張君毅，司燦，王建明，韋坤華，李明杰，繆劍華，張重義*

(1.華僑大學(xué) 園藝系，福建 廈門 361021；2.福建農(nóng)林大學(xué) 中藥材GAP研究所，福建 福州 350002；3.廣西壯族自治區(qū)藥用植物園，廣西 南寧 530023)

·中藥農(nóng)業(yè)·

民間藥用植物金線蓮研究與應(yīng)用△

張君毅1,2，司燦1，王建明2，韋坤華3，李明杰2，繆劍華3，張重義2*

(1.華僑大學(xué) 園藝系，福建 廈門 361021；2.福建農(nóng)林大學(xué) 中藥材GAP研究所，福建 福州 350002；3.廣西壯族自治區(qū)藥用植物園，廣西 南寧 530023)

金線蓮是我國珍稀民間藥用植物，在閩臺地區(qū)長期沿用，具有肝保護、降血糖、降血脂、抗炎等多種功效，由于臨床療效確切近年得到廣泛重視。本研究從藥材基原、組培生產(chǎn)、栽培種植、共生真菌和質(zhì)量控制等5方面綜述金線蓮最新研究，并展望發(fā)展中需解決的問題。

金線蓮；質(zhì)量控制；基原

金線蓮Anoectochilusroxburghii(Wall.)Lindl學(xué)名花葉開唇蘭，蘭科開唇蘭屬，多年生草本陸生蘭，在我國主要分布在亞熱帶地區(qū)，主產(chǎn)于福建、浙江、江西、廣東、廣西等地，臺灣亦產(chǎn)。金線蓮以全草入藥，味甘、性平，具有清熱涼血、除濕解毒的功效，作為我國傳統(tǒng)的民間珍貴藥材，在閩臺地區(qū)應(yīng)用最為廣泛。金線蓮株型小巧，葉形優(yōu)美，葉脈金黃色呈網(wǎng)狀排列，是極具觀賞價值的室內(nèi)觀葉植物?，F(xiàn)代藥理研究表明，金線蓮的具有降血糖、降血脂、肝保護、抗炎、鎮(zhèn)痛、利尿、鎮(zhèn)靜、降血壓、抗氧化、改善骨質(zhì)疏松等作用。金線蓮藥理活性確切，臨床應(yīng)用療效好，且無毒副作用，使用安全，得到市場高度重視。然而目前金線蓮藥材質(zhì)量參差不齊，臨床經(jīng)常上出現(xiàn)“癥準(zhǔn)方對藥不靈”現(xiàn)象。本文圍繞藥用資源、組培生產(chǎn)、栽培種植、成分檢測等影響藥材質(zhì)量的諸多因素綜述近年的相關(guān)研究，確保金線蓮“安全、有效、穩(wěn)定、可控”高效生產(chǎn)提供參考。

1 藥材基原

金線蓮所屬蘭科開唇蘭屬植物均為地生蘭，《中國植物志》記載約有40余種，分布于亞洲熱帶地區(qū)至大洋洲，我國有20種，2變種，產(chǎn)于西南部至南部。在我國民間多作藥用，別名繁多，金線蓮(金線草)、金草 、臺灣金線蓮(金線連)、金線楓、黃花金線蓮(金線連)、黃花糯子蘭?！陡＝ㄊ≈兴幉臉?biāo)準(zhǔn)(2006年版)》記載除金線蘭(A.roxburghii)外，該屬做藥用的還有臺灣銀線蘭(AnoectochilusformosanusHayata)，浙江金線蘭(AnoectochiluszhejiangensisZ.Wei et Y.B.Chang)，峨眉金線蘭(AnoectochilusemeiensisK.Y.Lang)，恒春銀線蘭(AnoectochiluskoshunensisHayata)，其中花葉開唇蘭分布最廣，儲量相對較多，是福建、廣東、廣西、浙江等地習(xí)用品，而臺灣金線蓮(A.formosanus)和高雄金線蓮(A.koshunensis)是臺灣民間習(xí)用品，常與金線蓮(A.roxburghii)混用。在云南文山地區(qū)滇越金線蘭(AnoectochiluschapaensisGagnep.)也作藥用[1]。由此可見金線蓮藥材的基原為蘭科開唇蘭屬可供藥用植物。

野生金線蓮(A.roxburghii)性喜陰涼、潮濕，尤其喜歡生長在有常綠闊葉樹木的溝邊、石壁、土質(zhì)松散的潮濕地帶。形態(tài)學(xué)性狀變化較大，對13份不同種源金線蓮種質(zhì)的9個性狀(株高、地徑、葉長、葉寬、植株葉面積、葉片鮮重、葉片數(shù)、高徑比、植株鮮重)進行分析，變異系數(shù)為2.96%～12.59%。在實際生產(chǎn)及良種選育過程中，應(yīng)關(guān)注金線蓮株高、葉片鮮重和葉片數(shù)等性狀[2]。廣西金線蓮葉大莖長明顯區(qū)別于小巧玲瓏的福建金線蓮，此外還有高桿/矮桿、大葉/小葉、圓葉/尖葉等類型。ISSR標(biāo)記和SRAP標(biāo)記分析不同地理種源金線蓮，在分子水平證實金線蓮具有較高的遺傳多樣性[3-4]。即使在相同環(huán)境下，金線蓮也存在個體間的顯著差異。金黃色網(wǎng)脈至網(wǎng)脈不明顯甚至無法看到的植株常常在同一環(huán)境下相伴而生，民間習(xí)稱“金線蓮公，金線蓮母”，經(jīng)解剖結(jié)構(gòu)、顯微鑒別和理化分析兩者并無二致。但藥材一般使用金線蓮公。

不同的種源植物直接影響藥材質(zhì)量。廣西金線蓮的多糖含量比臺灣金線蓮含量高[4]。臺灣金線蓮總黃酮含量比福建金線蓮高[5]。比較多種組培和野生金線蓮樣品成分含量，差異極顯著，多糖含量7.50%～19.31%；總黃酮含量0.429%～1.434%；游離氨基酸含量1.91%～7.92%，銀色葉脈金線蓮總黃酮和游離氨基酸含量相對較高，金色葉脈金線蓮多糖含量相對較高[5-6]。因此，為保障金線蓮品質(zhì)必須從源頭上保證使用優(yōu)良的種質(zhì)材料。

2 組培生產(chǎn)

金線蓮組織培養(yǎng)技術(shù)比較成熟，需要注意的是不同金線蓮品種所需培養(yǎng)基等條件有所差異。新型LED光源具有波長具體、光譜性能好、光效高、系統(tǒng)發(fā)熱少、質(zhì)量和體積較小、壽命較長、占用空間小等諸多傳統(tǒng)電光源技術(shù)無可比擬的優(yōu)勢。利用LED不同光質(zhì)對金線蓮生理特征及品質(zhì)的影響研究發(fā)現(xiàn)，紅光和藍光能提高不定芽誘導(dǎo)率，對生根未見促進作用。藍光有利于植株健壯，而紅、黃、綠光則能提高株高。紅光和黃光抑制葉綠素積累，而長期藍光照射抑制可溶性總糖及總氮合成。藍綠光有助于促進合成總黃酮、多糖和阿魏酸等物質(zhì)；紅光則促進多糖積累[7]。接種1個月后采用藍光誘導(dǎo)15 d，總黃酮、槲皮素、異鼠李素和山柰酚含量最高，促成作用均表現(xiàn)為藍光大于黃光，紅光效果最差[8]。另外，金線蓮次生代謝產(chǎn)物可利用原球莖懸浮體系生產(chǎn)[9]。

移栽時應(yīng)選擇合適的條件，泥炭-河沙2∶>1，種植密度為3 cm×3 cm，遮蔭率70%，1/4MS營養(yǎng)液的條件下，金線蓮組培苗的成活率高且長勢較好[10]。金線蓮雖是陰性植物，但不可過度遮光，400 Lux是金線蓮能正常生長的最低光照強度[11]。

3 設(shè)施栽培與林下種植

金線蓮組培生產(chǎn)、大棚種植、林下種植等不同栽培方式也造成藥材質(zhì)量差異。對福建金線蓮、臺灣金線蓮組培植株和福建金線蓮林下種植植株進行比較分析，化學(xué)成分組成及含量非常相似，總黃酮和游離氨基酸含量均與野生金線蓮相當(dāng)或略高，而組培金線蓮多糖則遠高于野生金線蓮[12]，影響盆栽金線蓮3種有效成分含量的3個因素由主到次依次是：葉脈顏色、盆栽生長周期和株高[6]。相對野生植株，大棚栽培金線蓮的含水量、維生素C、粗蛋白、粗脂肪及氨基酸含量較高，而灰分和總糖分含量則較低，除元素Ni外的9種微量元素含量均比野生低[13]。另外，通過高溫脅迫發(fā)現(xiàn)福建金線蓮對高溫的耐受力優(yōu)于臺灣金線蓮[14]。

4 共生真菌

野生金線蓮的每個生長發(fā)育階段都有共生真菌參與，對人工栽培的金線蓮生長、抗逆性、總黃酮、糖類和無機元素等成分含量有極其重要影響[15]。目前已分離到瘤菌屬(Epulorhizasp.)、小菇屬(Mycena.)、絲核菌(Rhizoctniasp.)等多種共生真菌。用電鏡對金線蓮共生苗觀察菌根結(jié)構(gòu)顯微及超微結(jié)構(gòu)，表明共生菌株初期利用了植物的碳源物質(zhì)，但最終被溶解酶消解，為植物提供營養(yǎng)[16]。通過蛋白質(zhì)組差異研究菌根真菌促進植物生長的機制，發(fā)現(xiàn)差異蛋白功能大多涉及植物信號傳導(dǎo)、代謝調(diào)節(jié)、光合作用及物質(zhì)代謝中的功能蛋白及酶類等。通過這些調(diào)控使植株健壯、抗性增強，植物與菌根真菌互作時可能發(fā)生某些基因的沉默[17]。在探索菌根真菌提高植物抗旱能力研究中發(fā)現(xiàn)，差異表達蛋白中涉及光合作用的有8個，其中7個與暗反應(yīng)中CO2的固定相關(guān)，并且啟動干旱條件下的C4途徑以充分利用CO2，該過程涉及糖、脂代謝的有5個蛋白，蛋白質(zhì)合成相關(guān)蛋白有3個，抗性相關(guān)蛋白2個[18]。

5 質(zhì)量控制

金線蓮尚未被《中華人民共和國藥典》收載。2006年，福建省食品藥品監(jiān)督管理局頒布《福建省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》，分別從葉橫切面特征、粉末特征對金線蓮進行了規(guī)定。2011年，國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局頒布第175號公告，批準(zhǔn)永安金線蓮實施地理標(biāo)志產(chǎn)品保護，總結(jié)了永安金線蓮的質(zhì)量特色指標(biāo)和傳統(tǒng)栽培技術(shù)，為金線蓮的栽培技術(shù)、產(chǎn)品分級、包裝和貯存制定了統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，并對永安金線蓮的質(zhì)量技術(shù)要求作了規(guī)定，多糖均不低于15%(以干基計)、黃酮均不低于0.8%(以干基計)、干品水分小于12%。2012年，福建省質(zhì)監(jiān)局批準(zhǔn)發(fā)布了《金線蓮培育技術(shù)規(guī)程》省級地方標(biāo)準(zhǔn)DB35/T1254-2012。

5.1 種苗級別制定

檢測金線蓮不同等級種苗的株高、地徑、葉片數(shù)、全株鮮重和地徑5個形態(tài)指標(biāo)，結(jié)合測定藥材產(chǎn)量和品質(zhì)指標(biāo)，結(jié)果表明可以選用株高和地徑為種苗分級的質(zhì)量指標(biāo)[19]。

5.2 活性物質(zhì)篩選

金線蓮含有糖類、皂苷、甾體、揮發(fā)油、生物堿、氨基酸等多種成分。其中多糖能提高小鼠的免疫功能[20，21]，顯著降低血糖[22]，抑制人前列腺癌細胞生長[23]；揮發(fā)油具有抗氧化活性[24]，抑制人肺癌細胞生長[25-26]；金線蓮苷(kinsenoside)對肝細胞腫脹、壞死和炎癥細胞浸潤程度具有明顯的改善作用，還保護血管作用[27-29]。

5.3 成分測定方法

準(zhǔn)確穩(wěn)定的檢測方法是藥材質(zhì)量控制的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。金線蓮苷可采用高效液相色譜(HPLC)[30]，野生金線蓮中金線蓮苷含量可達為16.57%[31]。微量元素測定采用原子吸收光譜法[32]。阿魏酸和肉桂酸采用索氏回流提取法和超聲-微波協(xié)同萃取法提取，并用HPLC測定[33]。揮發(fā)油成分采用水蒸氣蒸餾法，提取率為0.06%，以十六羧酸甲酯(47.98%)、棕櫚酸(20.57%)為主[25]。應(yīng)用HPLC-DAD分析金線蓮中的天麻素和天麻苷元；HPLC-ESI-MS分析金線蓮中的核苷類物質(zhì)，可以建立金線蓮藥材HPLC指紋圖譜進行藥材質(zhì)量控制[34]。

5.4 檢測時期確定

研究金線蓮主要活性成分動態(tài)變化，便于確定合理采收期和質(zhì)量控制時期。福建金線蓮和臺灣金線蓮均富含多糖和黃酮類物質(zhì)，金線蓮總黃酮主要累積于葉片，莖段部位相對較少，多糖主要累積于莖段部位，而葉片部位含量相對較少。兩種金線蓮從生根壯苗培養(yǎng)階段到大棚移栽階段，總多糖和總黃酮含量增長方式都呈“雙峰曲線”模式，并且不同部位(莖段和葉片)成分含量動態(tài)變化趨勢基本保持同步。槲皮素、山萘酚、異鼠李素3種黃酮苷元含量增長呈“單峰曲線”模式。臺灣金線蓮除了異鼠李素呈“雙峰曲線”增長模式外另外兩黃酮苷元變化趨勢與福建金線蓮相似[5]。生產(chǎn)上若不考慮大棚移栽，應(yīng)在生根壯苗培養(yǎng)5個月時進行采收；若需移栽，培植時間應(yīng)多于3個月[35]。

5.5 農(nóng)藥殘留

金線蓮栽培過程中常用多菌靈、甲基托布津和新植霉素等農(nóng)藥，建立測定金線蓮常用的農(nóng)藥殘留量的方法，可為藥材質(zhì)量控制提供可靠的資料[34]。此外，也可為安全使用提供依據(jù)，如多菌靈在金線蓮栽培基質(zhì)、根、莖和葉中的消解半衰期長短不一，最后一次施藥和收獲時間的安全間隔期可推薦為28 d[36]。

6 展望

金線蓮作為民間用藥，在《新華本草綱要》、《中國本草原色圖譜》、《全國中草藥匯編》、《中華本草》、《中藥辭?！?、《福建藥物志》、《廣東藥用植物手冊》、《浙南本草新編》等許多文獻收載，性味和而不同，功效大同小異。這可能是由于區(qū)域的生態(tài)環(huán)境、地方文化及金線蓮原植物的差異所引起。為保證藥材質(zhì)量和促進產(chǎn)業(yè)發(fā)展，應(yīng)注重開展以下工作：

6.1 正本清源

民間以“金線蓮”之名入藥的開唇蘭屬植物有6種，其中金線蓮分布最廣，遺傳分化最大，已出現(xiàn)諸多類型，有必有對現(xiàn)有資源收集、整理和評價，利用DNA條形碼或分子標(biāo)記技術(shù)進行鑒別，明確其親緣關(guān)系，為今后育種工作奠定基礎(chǔ)。

6.2 選育良種

目前金線蓮生產(chǎn)主要依靠組培生產(chǎn)和大棚種植，而林下仿野生種植產(chǎn)品更受人們青睞。金線蓮在自然環(huán)境中對水分比較敏感，如何選育出抗旱性強和抗病蟲害新品種，將成為大面積推廣林下種植突破的關(guān)鍵。

6.3 質(zhì)量評價

金線蓮含有多糖、黃酮、金線蓮苷等多種活性成分，篩選確定能有效控制金線蓮質(zhì)量的指標(biāo)成分，建立穩(wěn)定可靠化學(xué)成分含量測定方法，結(jié)合外觀等性狀制定分級標(biāo)準(zhǔn)，將有利于盡快制定行業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)甚至國家質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，有利于市場金線蓮的規(guī)范流通與銷售。

6.4 栽培生產(chǎn)

利用新型植物組培LED燈，探索金線蓮組織培養(yǎng)快速繁育各階段所學(xué)的最佳條件，以實現(xiàn)節(jié)能高效生產(chǎn)。由于金線蓮生長發(fā)育過程中對環(huán)境的光、溫、水、肥、氣等因子有嚴(yán)格要求，因此，無論是組培苗移栽馴化，溫室集約化栽培，還是露地大面積人工栽培，如何創(chuàng)造條件以滿足金線蓮對環(huán)境生態(tài)因子的特定要求，是人工栽培能否取得成功的關(guān)鍵所在。在這過程中，共生真菌起著極其重要的作用，如何有效利用共生真菌，以提高金線蓮對環(huán)境的適應(yīng)性并促進金線蓮的快速生長和有效物質(zhì)積累，也是一個重要的應(yīng)用型課題。

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ResearchandApplicationofFolkMedicinalPlantAnoectochilusroxburghii

ZHANGJunyi1，2，SICan1，WANGJianming2，WEIKunhua3，LIMingjie2，MIAOJianhua3，ZHANGZhongyi2*

(1.HuaqiaoUniversity，Xiamen361021，China；2.FujianAgricultureandForestryUniversity，F(xiàn)uzhou350002，China；3.GuangxiBotanicalGardenofMedicinalPlants，Nanning530023，China)

Anoectochilusroxburghiiis a rare folk medicinal plant in China with a long application history in Fujian and Taiwan region and has several functions，including liver protection，hypoglycemic，anti-hyperlipidemia and anti-inflammatory activities.A.roxburghiihas drawn widespread attention in recent years because of the good clinical efficacy.This article reviewed the recent researches on the origin，tissue culture and scale manufacture，cultivation，symbiotic fungus and quality control ofA.roxburghii.And the problems to solve for future work are prospected.

Anoectochilusroxburghii，quality control，origin

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.3.011

2014-10-24)

廣西藥用資源保護與遺傳改良重點實驗室開放基金資助(2014)

*

張重義，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向：中藥資源可持續(xù)利用研究；Tel：(0591)83742793，E-mail：hauzzy@163.com