戴慧賢 童惠貞 劉瀟瀟

廣東省食品藥品檢驗所，廣東 廣州 510180

HPLC法測定兒童清肺丸中鹽酸麻黃堿與鹽酸偽麻黃堿的含量

戴慧賢 童惠貞 劉瀟瀟

廣東省食品藥品檢驗所，廣東 廣州 510180

目的：建立兒童清肺丸中鹽酸麻黃堿與鹽酸偽麻黃堿的含量測定方法。方法：采用HPLC法，色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈－0.1%磷酸溶液（4：96）為流動相；檢測波長為206nm。結果：鹽酸麻黃堿與鹽酸偽麻黃堿分別在0.0005～0.1000 mg／ml（r＝1.0000）、0.0005～0.1009 mg／ml（r＝1.0000）范圍內(nèi)線性關系良好；加樣回收率鹽酸麻黃堿為96.7%，RSD為0.7%（n＝6），鹽酸偽麻黃堿為97.3%，RSD為1.5%（n＝6）。結論：本方法簡單、準確、重現(xiàn)性好，可用于制劑中鹽酸麻黃堿與鹽酸偽麻黃堿的含量測定。

高效液相色譜法；兒童清肺丸；鹽酸麻黃堿；鹽酸偽麻黃堿

兒童清肺丸由麻黃、炒苦杏仁、石膏等27味藥材組成，具有清肺解表，化痰止嗽的功效，臨床用于小兒風寒外束、肺經(jīng)痰熱所致的面赤身熱、咳嗽氣促、痰多黏稠、咽痛聲?。?］?，F(xiàn)代藥理研究表明，兒童清肺丸具抑菌、解熱、抗炎鎮(zhèn)咳、化痰等藥理功效［2］。麻黃為方中君藥，通過測定麻黃中的主要成分鹽酸麻黃堿與鹽酸偽麻黃堿的含量，能更好地控制藥品的內(nèi)在質量。國家食品藥品監(jiān)督管理局數(shù)據(jù)庫信息顯示［3］，該品種有共6個國家批準文號，兩種劑型規(guī)格，分別為大蜜丸和水蜜丸。本文建立適用于上述兩種劑型中鹽酸麻黃堿與鹽酸偽麻黃堿含量測定的方法。

1 儀器與材料

1.1 儀器 安捷倫1260、1100高效液相色譜儀（G1315B型二級陣列檢測器DAD）；Sartoriu CP224S、CP225D電子天平；KQ－300DA型數(shù)控超聲波清洗儀。

1.2 材料 鹽酸麻黃堿對照品（批號：171241－200506）、鹽酸偽麻黃堿對照品（批號：171237－200304）均購于中檢院。兒童清肺丸（大蜜丸，批號：2013454、1013590、0013174、1013575、2031365、2013362、2013107、1013591，北京同仁堂；批號：295138、295206、295235、195309，承德頸復康藥業(yè)。水蜜丸，批號：L08001、L08002、L08003，敬修堂藥業(yè)）；陰性對照樣品，由廣東省食品藥品檢驗所按兒童清肺丸處方 （缺麻黃）照制法模擬制備。乙腈為色譜純，水為超純水，其它試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱：Aglient Zorbax SB（250mm× 4.6mm，5μm）；流動相：乙腈－0.1%磷酸溶液（4：96）；檢測波長：206nm。理論板數(shù)按鹽酸麻黃堿峰計算應不低于3000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 供試品溶液的制備 取裝量差異項下的水蜜丸，粉碎，取約3.4g，精密稱定；或取重量差異項下的大蜜丸，剪碎，混勻，取約6g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入水100ml，稱定重量，加熱回流30min，放冷，用水補足減失的重量，搖勻，離心，精密量取上清液50 ml，加濃氨試液2m l，搖勻，用乙醚振搖提取3次，每次50ml，合并乙醚提取液，加入鹽酸乙醇溶液（5→100）2ml，混勻，減壓回收乙醚或揮盡乙醚，殘渣加水使溶解，并轉移至10ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，放置24h后，過濾，取續(xù)濾液，即得。

2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取鹽酸麻黃堿與鹽酸偽麻黃堿對照品適量，加水制成每1m l含鹽酸麻黃堿10μg、鹽酸偽麻黃堿5μg的溶液，即得。

2.2.3 陰性樣品溶液的制備 取陰性樣品適量，按“2.2.1”下的方法制備，即得。

2.3 線性考察 分別精密吸取不同濃度的對照品溶液 （鹽酸麻黃堿對照品溶液濃度分別為：0.1000、0.0250、0.0050、0.0025、0.0075mg／m l；鹽酸偽麻黃堿對照品溶濃度分別為：0.1009、0.0252、0.0050、0.0025、0.0076、0.0005 mg／ml）各10μl注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定峰面積，以進樣量（mg／m l）（X）為橫坐標，峰面積（Y）為縱坐標，鹽酸麻黃堿的線性回歸方程為：y＝23139x－2.3241，r＝1.0000、鹽酸偽麻黃堿的線性回歸方程為：y＝23455x－3.9017，r＝1.0000。結果表明鹽酸麻黃堿在0.0005～0.1000 mg／ml的范圍內(nèi)，鹽酸偽麻黃堿在0.0005～0.1009 mg／ml的范圍內(nèi)，線性關系良好。

2.4 精密度試驗 精密吸取對照品混合溶液20μl，連續(xù)進樣6次，測定峰面積，鹽酸麻黃堿與鹽酸偽麻黃堿的RSD分別為0.3%、0.1%。說明儀器的精密度良好。

2.5 重復性考察 大蜜丸：取同一批樣品（批號295206）10丸，剪碎，混勻，取6份，每份約6g，精密稱定，按含量測定的方法制備供試品溶液。按擬定的色譜條件測定，鹽酸麻黃堿與鹽酸偽麻黃堿的重復性RSD分別為1.4%（n＝6）與1.6%（n＝6）。表明說明本方法重現(xiàn)性良好。

水蜜丸：行了簡化驗證，取同一批樣品 （批號L08002）粉碎，取3份，每份取約3.4g，精密稱定，按含量測定的方法制備供試品溶液按擬定的色譜條件測定，鹽酸麻黃堿重復性RSD為0.3%（n＝3），鹽酸偽麻黃堿重復性RSD為0.3%（n＝3）。表明說明本方法重現(xiàn)性良好。

2.6 加樣回收率試驗 大蜜丸：取同一批已知含量的樣品（批號295206）6份，按照樣品含量的100%將鹽酸麻黃堿與鹽酸偽麻黃堿對照品溶液加入到樣品中，按擬定的方法進行提取與測定。由表1可知，該方法的準確度較好。

水蜜丸：進行了簡化驗證，取同一批已知含量的樣品（批號L08002，敬修堂藥業(yè)提供）適量，粉碎，混勻，取3份，按照樣品含量的100%將鹽酸麻黃堿與鹽酸偽麻黃堿對照品溶液加入到樣品中，按擬定的方法進行提取與測定。由表2可知，該方法的準確度較好。

2.7 專屬性 按樣品制法同法制成麻黃的陰性對照樣品，吸取對照品溶液與麻黃陰性對照溶液各20μl、供試品溶液10～20μl，注入液相色譜儀，結果表明陰性對照無干擾，結果見圖1。

2.8 穩(wěn)定性 取三批不同企業(yè)提供的樣品 （批號：L08003、2031365、195309），按樣品制備方法制備供試品溶液，精密吸取10～20μl注入液相色譜儀（批號為L08003進樣10μl，批號為2031365、195309進樣20μl），每隔2小時進樣一次，記錄鹽酸麻黃堿與鹽酸偽麻黃堿的峰面積，以進樣時間間隔 （小時）為橫坐標，以峰面積為縱坐標，作圖，結果見圖2。結果表明，隨著放置時間的增加，兩種被測成份峰面積在不斷增加，到24小時后基本穩(wěn)定，從24小時到60小時供試品溶液中鹽酸麻黃堿與鹽酸偽麻黃堿的峰面積基本穩(wěn)定，故建議標準中供試品溶液放置24小時后測定。

2.9 樣品含量測定 取兒童清肺丸共15批樣品（大蜜丸12批，水蜜丸3批），照擬定的含量測定方法測定鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿含量，結果見表3。

3討論

樣品處方復雜，且麻黃的含量較低，折算成品含麻黃的量為大蜜丸0.064g／g，水蜜丸為0.0114 g／g，因此供試品溶液提取與凈化要求較高。研究參照相關文獻［1，4－5］，分別了比較了以水、甲醇、濃氨試液－乙醇－乙醚混合溶液（2∶5∶50）、0.5mol／L的硫酸溶液為提取溶劑，凈化方法又分別比較了使用中性氧化鋁柱、堿化后乙醚萃取等方法，結果以水為提取溶劑，加熱回流提取后放冷，提取液堿化后以乙醚萃取得到的色譜圖與含量結果最為理想。

分別對供試品取樣量、提取時間、濃縮方式、加濃氨試液的量、加濃氨試液后放置時間、萃取次數(shù)等對供試品溶液提取存有影響的各個因素進行了考察，通過分析比較，選定最優(yōu)條件為供試品溶液的制備方法。

流動相的選擇，分別比較了以下四種流動相：①乙腈－0.1%磷酸溶液（4∶96）［5］；②：乙腈－0.2%磷酸溶液（含0.3%三乙胺）（4∶96）［6］；③：乙腈－0.1%磷酸溶液（含0.05%三乙胺）（4∶96）；④：乙腈－0.092%磷酸溶液（含0.04%三乙胺和0.02%二正丁胺）（2：98）［1］。

結果乙腈－0.1%磷酸溶液（4∶96）在供試品色譜圖中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿峰達到基線分離，塔板數(shù)分別為14948、16724，分離度為4.08，峰形對稱，保留時間適中，得到的色譜圖最為理想，因此選擇乙腈－0.1%磷酸溶液（4∶96）為流動相。

用二極管陣列檢測器對鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿進行掃描，以乙腈－01%磷酸溶液（4∶96）為流動相，結果鹽酸麻黃堿在206nm處有最大吸收，鹽酸偽麻黃堿在204nm處有最大吸收。故選用206nm為檢測波長。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典 （一部）［M］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

［2］黃萍，吳清和，榮向路，等.兒童清肺丸藥效學研究 ［J］.中藥新藥與臨床藥理，2001，12（1）：29－31

［3］國家食品藥品監(jiān)督管理局網(wǎng)絡數(shù)據(jù)庫［DB／OL］.http：／／www.sfda. gov.cn／WS01／CL0001／.

［4］YBZ25192005.克咳片［S］.國家食品藥品監(jiān)督管理局.

［5］楊秀珍.HPLC測定肺寧合劑鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿含量［J］.中國中醫(yī)藥信息雜志，2002，19（12）：54－55.

［6］陽志云，饒偉文.HPLC法測定麻黃中鹽酸麻黃堿及鹽酸偽麻黃堿的含量［J］.首都醫(yī)藥，2010.16（2）；53－54.

R284.1

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1007－8517（2015）16－0017－03

2015.05.01）