張純濤 何媛 賈俊710038陜西省西安醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院

酶修復(fù)法在翼狀胬肉免疫組化中應(yīng)用的探索

張純濤 何媛 賈俊
710038陜西省西安醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院

目的：分析3種抗原修復(fù)方法在翼狀胬肉免疫組織化學(xué)染色過程中所得切片的優(yōu)劣。方法：分別用3種不同抗原修復(fù)方法包括微波修復(fù)、酶修復(fù)和高壓修復(fù)，對翼狀胬肉組織蠟塊的連續(xù)切片加抗TGF-ΒrⅡ抗體并染色。對所得切片的掉片結(jié)果進(jìn)行分析。結(jié)果：3種方法間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；微波修復(fù)與高壓修復(fù)，酶修復(fù)與高壓修復(fù)間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論：對翼狀胬肉組織進(jìn)行組織抗原修復(fù)的最佳選擇是酶修復(fù)法，掉片少，簡單易行，且沒有危險性。

翼狀胬肉；免疫組化；抗原修復(fù)

免疫組織化學(xué)利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑顯色以確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原（多肽和蛋白質(zhì)），并對其進(jìn)行定位、定性及定量的研究，是醫(yī)學(xué)中常用的研究方法?？乖迯?fù)是免疫組織化學(xué)染色過程中的關(guān)鍵一步，對以后的抗原抗體結(jié)合及染色劑結(jié)合都有較大影響?？乖迯?fù)有許多方法，微波修復(fù)比較常用。但在翼狀胬肉的免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)過程中，用3種抗原修復(fù)方法包括微波修復(fù)、酶修復(fù)和高壓修復(fù)，對翼狀胬肉組織中的抗原進(jìn)行修復(fù)，發(fā)現(xiàn)經(jīng)過酶修復(fù)的切片不易掉片，且簡單易行，現(xiàn)報告如下。

酶修復(fù)：滴0.1％胰蛋白酶溶液于玻片上，使溶液完全遮蓋組織，室溫下放置15 min。

高壓修復(fù)：先將高壓鍋里的液體煮沸騰，然后打開高壓鍋蓋，將載有玻片的鐵架子置于沸騰的水中，蓋好鍋蓋，待沸騰后再煮2 min，關(guān)火，自然冷卻約2.5 h。

統(tǒng)計學(xué)方法：所有數(shù)據(jù)采用SPSS 16.0進(jìn)行統(tǒng)計分析，計量資料用（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)；計數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)；P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。進(jìn)行χ2檢驗(yàn)：三者間比較χ2=25.625，P＜0.001差異有統(tǒng)計學(xué)意義；微波修復(fù)與酶修復(fù)間比較χ2=1.753，P＞0.05差異無統(tǒng)計學(xué)意義；微波修復(fù)與高壓修復(fù)間比較χ2=14.543，P＜0.001差異有統(tǒng)計學(xué)意義；酶修復(fù)與高壓修復(fù)間比較χ2= 22.556，P＜0.001差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

同一組織蠟塊均加抗TGF-βRⅡ（轉(zhuǎn)化生長因子-βⅡ型受體）抗體，各步驟均相同，只是抗原修復(fù)方法不同。

資料與方法

微波修復(fù)：配枸櫞酸100 mL+蒸餾水至1 000 mL，加入攪拌子在攪拌器上混勻，將切片立于塑料架上并置于溶液中，用保鮮膜封頂，扎4個眼，平放于微波爐中，依次經(jīng)高火9 min，低火9 min，取出來自然冷卻約2.5 h。

結(jié)果

結(jié)果判斷：將掉片面積大于整張片子的1/2記為掉片。

3種抗原修復(fù)法的掉片記錄：①微波修復(fù)：染色片子數(shù)30，掉片數(shù)9，掉片率30％。②酶修復(fù)：染色片子數(shù)20，掉片數(shù)2，掉片率10％。③高壓修復(fù)：染色片子數(shù)20，掉片數(shù)17，掉片率85％。

用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS 13.0對所得結(jié)果

討論

翼狀胬肉表現(xiàn)為呈翼狀增厚的球結(jié)膜組織病變，其頭部侵襲性生長入角膜，體部位于瞼裂區(qū)的一側(cè)，是眼科的常見病、多發(fā)病，發(fā)病機(jī)制仍不清楚[1-5]。在對其組織進(jìn)行免疫組織化學(xué)加抗TGF-βRⅡ抗體的實(shí)驗(yàn)過程中，發(fā)現(xiàn)不同抗原修復(fù)方法所得切片效果不同，對其掉片率進(jìn)行χ2檢驗(yàn)結(jié)果表明，三者間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義；二者間比較只有微波修復(fù)和酶修復(fù)之間差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義，余差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，提示微波修復(fù)法和酶修復(fù)法優(yōu)于高壓修復(fù)法。

在實(shí)際操作中進(jìn)一步體會到：經(jīng)過酶修復(fù)的切片掉片率少，小于另兩種修復(fù)法；不需要微波爐、高壓鍋和枸櫞酸工作液等，只用消化酶和一個孵育盒即可，操作簡單；少了微波修復(fù)和高壓修復(fù)后冷卻2個多小時這一步驟，節(jié)省時間；不接觸電源，沒有危險性。因此，我們得出結(jié)論：酶修復(fù)是翼狀胬肉組織抗原修復(fù)的較理想方法。

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Exploration of the application of enzymatic repair method in pterygium immunohistochemistry

Zhang Chuntao，He Yuan，Jia Jun
The Second Affiliated Hospital of Shanxi Province Xi'an Medical University 710038

Foundation item Xi'an Medical University School Level 12FZ07

Objective：To explore the advantages and disadvantages of received section of 3 antigen repair methods in the pterygium immunohistochemical dyeing process.Methods：The serial sections of pterygium organization wax block were given anti TGF-ΒrⅡantibody and dye by using three different antigen repair methods，including microwave repair，enzymatic repair and high-pressure repair.Results：The differences were statistically significant between the three methods（P＜0.05）.The differences between microwave repair and high-pressure repair，enzymatic repair and high-pressure repair were statistically significant（P＜0.05）.Conclusion：The best choice of organization antigen repair for pterygium organization is enzymatic repair method.It has less chip shell.Iis simple and easy，and no danger.

Pterygium；Immunohistochemistry；Antigen repair

10.3969/j.issn.1007-614x.2015.16.3

西安醫(yī)學(xué)院校級項(xiàng)目12FZ07