駱躍興 鄧秀美

（福建省南平市第二醫(yī)院，福建 南平 354200）

某區(qū)PCR法檢測HPV感染的臨床意義及分析

駱躍興 鄧秀美

（福建省南平市第二醫(yī)院，福建 南平 354200）

目的 探討閩北建陽區(qū)PCR-反向點(diǎn)雜交法在檢查患者HPV感染病變中的臨床意義及分析。方法 回顧性分析我院檢測的1624例HPV感染患者的臨床資料，采用PCR-反向點(diǎn)雜交法對(duì)病變標(biāo)本進(jìn)行HPV分型檢測。結(jié)果 共進(jìn)行1624次HPV分型檢測，檢出感染患者504例，檢出率為31.0%，感染較多的是16、52、58、81型，并以高危型感染為主。單種分型感染共346例，兩種及以上感染158例。結(jié)論 PCR-反向點(diǎn)雜交法在HPV感染的診斷率較高，特異性較強(qiáng)，對(duì)閩北地區(qū)HPV感染病變的早期發(fā)現(xiàn)，判斷預(yù)后及指導(dǎo)治療有重要價(jià)值。

反向點(diǎn)雜交法；人乳頭瘤病毒（HPV）；臨床價(jià)值

人乳頭瘤病毒，簡稱HPV，是一組病毒的總稱。目前，HPV感染的主要途徑是性接觸，根據(jù)感染的部位可以分為皮膚型HPV和生殖道上皮HPV，感染的早期患者的局部皮膚、黏膜通常都會(huì)形成疣狀增生，像生殖器部位的尖銳濕疣，甚至可能引起宮頸癌的發(fā)生。從高危型HPV的持續(xù)感染到一般的宮頸癌前病變最終發(fā)展為宮頸癌大約需要5～10年[1]。在早期通過檢測手段發(fā)現(xiàn)亞臨床及潛伏性HPV感染。本次采用PCR-反向點(diǎn)雜交法對(duì)我院就診HPV感染患者進(jìn)行HPV分型檢測，現(xiàn)總結(jié)報(bào)道如下。

1　資料與方法

1.1標(biāo)本來源：回顧性分析建陽區(qū)我院檢測的1624例HPV感染患者的臨床資料，男5例，女1619例，年齡18～56歲，平均年齡（36.2± 4.23）歲，病程為0.5～9個(gè)月，平均病程（3.1±0.67）個(gè)月，所有患者均有性生活史，均有不同程度的瘙癢，其中男性常見于冠狀溝、包皮內(nèi)板、龜頭、系帶及肛門周圍，女性常見于大小陰唇、陰道口、陰道內(nèi)及會(huì)陰處。

1.2儀器與試劑：高速離心機(jī)（Thermo-2），基因擴(kuò)增儀（Hema9600），恒溫雜交儀（YN-H16），各種小型器材，人乳頭瘤病毒基因分型（23型）檢測試劑盒，包括高危型和低危型，購自亞能生物技術(shù)有限公司。

1.3HPV DNA提取與檢測

1.3.1標(biāo)本采集：本次實(shí)驗(yàn)的標(biāo)本為采集患者泌尿道分泌物，外陰贅生物、潰瘍處分泌物和組織液等。男性患者用咽拭子采集尿道分泌物，女性患者以專用宮頸脫落細(xì)胞采集器（宮頸刷）進(jìn)行采集，將宮頸刷置于宮頸口，單方向旋轉(zhuǎn)4～5周以獲得足量的上皮細(xì)胞樣本，然后將宮頸刷頭部放入提取緩沖液管中，沿刷柄折痕處將宮頸刷柄折斷，旋緊管蓋，并保持提取緩沖液管直立送檢。

1.3.2實(shí)驗(yàn)過程：將送檢的標(biāo)本充分洗脫后取1 mL液體轉(zhuǎn)移到離心管中于13000 r/min離心10 min后棄去上清液，加入裂解液懸浮沉淀，沸水浴加熱再離心，上清液作提取樣本DNA。再進(jìn)行PCR擴(kuò)增、雜交、洗膜、顯色，并觀察結(jié)果。每次實(shí)驗(yàn)設(shè)置一個(gè)陰性質(zhì)控和一個(gè)陽性質(zhì)控，作為質(zhì)量控制[2]。

1.3.3結(jié)果判讀：根據(jù)膜條上藍(lán)色斑點(diǎn)顯現(xiàn)的位置，讀取相應(yīng)位。僅一個(gè)基因型位點(diǎn)出現(xiàn)藍(lán)色班點(diǎn)，則為相應(yīng)基因型單一感染；多個(gè)基因型位點(diǎn)出現(xiàn)藍(lán)色斑點(diǎn)，則為相應(yīng)基因型的混合感染；檢測位點(diǎn)無顯色信號(hào)，則為陰性或低于檢測限[3]。

2　結(jié) 果

本次檢測HPV陽性患者504例（31.0%）。各型均有檢測出感染，單型感染患者346例（68.7%）；混合型感染158例（31.3%）；其中高危型381例，占75.6%，高危型感染以16、52、53、58型感染較多；低危型123例，占24.4%，低危型感染以42、43、81型感染較多。

病理診斷顯示，12例陰道內(nèi)損害，呈乳頭狀，5例小陰唇損害，呈絲狀。年齡段情況比較，感染高峰人群為30～39歲，其次20～29歲，達(dá)到40歲以后感染率驟然減少，見表1。

3　討 論

隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的不斷發(fā)展，性傳播類的疾病發(fā)病率越來越高，通過生殖道傳播、感染的HPV的概率也不斷增多，目前，流行病學(xué)和分子生物學(xué)的研究結(jié)果說明，人乳頭狀瘤病毒和宮頸癌、癌前病變都存有密切的聯(lián)系[4]。人乳頭狀瘤病毒也是引發(fā)宮頸癌的主要病毒，雖然感染HPV的患者在臨床上沒有明顯的癥狀，或處于一種亞臨床感染，但是會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重的后果發(fā)生，病死率較高，嚴(yán)重影響了患者的生活質(zhì)量。PCR-反向點(diǎn)雜交法通過PCR體外的擴(kuò)增及DNA反向點(diǎn)雜交技術(shù)相結(jié)合，分子雜交的特異性較高，屬于HPV檢測的新方法，提高了檢測的敏感性[5]。

本院采用PCR-反向點(diǎn)雜交法可對(duì)患者分泌物進(jìn)行基因分型，了解各型感染情況，總檢出率達(dá)31.0%。本研究表明HPV感染高峰人群為30～39歲，這可能與此階段年齡婦女性生活頻繁、忽略性行為衛(wèi)生及個(gè)人衛(wèi)生習(xí)慣、生活工作壓力大等原因有關(guān)，而達(dá)到40歲以后感染率又驟然減少。在所有檢測HPV型別中，以高危型HPV感染為主。已有研究表明，高危型HPV感染且年輕化是影響宮頸癌發(fā)生的發(fā)生的重要因素[6]。

PCR-反向點(diǎn)雜交法檢測HPV結(jié)合臨床表現(xiàn)及病理細(xì)胞學(xué)檢查，診斷率高，特異性強(qiáng)，對(duì)HPV感染病變的早期發(fā)現(xiàn)，判斷預(yù)后及治療有重要價(jià)值，對(duì)降低宮頸癌的發(fā)病率有重要的指導(dǎo)意義。

[1] 向華國，黎國，曾錦婷，等.PCR-反向點(diǎn)雜交技術(shù)在女性下生殖道人乳頭瘤病毒感染分型檢測的應(yīng)用研究[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2012，33(8):916-917.

[2] 徐閩，李靜，張婷婷，等.人乳頭瘤病毒分型聯(lián)合TCT檢測及宮頸活檢對(duì)宮頸癌早期診治的臨床應(yīng)用分析[J].河北醫(yī)藥，2014，(6):841-844.

[3] 黃佩芬，陳蓮芬，甘釗杏.高危型HPV感染與宮頸癌前病變及宮頸癌的相關(guān)性研究[J].中國當(dāng)代醫(yī)藥，2013，20(9):54-55.

[4] 邵佳，陳曾燕，王潔，等.實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測宮頸癌患者血漿HPV的臨床意義[J].中國腫瘤外科雜志，2010，2(5):288-291.

[5] 章濤，李彥，肖瑜.宮頸疾病HPV亞型感染的導(dǎo)流雜交法檢測及意義[J].中國婦幼保健，2009，24(8):1126-1129.

[6] 陳昕華，周蓓蓓，虞斌，等.高危型HPV檢測在宮頸病變篩查中的臨床應(yīng)用[J].中國婦幼保健，2010，25(7):898-899.

The Clinical Significance and Diagnostic Value of PCR- Reverse Dot Blot Hybridization in HPV Infection Lesions Inspection in North Fujian

LUO Yue-xing， DENG Xiu-mei
（The Second Hospital of Nanping， Nanping 354200， China）

Objective To investigate the clinical significance and diagnostic value of PCR-reverse dot blot hybridization in HPV infection lesions inspection. Method Clinical data of 1624 cases of HPV-infected patients checked in our hospital retrospectively. All the patients used PCR-reverse dot blot hybridization to type test HPV of pathological specimens. Result The 1624 cases of HPV-infected patients type were tested by PCR-reverse dot blot hybridization， there were 504 infected cases， the detection rate was 31.0%. Among them， the infections of 16， 52， 58， 81 type occurred in a higher proportion， and the 346 were high-risk infections， which were most single type of infection. The amount of cases which infected by two or more types was 158. Conclusion PCR-reverse dot blot hybridization is high diagnosis rate in HPV infection and strong specificity， and might be of important significance in early detection of disease infection， diagnosis and guiding treatment.

PCR-reverse dot blot hybridization； HPV； Clinical significance

R737.33

B

1671-8194（2015）34-0089-02