種兔干眼模型淚液分泌、淚膜質(zhì)量及淚腺中致炎因子和凋亡相關(guān)因子表達(dá)的影響［J］.中國(guó)中醫(yī)眼科雜志，2013，23（6）:389-392.

［7］劉慧娟，黃悅，張琰，等.大鼠干眼模型的建立及其角膜神經(jīng)的改變［J］.眼科新進(jìn)展，2014，34（5）:422-427.

［8］張曉燕，陳軼卉，林安娟，等.干眼小鼠模型的建立及眼表病理生理學(xué)改變［J］.同濟(jì)大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版，2010，31（4）:24-29.

［9］施煒，李橋，王育良，等.阿托品滴眼液制作兔干眼模型的研究［J］.臨床眼科雜志，2011，19（5）:455-457.

［10］仇晶晶，袁進(jìn)，周世有，等.皮下注射氫溴酸東莨菪堿建立兔干眼模型的實(shí)驗(yàn)研究［J］.眼科，2009，18（6）:404-409.

［11］李晶，付川，謝漢平.高滲鹽水點(diǎn)眼制作的小鼠干眼模型與評(píng)估［J］.第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，32（11）:1183-1187.

［12］熊翠菊，王智崇，周文良，等.局部滴用防腐劑構(gòu)建兔干眼模型及其角膜電生理特性變化［C］//中華醫(yī)學(xué)會(huì).第三屆全球華人眼科學(xué)術(shù)大會(huì)暨中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十一屆全國(guó)眼科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編.北京:中華醫(yī)學(xué)會(huì)，2006.

［13］李紅月，孫艷，劉長(zhǎng)宏，等.復(fù)明片聯(lián)合維生素C治療干眼癥臨床觀察［J］.中國(guó)煤炭工業(yè)醫(yī)學(xué)雜志，2015，18（5）:715-717.

［14］馬軼群，楊青，于海濤.維生素A缺乏兔干眼病模型角膜上皮細(xì)胞凋亡及相關(guān)蛋白表達(dá)的關(guān)系［J］.眼科新進(jìn)展，2008，28（8）: 586-589.

［15］張?jiān)旅罚咝l(wèi)萍.針刺對(duì)去勢(shì)雄兔干眼模型淚液分泌及淚腺上皮細(xì)胞相關(guān)蛋白Fas/FasL表達(dá)的影響［J］.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，8（14）:228-230.

［16］姚小磊，彭清華，吳權(quán)龍，等.圍絕經(jīng)期性激素水平下降導(dǎo)致干眼癥兔模型的建立［J］.湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，29（3）:9-12.

［17］李森，張林.大鼠淚液缺乏型干眼癥眼表組織中IL-6和TNF-α的表達(dá)［J］.國(guó)際眼科雜志，2010，10（7）:1281-1283.

［18］施煒，李橋，王育良，等.反射缺乏型干眼動(dòng)物模型的研究［J］.眼科研究，2009，27（4）:296-299.

［19］謝漢平，張漢承.家兔干眼模型的角膜上皮超微結(jié)構(gòu)及幾種眼藥的療效［J］.眼科研究，1992，10（1）:10-12.

［20］Jester J V，Nicolaides N，Kiss-Palvolgyi I，et al.Meibomian gland dysfunction.II.The role of keratinization in a rabbit model of MGD［J］.Investigative ophthalmology&visual science，1989，30（5）: 936-945.

［21］黃佳，楊水平，陳敏，等.結(jié)膜堿性燒傷致干眼模型的探討［J］.廣東醫(yī)學(xué)，2008，29（5）:753-755.

［22］劉盛春，吳曉梅.減少瞬目頻率建立的蒸發(fā)過強(qiáng)型兔干眼模型［J］.國(guó)際眼科雜志，2009，9（7）:1265-1268.

［23］陳蔚，張曉博，葉婭，等.智能環(huán)境控制系統(tǒng)誘導(dǎo)的小鼠干眼模型及分子機(jī)制研究［C］//浙江省醫(yī)學(xué)會(huì)眼科學(xué)分會(huì).2008年浙江省眼科學(xué)術(shù)會(huì)議論文集.寧波:浙江省醫(yī)學(xué)會(huì)眼科學(xué)分會(huì)，2008.

［24］劉雪，徐雯，高衛(wèi)萍.針?biāo)帉?duì)干眼兔模型淚液分泌及淚腺中乙酰膽堿含量的影響［J］.南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，30（5）:447-44.

［25］張?jiān)旅?，高衛(wèi)萍.針刺對(duì)去勢(shì)雄兔干眼模型淚液分泌的影響及其機(jī)制的研究［D］.南京:南京中醫(yī)藥大學(xué)，2013.

［26］龔嵐，孫興懷，馬曉芃，等.針刺對(duì)兔淚液分泌的影響及其淚腺形態(tài)學(xué)變化［J］.中華眼科雜志，2006，42（9）:835-837.

［27］龔嵐，孫興懷，馬曉芃，等.針刺對(duì)兔淚液分泌及淚腺血管活性腸肽濃度的影響［J］.針刺研究，2006，31（6）:347-350.

［28］張義彪，高衛(wèi)萍.針刺對(duì)水液缺乏型干眼兔淚液分泌及淚腺微觀形態(tài)的影響［J］.南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，26（1）:47-49.

［29］高衛(wèi)萍，張義彪，李橋.針刺對(duì)干眼兔模型淚液分泌及淚腺中乙酰膽堿含量的影響［J］.新中醫(yī)，2011，43（3）:134-135.

［30］馬芬俞，柴金苗，王文峰.滋陰補(bǔ)腎法治療肝腎陰虛型干眼的療效觀察［J］.中國(guó)中醫(yī)眼科雜志，2015，25（1）:32-34.

［31］毛光蘭，賈奎.針灸聯(lián)合人工淚液治療對(duì)干眼癥患者眼表功能的影響分析［J］.眼科新進(jìn)展，2015，35（6）:582-584.

［32］付智勇，黃艷玲，洪惠.Smart PLUG淚點(diǎn)塞栓治療水液缺乏型干眼臨床觀察［J］.臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2013，12（24）:1994-1996.

［33］郝兆芹，宋金鑫，吳潔.原發(fā)性翼狀胬肉與干眼關(guān)系的臨床觀察［J］.國(guó)際眼科雜志，2013，13（3）:603-604.

［34］劉敏，劉邁蘭，于美玲，等.針灸治療干眼的系統(tǒng)評(píng)價(jià)［J］.中國(guó)中醫(yī)眼科雜志，2012，22（4）:242-246.

［35］龔嵐，孫興懷，馬曉芃，等.針刺治療干眼癥臨床療效和安全性觀察的初步研究［J］.中華眼科雜志，2006，42（11）:1026-1027.

［36］高衛(wèi)萍，孫化萍，王育良，等.針刺治療干眼癥的臨床研究［J］.中國(guó)針灸，2004，24（10）:685-688.

Experimental model of dry eye and research progress of acupuncture treatment

WANG Jiaojiao，GAO Weiping.Nanjing Uni-versity of TCM，Nanjing 210029，Jiangsu，China

Dry eye influences people's work and study a lot，the morbidity is on the rise and there are no direct methods for therapy.To explore the effective treatment is the research hotspot in recent years.Acupuncture treatment for dry eye is satisfactory，yet its mechanism is still in its infancy.This paper summarized the experimental research of acupuncture treatment for dry eye，introduced the essence of the animal experiment research building method systematically，the common classification and the mechanism，in the hope of providing reference and ideas for the experimental research，mechanism research and acupuncture treatment of dry eye.

dry eye；acupuncture；animal experiments；review

R777.3

A

1002-4379（2015）04-0300-03

10.13444/j.cnki.zgzyykzz.2015.04.021

國(guó)家自然科學(xué)基金（81373746），江蘇省自然科學(xué)基金（BK2012856）

南京中醫(yī)藥大學(xué)，南京210029

高衛(wèi)萍，E-mail:gao-weiping@163.com