王建波，曲 怡，張立德

(遼寧中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)臟象理論及應(yīng)用省部共建教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，遼寧 沈陽(yáng)110847)

大鼠是針刺實(shí)驗(yàn)研究時(shí)最常見的研究對(duì)象，由于其繁殖速度較快、取材方便、與人的DNA 基因序列相似等優(yōu)點(diǎn)獲得了大多實(shí)驗(yàn)者的青睞。但是由于針刺對(duì)大鼠刺激性較大，加之其性情兇猛，如果在實(shí)驗(yàn)時(shí)不能安全有效的固定，則會(huì)使實(shí)驗(yàn)者受傷，增加患疾病的風(fēng)險(xiǎn)［1］?，F(xiàn)在最常用的固定大鼠的方法有:捆綁固定、器械固定、手部抓取固定等［2］。而針灸由于其持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)、療程期間長(zhǎng)等特點(diǎn)，要求實(shí)驗(yàn)中必須使用捆綁固定法。如何正確而有效地固定大鼠，使針刺達(dá)到一個(gè)良好的效果是筆者下面研究的主要內(nèi)容。

1 大鼠的固定需要遵照動(dòng)物原則

關(guān)于大鼠的固定要求我們遵照動(dòng)物實(shí)驗(yàn)福利原則，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利原則的內(nèi)容就是保護(hù)動(dòng)物不受虐待并受到合理的照料，讓動(dòng)物享有不受饑餓、生活舒適、不受痛苦傷害和疾病威脅、生活無(wú)恐懼和悲傷、表達(dá)天性的五大自由。而動(dòng)物倫理這一話題已經(jīng)越來(lái)越被政府和民間所關(guān)注，故我國(guó)國(guó)家科學(xué)技術(shù)部于2006 年頒布了《關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的指導(dǎo)意見》，提出在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物過程中要用替代、減少和優(yōu)化3R 原則。替代(replacement)原則即采用低等實(shí)驗(yàn)動(dòng)物替代高等實(shí)驗(yàn)動(dòng)物做實(shí)驗(yàn);減少(reduction)原則即減少動(dòng)物用量;優(yōu)化原則即優(yōu)化設(shè)計(jì)和操作等實(shí)驗(yàn)過程，使動(dòng)物的痛苦減輕［3-6］。

所以在針刺實(shí)驗(yàn)的過程中必須遵循這些實(shí)驗(yàn)動(dòng)物原則，盡量避免或減少一些不必要的動(dòng)物刺激，減輕動(dòng)物的痛苦。

2 大鼠的固定方法與針刺思路

關(guān)于大鼠針刺固定方法的文獻(xiàn)比較少，對(duì)于大鼠的針刺研究也難以找到一種行之有效的方法，因此實(shí)驗(yàn)研究者們不得不選擇只針刺大鼠下肢穴位、針刺大鼠背部穴位或者將大鼠麻醉后再行針刺。但是這些方法給人們的實(shí)驗(yàn)造成了很大的影響:以高血壓大鼠的研究為例，如果需要研究針刺曲池與足三里對(duì)大鼠血壓的影響，難道由于同時(shí)針刺大鼠四肢的困難而只選取下肢穴位么?如果采取麻醉后再行針刺，那么麻醉會(huì)不會(huì)對(duì)針灸效應(yīng)造成某種干擾?麻醉的劑量失誤會(huì)不會(huì)造成大鼠死亡?針對(duì)這些問題，筆者研究出一種行之有效的固定大鼠辦法，以供各位同仁參考。

2.1 固定材料與方法

2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料 深色柔軟度好并且比較厚的襪子;邊緣為鋸齒狀的兔臺(tái);橡皮筋若干。

2.1.2 大鼠頭套的制作 用剪刀將襪子從腳跟處剪成兩截，取前半截作為頭套備用;將前半截從襪子中央左右各開一小孔以可以取出大鼠前肢為標(biāo)準(zhǔn)。

2.1.3 固定方法 此法需要兩人合作。首先采取好保護(hù)措施，用手捏住大鼠耳后以及頸部皮膚，以大鼠頭部不能左右轉(zhuǎn)動(dòng)為標(biāo)準(zhǔn);合作者用兩只手的拇指與食指分別從做好的襪子洞中伸出，抓住大鼠前肢從洞中掏出并抻直前肢，利用大鼠喜暗喜鉆洞的特性將襪套戴在大鼠頭上。此時(shí)由于大鼠上肢被固定，無(wú)法襲擊到實(shí)驗(yàn)人員，保證了實(shí)驗(yàn)過程的安全性。然后用雙手分別從大鼠兩側(cè)腋下穿過，固定大鼠上肢并用拇指固定住大鼠的頭部。最后用橡皮筋將大鼠的四肢分別固定在兔臺(tái)的鋸齒上。

此時(shí)由于橡皮筋的張力，大鼠四肢充分展開，可方便的進(jìn)行大鼠四肢部位的針灸操作。通過上述固定方法的使用，大鼠得到了比較好的固定，整個(gè)環(huán)節(jié)得以安全快捷的完成，并且沒有發(fā)生實(shí)驗(yàn)人員被襲擊的現(xiàn)象，整個(gè)過程大鼠比較平靜，符合實(shí)驗(yàn)倫理學(xué)的要求［7］。

2.1.4 釋放大鼠的方法 由于電針強(qiáng)烈刺激的原因，大鼠在針刺結(jié)束時(shí)處于攻擊性極強(qiáng)、極度暴躁的狀態(tài)。故在釋放大鼠時(shí)要采取相應(yīng)的防護(hù)措施以防止被攻擊。應(yīng)參照固定大鼠的方法，用手同時(shí)捏住襪子以及耳后及背部的皮膚，防止大鼠襲擊實(shí)驗(yàn)者。然后協(xié)助人員負(fù)責(zé)解開固定大鼠四肢的橡皮筋，最后操作人員用一只手抓住大鼠尾巴，將大鼠從襪套中抽出放回籠中。注意全程的動(dòng)作要迅捷。

2.2 針刺思路

2.2.1 大鼠的體位選擇 在上述方法過程中共可選擇兩種大鼠體位，即仰臥位與俯伏位?？梢詽M足針刺大鼠絕大多數(shù)穴位的需求。

2.2.2 大鼠的穴位 針刺大鼠時(shí)要嚴(yán)格按照《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》中規(guī)定的大鼠穴位要求針刺。要求針灸針的購(gòu)買要細(xì)、短、柔韌性強(qiáng)，以眼針用針灸針最為適宜。

2.2.3 大鼠的電針針刺電流大小及頻率 以實(shí)驗(yàn)者的實(shí)驗(yàn)要求為準(zhǔn)。

3 討論

這種大鼠固定方法可以保護(hù)實(shí)驗(yàn)人員的安全，減少的實(shí)驗(yàn)人員被襲擊的風(fēng)險(xiǎn)，對(duì)大鼠刺激和傷害比較小，減少大鼠應(yīng)激反應(yīng)，且制作簡(jiǎn)單，操作方便，兩名實(shí)驗(yàn)者即可順利操作，且可以針刺到絕大多數(shù)穴位，滿足實(shí)驗(yàn)者的需要，為眾多進(jìn)行大鼠針刺實(shí)驗(yàn)研究的人員拓寬了思路。

3.1 材料特點(diǎn)

這種固定方法裝置簡(jiǎn)便易尋，用兔臺(tái)、橡皮筋等簡(jiǎn)易工具即可達(dá)到一個(gè)良好的固定結(jié)果。工序簡(jiǎn)單，使用安全方便，并且容易消毒，效果極佳，極大的提高了針刺效率。

3.2 設(shè)計(jì)特點(diǎn)

在之前的報(bào)道中大鼠的固定裝置大多是由礦泉水瓶制成的，雖然簡(jiǎn)單方便，但是局限性很大，難以達(dá)到實(shí)驗(yàn)者對(duì)于大鼠四肢部位針刺的需求［8-11］。而本研究中的大鼠固定裝置可以固定大多數(shù)體型的大鼠，適合各種針刺穴位配伍需求，綁定牢固，保證了針刺大鼠時(shí)針灸效果的穩(wěn)定性。

3.3 不足之處

此法也有一定的不足之處:首先，這種辦法需要兩個(gè)人配合方可完成;其次，如果大鼠力量過大則可能掙開橡皮筋，對(duì)接下來(lái)的針刺造成很大的障礙，或者由于大鼠體型過大，在兔臺(tái)上不能完全伸展開四肢，為實(shí)驗(yàn)者的針灸造成了困難。在以后的研究中筆者將會(huì)逐步改進(jìn)這種方法，以達(dá)到一個(gè)良好的療效。

［1］ 張立穎，李亞潔.應(yīng)用大鼠進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的經(jīng)驗(yàn)和體會(huì)［J］.護(hù)理研究，2003，17(2):225

［2］ 劉恩岐，尹海林，薛智謀，等.醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)［M］.3 版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2004:123

［3］ 賀爭(zhēng)鳴，李冠民.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)替代方法概論［M］.北京:學(xué)苑出版社，2003

［4］ 王祿增，王捷，于海英.動(dòng)物暨實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利學(xué)法規(guī)進(jìn)展［M］. 沈陽(yáng):遼寧民族出版社，2004

［5］ 陳筱俠，譯.美國(guó)動(dòng)物福利法規(guī)匯編［M］. 上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2006

［6］ 中華人民共和國(guó)科學(xué)技術(shù)部. 關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的指導(dǎo)性意見(國(guó)科發(fā)財(cái)字［2006］398 號(hào))［R］.北京:科學(xué)技術(shù)部，2006

［7］ 楊國(guó)斌.生物醫(yī)學(xué)研究中實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理學(xué)問題的思考［J］.中國(guó)醫(yī)學(xué)倫理學(xué)，2010，23(3):10-13

［8］ 楊明智，陳積圣.一種大鼠抓取與固定的新工具介紹［J］.上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)，2001，21(3):171

［9］ 趙建文，曹偉平，銀歡，等.固定器的技術(shù)要求［J］. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)與管理，2006，23(3):65-66

［10］ 劉保新，陳廖斌，汪暉.介紹一種簡(jiǎn)易的大鼠固定裝置［J］.中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志，2008，18(3):75-76

［11］ 王凈凈，李振光，鄧元江，等. 自制簡(jiǎn)易套筒式大白鼠固定裝置［J］.臨床神經(jīng)電生理學(xué)雜志，2001(2):83