施赫赫

1，2，陳 淦2，劉 科1，劉運忠3，王緒敏4，高 翔5，賀爭鳴6，余細勇7，賴良學8，唐小江1

(1．廣東省醫(yī)學實驗動物中心，廣東佛山 528248;2．廣東貝格生物科技有限公司，廣東佛山 528100;3．廣州醫(yī)藥工業(yè)研究總院，廣州 510240;4．中國科學院北京基因研究所，北京 100101;5．南京大學模式動物研究所，南京 210061;6．中國食品藥品檢定研究院實驗動物資源研究所，北京 100050;7．廣東省醫(yī)學科學院，廣州 510060;8．中國科學院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院，廣州 510530)

我國具有豐富的小型豬資源，數(shù)十家機構(gòu)對近10種小型豬開展了實驗動物化研究，培育出五指山小型豬、版納微型豬、貴州小型豬、巴馬小型豬、中國農(nóng)大小型豬、西藏小型豬、蕨麻小型豬等實驗用小型豬［1－7］，但我國至今尚未建立可穩(wěn)定供應的實驗動物用小型豬品種。與國外知名的小型豬如哥廷根小型豬等［8］相比，我國實驗用小型豬的標準化研究和繁育、規(guī)模化生產(chǎn)與供應都存在巨大的差距，難以滿足日益增長的動物實驗需求。與國外采取雜交選育的培育方法不同，我國實驗用小型豬大多采取自然形成的封閉群選育，因此，良好的種源成為實驗動物化的基礎(chǔ)，而“體型小、體重輕、性情溫馴、表型一致”是關(guān)鍵。本課題組在廣西融水縣苗寨發(fā)現(xiàn)了一種體型小、性情溫馴的小黑豬。在廣東貝格生物科技有限公司和廣東省醫(yī)學實驗動物中心的支持下，我們于2012年5月將該品種引種到廣東佛山三水樂平鎮(zhèn)的小型豬基地進行實驗動物化研究，現(xiàn)將系列研究情況作一概述。

1 融水小型豬的種源

融水小型豬的種源來自廣西壯族自治區(qū)融水縣桿洞鄉(xiāng)百秀村苗寨。該豬在當?shù)乇环Q為“香豬”、“大苗山香豬”、“苗豬”、“融水黑香豬”等。該苗寨地處崇山峻嶺之中，交通十分不便，因此該豬是近親繁殖，基本沒有引入外來基因，經(jīng)過數(shù)千年繁育，遺傳性狀穩(wěn)定，屬于自然形成的典型封閉群，目前尚無該豬種質(zhì)資源特性的研究報道。

2 保種區(qū)選址與硬件設(shè)施建設(shè)

融水小型豬研究基地(廣東省醫(yī)學實驗動物中心小型豬基地)位于佛山市三水區(qū)樂平鎮(zhèn)所轄林地，占地約200畝，四面樹林環(huán)繞，自成天然防疫屏障，空氣質(zhì)量良好，遠離居民點。地理位置滿足衛(wèi)生防疫安全、生產(chǎn)物資的運輸需要?；卦O(shè)生產(chǎn)區(qū)、行政辦公區(qū)與后勤生活區(qū)三個功能區(qū)。生產(chǎn)區(qū)與行政辦公區(qū)、后勤生活區(qū)隔離分開，處于下風向，生產(chǎn)區(qū)內(nèi)設(shè)置種豬配種懷孕舍、分娩舍、保育舍，采用高床養(yǎng)殖(彩插12圖1)。

豬舍設(shè)計為磚墻全封閉式，隔熱瓦封頂，安裝抽風機;冬季保暖采用保溫燈、保溫墊板;門窗采用鋁合金，加裝防蚊紗窗、紗門和擋鼠板;排污采用環(huán)保處理，設(shè)計為雨水與糞尿污水分流;每一棟豬舍配備一個三級化糞池或沼氣池，將糞尿進行無害化處理和資源化利用。

3 融水小型豬種質(zhì)特性

3.1 體型外貌

融水小型豬體型外貌見彩插12圖2。該豬體軀矮小，被毛全黑，少量有唇白和肢端白。頭較大，面平直，額面有縱行皺紋，耳較小薄，略向前伸，稍下垂或兩側(cè)平伸。頸部短而細，背腰平直或微凹，腹較大下垂但不拖地，尾巴細長。母豬乳頭多為5～6對，少量能達到7對。后軀豐滿，四肢短細緊湊，肢端常見為臥系。

3.2 生長性能

融水小型豬生長緩慢，F(xiàn)1代雌雄仔豬6月齡、12月齡平均體重分別為 17．21±5．20 Kg和 16．35±5．23 Kg，26．97 ±6．49 Kg 和 26．53 ± 5．65 kg，詳見另文報道。3年齡的空懷母豬平均體重44．60 kg。

3.3 繁殖性能

母豬發(fā)情癥狀明顯，一個情期的自然交配受孕率較高，約88．3%;引進母豬配種后妊娠期平均112 d，初產(chǎn)平均胎產(chǎn)仔6．1頭，活仔數(shù)5．9頭;經(jīng)產(chǎn)平均產(chǎn)仔 7．9頭，活仔數(shù) 5．9頭。仔豬 45～60 d齡斷奶。

4 實驗動物化系列研究

4.1 常規(guī)指標的測定

按照《實驗動物哺乳類實驗動物的遺傳質(zhì)量控制》的要求［9］，開展了實驗動物化系列研究，包括4月齡和12月齡融水小型豬的血液學、血清生化指標分析，對F1代從初生至12月齡進行連續(xù)跟蹤測量體重及體尺值，測定指標包括:體重、體長、體高、胸圍、管圍、腿臀圍、胸深、胸寬、嘴裂長度［10］。采用淋巴細胞培養(yǎng)法進行染色體分析，測得常染色體18對，性染色體1對。測定了臟器重量及臟器系數(shù)、尿液生化及其他基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。以上研究詳見另文報道。

4.2 質(zhì)量控制研究

參考實驗用小型豬北京地方標準［11］，對保種群進行質(zhì)量控制研究，包括微生物學、寄生蟲學、病理學、配合飼料、環(huán)境設(shè)施和遺傳質(zhì)量控制六方面。

4．2．1 微生物學:隨機選擇23頭融水小型豬，經(jīng)常規(guī)免疫程序免疫后的，檢測豬瘟抗體、藍耳抗體，結(jié)果均呈陽性反應，說明豬群獲得免疫性保護。隨機選擇61頭融水小型豬進行圓環(huán)病毒抗體檢測，結(jié)果均為陰性，說明該豬群沒有受圓環(huán)病毒感染。

4．2．2 寄生蟲學:經(jīng)過定期(3個月一次)給予體內(nèi)外驅(qū)蟲藥后，進行體表寄生蟲檢測，未發(fā)現(xiàn)體外寄生蟲，弓形蟲未檢測。

4．2．3 飼料:生長料，哺乳料及維持料與飼料廠家合作，根據(jù)北京地方標準制作，開食料采用廠家提供的教槽料。

4．2．4 組織病理學:對4頭健康的融水小型豬(4月齡，雌雄各半)進行解剖，做組織病理切片，作為融水小型豬在疾病診斷時的正常對照，詳見另文報道。

4．2．5 環(huán)境及設(shè)施:飼養(yǎng)環(huán)境為普通級，豬舍為全封閉建造，門窗加裝防蚊紗窗，防鼠擋板。濕簾通風系統(tǒng)和局部保溫燈控制舍內(nèi)溫濕度，夏天溫度最高控制在28℃ ～30℃，冬天溫度最低控制在16℃ ～20℃，新生仔豬局部小環(huán)境通過使用保溫電熱板和保溫箱，溫度32℃ ～35℃，減少仔豬的寒冷應激。

4．2．6 遺傳質(zhì)量控制:對融水小型豬線粒體DNA測定分析，并與國內(nèi)外多個豬種比較發(fā)現(xiàn)，融水小型豬比已知的蘭嶼豬更為古老，詳見另文報道。另外，融水小型豬的全基因測序工作已經(jīng)完成，目前正在進行分析工作，將進一步闡明其與貴州香豬等其他豬種遺傳關(guān)系。

5 討論

小型豬是一種理想的實驗動物，在解剖學、生理學、疾病發(fā)生機理等方面與人極為相似，在生命科學研究領(lǐng)域中具有重要的實際應用價值。未來發(fā)展中可以成為在基因組學、高密度生物學、轉(zhuǎn)基因技術(shù)、體外毒理學和相關(guān)技術(shù)方面有發(fā)展前景的平臺［12］。美國明尼蘇達大學于1949年開始了小型豬方面的研究，其后德國、日本、法國也先后培育出小型豬品系。美國培育的小型豬品系有明尼蘇達－荷曼系(Minnesota－Hormel)、皮特曼 － 摩爾系(Pitman－Moore)、亨浮額德系(Hanford)、尤卡坦(Yucatan)種;德國培育的哥廷根(Gottingen)小型豬;日本培育的小型豬品系有阿米尼種(Oh mini)、克勞恩咪尼系(Clawn mini)和、會津系(Huei－Jin)和微型迷你豬(Microminipig)，法國培育的小型豬品系有科西嘉系(Corsica)，并廣泛應用于生物醫(yī)學研究［13－20］。目前哥廷根小型豬是國際公認的最佳醫(yī)用模式動物之一，獲得全世界醫(yī)藥管理機構(gòu)認可。目前，哥廷根小型豬種群保種在三個國家，形成了3個丹麥種，1個美國種和1個德國種［21］。

我國小型豬的培育工作起步晚，80年代初才開始對小型豬資源進行調(diào)查和實驗動物化研究，與國外先進國家相比落后了幾十年。但我國具有豐富而又獨特的小型豬資源，經(jīng)過選育及實驗動物化研究，可適應生命科學研究多種需求，為生命科學研究提供完善及豐富的動物模型。北京農(nóng)業(yè)大學畜牧系教研室與實驗動物所從1985年開始研究選育我國自己的小型豬［22］。后來中國農(nóng)業(yè)科學院引入五指山豬，云南農(nóng)業(yè)大學從西雙版納引入版納微型豬，貴陽中醫(yī)學院從貴州黔東南苗族侗族自治州引入香豬，廣西農(nóng)業(yè)大學從巴馬瑤族自治縣引入巴馬香豬［23］。南方醫(yī)科大學從青藏高原地區(qū)引入藏豬［24］。

為了便于比較，我們繪制了國內(nèi)外主要9種小型豬［7，25－28］的體重變化曲線(封 3 圖 3)。融水小型豬的體重較輕，雌雄12月齡的體重分別僅為26．97 kg和26．53 kg，與哥廷根小型豬相當，體現(xiàn)了該品種“小”的特點。在繁殖性能方面，貝格豬初產(chǎn)仔數(shù)6．0頭，活仔數(shù) 5．8頭，經(jīng)產(chǎn)平均產(chǎn)仔 7．9頭，活仔數(shù)5．9頭，遠高于廣州地區(qū)西藏小型豬初產(chǎn)仔數(shù)2．3 頭，活仔 2．2 頭，經(jīng)產(chǎn) 5．7 頭，活仔 4．9 頭［29］，高于蕨麻小型豬產(chǎn)仔數(shù) 5．97 頭，活仔數(shù) 5．59 頭［30］;稍低于五指山小型豬初產(chǎn)仔數(shù)6．67頭，活仔數(shù)6．56 頭［31］;接近國外雜交繁育的 Gottingen 小型豬平均產(chǎn)仔數(shù)6．5頭［8］，說明融水小型豬繁育性能良好，可穩(wěn)定繁育、保種。

國外小型豬品種都是改良豬與未改良地方品種或野豬雜交育成的，而我國小型豬均產(chǎn)于偏遠山區(qū)，無外來豬種與之雜交，當?shù)厝肆晳T于將豬進行采用親子交配、兄妹交配等高度近交的自繁自養(yǎng)方式，外來豬種極難與之雜交，由此形成了封閉的小型豬群體，具有遺傳、表型更加穩(wěn)定、性成熟早、繁殖性能強、生長慢、體型矮小、性成熟早、抗逆性強等生物學特性，是理想的生物學研究模型［32］。融水小型豬具有上述特點，尤其是性情溫順的特點，在體重較輕時不僅可以抱起保定，成年后也容易固定?？梢灶A測，如果對融水小型豬進行定向選育，可能得到體型更小、性格溫馴的優(yōu)質(zhì)實驗用小型豬。

［1］ 張賀，王承利，王洋，等．小型豬動物模型在醫(yī)學領(lǐng)域中的研究應用［J］．中國畜牧獸醫(yī)，2012，39(7):263 －266．

［2］ 龐琳琳，張會永，楊關(guān)林．巴馬小型豬在醫(yī)學研究中的應用進展［J］．中國實驗動物學報，2014，22(1):94 －98．

［3］ 胡鵬飛，李向臣，關(guān)偉軍．五指山小型豬誘導多能干細胞的前景分析［J］．中國畜牧獸醫(yī)，2014，41(7):174 －177．

［4］ 王淑燕，霍金龍，潘偉榮，等．版納微型豬近交系 GHR基因克隆及生物信息學分析［J］．中國實驗動物學報，2014，22(1):48－56．

［5］ 吳曙光，鄧紅勇，王明鎮(zhèn)，等．貴州小型豬早期生長曲線擬合初步分析［J］．黑龍江畜牧獸醫(yī)，2013，8(上):63 －65．

［6］ 曾昭智，江濤，張錦紅，等．西藏小型豬實驗動物化初期生長繁殖性能研究［J］．黑龍江畜牧獸醫(yī)科技版，2011，2月(上):48－49．

［7］ 閔凡貴，潘金春，王希龍，等．蕨麻小型豬在廣東地區(qū)的適應性觀察［J］．家畜生態(tài)學報，2014，35(7):72 －77．

［8］ PeterA． McAnulty， Anthony D． Dayan， Niels－Christian Ganderup，et al．The MINIPIG in BIOMEDICAL RESEARCH［M］．Boca Raton London New York，CRC Press，2011:7．

［9］ 全國實驗動物標準化委員會．實驗動物哺乳類實驗動物的遺傳質(zhì)量控制 GB14923 －2010［S］，北京，2011．

［10］ 國家標準總局．GB 3038—82種豬檔案記錄［S］．1982－10－01．

［11］ 北京市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局．實驗用小型豬:微生物學等級及監(jiān)測DB11T 828．1－2011［S］;寄生蟲學等級及監(jiān)測 DB11T 828．2 －2011［S］;遺傳質(zhì)量控制 DB11T 828．3 －2011［S］;病理學診斷規(guī)范 DB11T 828．4－2011［S］;配合飼料 DB11T 828．5 －2011［S］;環(huán)境及設(shè)施 DB11T828．6 －2011［S］，2011－11－10發(fā)布，2012－03－01實施．

［12］ Roy Forster，Philippe Ancian，Merete Fredholm，et al．The minipig as a platform for new technologies in toxicology［J］．Journal of Pharmacological and Toxicological Methods．2010，62:227－235．

［13］ 馮書堂．我國小型豬資源實驗化培育及開發(fā)利用［J］．實驗動物科學，2007，24(6):111 －118．

［14］ http://snsfarms．com/．

［15］ http://www．criver．com/about－us/news－events/featured－stories/2014/minipig－strains－and－the－emergence－of－the－gottingen．

［16］ Jan R Linkenhoker，Tanya H Burkholder，CG Garry Linton，et al．Effective and Safe Anesthesia for Yorkshire and Yucatan Swine with and without Cardiovascular Injury and Intervention［J］．Journal of the American Association for Laboratory Animal Science，2010，49(3):344 －351．

［17］ Chak－Sum Ho，Gregory W．Martens，Max S．AmossJr，et al．Swine leukocyte antigen(SLA)diversity in Sinclair and Hanford swine［J］．Developmental and Comparative Immunology，2010，34:250－257．

［18］ NaokiKaneko， KatzuhikoItoh， AtsushiSugiyama， etal．Microminipig，a Non－rodent Experimental Animal Optimized for Life Science Research:Preface［J］．Journal of Pharmacological Sciences，2011，115:112 －114．

［19］ Hiroaki Kawaguchi， Noriaki Miyoshi， Naoki Miura， et al．Microminipig，a Non－rodent Experimental Animal Optimized for Life Science Research:Novel Atherosclerosis Model Induced by High Fat and Cholesterol Diet［J］．Journal of Pharmacological Sciences，2011，115:115 －121．

［20］ AtsushiSugiyama， YujiNakamura， YasukiAkie， etal．Microminipig，a Non－rodent Experimental Animal Optimized for Life Science Research:In Vivo Proarrhythmia Models of Drug－Induced Long QT Syndrome:Development of Chronic Atrioventricular Block Model of Microminipig［J］．Journal of Pharmacological Sciences，2011，115:122 －126．

［21］ HennerSimianer，F(xiàn)riederikeK?hn．Genetic management of the G?ttingen Minipig population［J］．Journal of Pharmacological and Toxicological Methods，2010，62:221 －226．

［22］ 李俊佑．小型豬［J］．延邊農(nóng)學院學報，1990，1:91 －93．

［23］ 魏泓．我國小型豬研究現(xiàn)狀［J］．中國實驗動物學，1997，7(4):252－255．

［24］ 顧為望，曾昭智，劉運忠，等．F1代西藏小型豬早期生長發(fā)育特點［J］，中國實驗動物學報，2006，14(4):307－310．

［25］ http://www．lasdr．cn/pages/resdata_dataview．jsp?id=10059100．

［26］ http://www．lasdr．cn/pages/resdata_dataview．jsp?id=10054195．

［27］ http://www．sinclairresearch．com．

［28］ http://minipigs．dk．

［29］ 龔寶勇，劉運忠，曾昭智，等．廣州地區(qū)西藏小型豬的繁殖行為學表現(xiàn)［J］．中國實驗動物學報，2006，41(4):315 －317．

［30］ 閔凡貴，潘金春，王希龍，等．蕨麻小型豬在廣東地區(qū)的適應性觀察［J］．家畜生態(tài)學報，2014，35(7):72 －77．

［31］ 閔凡貴，潘金春，袁文，等．封閉群五指山小型豬主要繁殖性狀的多重回歸與通徑分析［J］．中國畜牧獸醫(yī)，2011，38(12):145－148．

［32］ 王桂花，尹曉敏，趙德明，等．國內(nèi)外小型豬資源概況。中國比較醫(yī)學雜志，2009，19(2):71 －73．