任 倩王斌全

MicroRNA-149在腫瘤中的研究進(jìn)展

任 倩①王斌全②

微小RNAs（microRNAs， miRNAs）是一類廣泛存在于真核生物中的小分子非編碼RNA，長(zhǎng)度約為20～22納特斯拉，其在轉(zhuǎn)錄后水平通過(guò)降解靶mRNA或抑制其表達(dá)。MiRNA-149作為microRNA的家族成員之一，在多種疾病中的不同作用機(jī)制以及表達(dá)水平差異引起廣大學(xué)者的關(guān)注與研究，已成為miRNA領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。

微小核糖核酸-149； 腫瘤

微小RNAs（microRNAs，miRNAs ）被視為轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)器在各種腫瘤發(fā)生發(fā)展和一系列生物學(xué)過(guò)程中發(fā)揮作用。迄今為止，多項(xiàng)研究提示miRNA在不同腫瘤中表達(dá)存在差異，紊亂的miRNA表達(dá)通過(guò)扮演癌基因或抑癌基因的角色參與了腫瘤發(fā)生、發(fā)展、侵襲及轉(zhuǎn)移過(guò)程。此外，一些單核苷酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphism， SNP）的存在對(duì)miRNA功能的發(fā)揮有顯著影響，并與腫瘤患病風(fēng)險(xiǎn)和腫瘤細(xì)胞進(jìn)展密切相關(guān)。本文結(jié)合國(guó)內(nèi)外最新研究報(bào)道，對(duì)miR-149在腫瘤中的研究進(jìn)展作一綜述。

1 miRNA概述

隨著人類基因組計(jì)劃的進(jìn)行，人類對(duì)疾病的認(rèn)識(shí)深入到了分子水平。1993年，Lee等[1]首次在秀麗小桿線蟲發(fā)現(xiàn)一類小分子RNA，其作用為調(diào)控線蟲發(fā)育，但并不編碼蛋白質(zhì)。7年后let-7等一系列小片段非編碼RNA相繼被發(fā)現(xiàn)，將它們統(tǒng)稱為微小RNAs[2]。成熟的miRNA是本身不含開放閱讀框架單鏈結(jié)構(gòu)，表達(dá)具有高度保守性、組織特異性和時(shí)序特性[3]。其合成過(guò)程精細(xì)而復(fù)雜，需要在多種酶共同作用下有序完成。Zeng等[4]研究發(fā)現(xiàn)，miRNA在動(dòng)、植物中作用方式不同，在動(dòng)物體中一般是以不完全互補(bǔ)的方式和靶基因mRNA3’非編碼區(qū)（3’UTR）序列以堿基配對(duì)方式結(jié)合，通過(guò)抑制蛋白質(zhì)翻譯過(guò)程發(fā)揮其生物學(xué)功能。

2 miRNA-149與腫瘤

近年來(lái)研究揭示miRNA-149作為一種典型的多功能microRNA，通過(guò)調(diào)控癌基因、抑癌基因或者腫瘤產(chǎn)生途徑中的重要分子的表達(dá)，分別扮演癌基因或者抑癌基因的角色。

2.1 miRNA-149扮演抑癌基因角色

2.1.1 miR-149與頭頸部腫瘤 頭頸部腫瘤是危及人類生命的主要癌癥之一，其發(fā)病機(jī)制尚未明確[5]，主要病理類型為頭頸部鱗狀細(xì)胞癌（head and neck squamous cell carcinoma， HNSCC）[6]。HNSCC的高發(fā)病率與多種病因相互作用有關(guān)，如檳榔咀嚼、吸煙、飲酒及HPV感染等[7-8]。

miRNA-149位于2號(hào)染色體上，并被發(fā)現(xiàn)存在單核苷酸多態(tài)性，可能與頭頸部腫瘤和塵肺相關(guān)[9-10]。Liu等[11]研究發(fā)現(xiàn)4種miRNA多態(tài)性（HSA-146A、HSA-196A、HSA-149和HSA-499）的綜合效應(yīng)與HNSCC患病風(fēng)險(xiǎn)呈劑量-反應(yīng)關(guān)系，此發(fā)現(xiàn)意味著包括HSA-149在內(nèi)的4種pre-miRNA基因結(jié)合體的SNPs可能增加了HNSCC的患病風(fēng)險(xiǎn)。2012年Tu等[12]就miRNA-149及其單核苷酸多態(tài)性與頭頸部鱗狀細(xì)胞癌（HNSCC）癌細(xì)胞遷移與患者易感性及其預(yù)后之間的關(guān)聯(lián)進(jìn)行深入研究，他們以273例HNSCC患者與122例正常對(duì)照為研究對(duì)象，發(fā)現(xiàn)miRNA-149在HNSCC癌組織中表達(dá)明顯下調(diào)，并發(fā)現(xiàn)miRNA-149表達(dá)可抑制HNSCC細(xì)胞的遷移。進(jìn)一步研究后他們又發(fā)現(xiàn)，位于前體miRNA-149（pre-miRNA-149）的單核苷酸多態(tài)性T/T型與頭頸部鱗狀細(xì)胞癌中mir-149表達(dá)下調(diào)相關(guān)，反之，下調(diào)的miRNA-149又決定了頭頸部鱗狀細(xì)胞癌患者的預(yù)后，miRNA-149作為抑癌基因參與HNSCC的進(jìn)展。

2.1.2 miRNA-149與胃癌 胃癌是消化道最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，是多因素致病、多階段進(jìn)展、多基因改變的腫瘤。

Wang等[13]使用RT-PCR（實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)）檢測(cè)不同分化程度胃癌細(xì)胞系（MKN45， GC9811，AGS， SGC7901， and MKN28）和正常胃黏膜上皮細(xì)胞中miRNA-149的表達(dá)量發(fā)現(xiàn)，與正常胃黏膜上皮細(xì)胞相比在胃癌細(xì)胞中表達(dá)量明顯降低，其表達(dá)量與胃癌細(xì)胞分化程度相關(guān)，低分化胃癌細(xì)胞系（MKN45，GC9811， AGS）中miRNA-149表達(dá)量比中分化（SGC7901）和高分化（MKN28）胃癌細(xì)胞系現(xiàn)在降低，相應(yīng)的，在SGC7901細(xì)胞系中，miRNA-149表達(dá)量明顯低于MKN28細(xì)胞系。隨后，他們用miRNA-149模擬物和抑制劑分別轉(zhuǎn)染AGS和SGC7901這兩個(gè)不同分化程度的胃癌細(xì)胞株，轉(zhuǎn)染miRNA-149模擬物者表現(xiàn)為較低增殖水平，而轉(zhuǎn)染miRNA-149抑制劑者則增殖水平顯著增高。由此他們了解到，miR-149的表達(dá)可通過(guò)并誘導(dǎo)細(xì)胞在G0/G1期阻滯從而抑制癌細(xì)胞增殖。ZBTB2（鋅指蛋白437）作為miRNA-149的靶標(biāo)，在胃癌組織中表達(dá)量與miR-149呈負(fù)相關(guān)，即ZBTB2作為胃癌中的癌基因存在。

2.1.3 miRNA-149與肺癌 肺癌發(fā)生于支氣管黏膜上皮，近50年來(lái)肺癌的發(fā)病率顯著增高。肺癌早期多無(wú)癥狀，因此明確肺癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制，早期發(fā)現(xiàn)腫瘤與遏制轉(zhuǎn)移有利于提高肺癌患者生存率。

Gao等[14]指出肺癌是發(fā)生率最高的惡性腫瘤，其主要死亡原因?yàn)檗D(zhuǎn)移。非小細(xì)胞肺癌占80％的肺癌，是全世界癌癥死亡的主要原因[15]。Ke等[16]選擇A549、Calu3、Calu1和H1299四種不同的非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）細(xì)胞系，就miRNA-149對(duì)癌細(xì)胞侵襲能力和上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)變（epithelial-mesenchymal transition， EMT）調(diào)控機(jī)制進(jìn)行研究，他們發(fā)現(xiàn)miRNA-149表達(dá)量與NSCLC細(xì)胞侵襲能力呈負(fù)相關(guān)。為進(jìn)一步研究miR-149在腫瘤細(xì)胞遷移侵襲方面的調(diào)控機(jī)制，Ke等[16]用miR-149轉(zhuǎn)染人肺癌H1299細(xì)胞，轉(zhuǎn)染成功后進(jìn)行基質(zhì)膠侵襲實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明，miR-149有效地抑制了肺癌H1299細(xì)胞遷移。在2002年，F(xiàn)OXM1首次以“癌蛋白”的身份在出現(xiàn)在分子生物學(xué)領(lǐng)域[17]。Gao等[14]利用miRNA靶標(biāo)分析工具PicTar的和TargetScan6.2探索發(fā)現(xiàn)miR-149的潛在目標(biāo)為一種轉(zhuǎn)錄因子蛋白FOXM1，且后續(xù)研究表明miRNA-149通過(guò)靶向抑制FOXM1表達(dá)從而中斷EMT過(guò)程從而抑制NSCLC癌細(xì)胞侵襲與轉(zhuǎn)移。

2.2 miRNA-149扮演癌基因角色

2.2.1 miR-149與黑色素細(xì)胞瘤 黑色素瘤（Malignant melanoma， MM）是來(lái)源于皮膚和其他器官黑色素細(xì)胞的惡性腫瘤，多發(fā)生于皮膚，其惡性程度高。

p53被認(rèn)為是迄今為止所發(fā)現(xiàn)的最為重要的腫瘤抑制因子。然而在黑色素瘤中，p53反常的高量表達(dá)。Jin等[18]對(duì)這一反常產(chǎn)生了疑問(wèn)，故在此基礎(chǔ)上通過(guò)一系列實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)這一作用機(jī)制：p53通過(guò)上調(diào)microRNA-149*的表達(dá)量，經(jīng)過(guò)一系列信號(hào)傳導(dǎo)，最終引起Mcl-1（抗凋亡Bcl-2家族蛋白中的一員，具有抑制凋亡的作用）的表達(dá)量升高，從而使黑色素瘤細(xì)胞能夠更好的“適應(yīng)”內(nèi)質(zhì)網(wǎng)壓力而得以生存。他們對(duì)60位黑色素瘤臨床患者的病例切片進(jìn)行研究，證實(shí)了miR-149*表達(dá)量在黑色素瘤細(xì)胞中顯著增高。隨后他們降低miR-149*在黑色素瘤細(xì)胞中的表達(dá)量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)這一改變促進(jìn)黑色素細(xì)胞凋亡，在異種移植小鼠模型上表現(xiàn)為阻礙了黑色素瘤的生長(zhǎng)。這些結(jié)果揭示了依賴p53的miR-149*的作用途徑有助于黑色素瘤細(xì)胞的存活，p53一反常態(tài)的扮演了癌基因的角色。而miR-149*在黑色素細(xì)胞瘤中的作用方式意味著miR-149*可以作為黑色素瘤早期臨床診斷潛在的腫瘤標(biāo)記物。在小鼠體內(nèi)抑制該微小RNA的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，miRNA-149*還可作為一個(gè)潛在的黑色素瘤的治療靶點(diǎn)，用于臨床治療新興藥物的研發(fā)。

2.2.2 miR-149與鼻咽癌 鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma， NPC）是一種受多基因作用和不同環(huán)境因素影響的惡性腫瘤，普遍存在于東南亞國(guó)家，在我國(guó)的廣東、廣西等南方地區(qū)高發(fā)。5年生存率徘徊于50％～60％[19]。

Luo等[20]培養(yǎng)了3種不同的鼻咽癌細(xì)胞系（5-8F、6-10B、NP69）：低分化5-8F、高分化6-10B鼻咽癌細(xì)胞系在補(bǔ)充有青霉素G（100 U/mL），鏈霉素（100 mg/mL）和10％胎牛血清（FCS）的RPMI-1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)。正常鼻咽上皮細(xì)胞系NP69細(xì)胞在補(bǔ)充有青霉素G（100 U/mL），鏈霉素（100 mg/mL）和10％胎牛血清（FCS）和生長(zhǎng)因子的RPMI-1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)。他們使用RT-PCR檢測(cè)3種細(xì)胞系中miRNA-149表達(dá)量，結(jié)果表明miR-149的表達(dá)量在高轉(zhuǎn)移潛能的5-8F細(xì)胞系中高出正常鼻咽部上皮細(xì)胞系NP69的4.3倍，而低轉(zhuǎn)移潛能6-10B比NP69高出2.17倍。他們總結(jié)，miR-149的表達(dá)與NPC的進(jìn)展有關(guān)。為了研究miR-149與鼻咽癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲是否存在關(guān)聯(lián)，他們分別采用MTT實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell實(shí)驗(yàn)，最終得出結(jié)論，抑制miRNA-149的表達(dá)可抑制鼻咽癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲，即在鼻咽癌中，miR-149作為癌基因調(diào)控其進(jìn)展。為了了解miR-149在鼻咽癌轉(zhuǎn)移中的作用機(jī)制，他們發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染miR-149模擬物后的鼻咽癌細(xì)胞5-8F中E-cadherin（E-鈣黏蛋白，是一類介導(dǎo)同種細(xì)胞互相黏附的鈣依賴性跨膜糖蛋白，參與形成和維護(hù)正常細(xì)胞間的聯(lián)結(jié)，是介導(dǎo)細(xì)胞間連接最重要的一類分子）表達(dá)降低，而miR-149抑制劑的使用則使E-cadherin表達(dá)增加。據(jù)研究表明，E-cadherin的功能缺失是EMT發(fā)生的機(jī)制之一，而EMT是腫瘤轉(zhuǎn)移發(fā)生的關(guān)鍵環(huán)節(jié)[21-22]。因此Luo等[20]總結(jié)出miR-149通過(guò)調(diào)節(jié)EMT中重要蛋白E-cadherin的表達(dá)從而干擾NPC的轉(zhuǎn)移。

本文闡述了miR-149在幾種不同組織來(lái)源的腫瘤細(xì)胞中表達(dá)的差異，以及miR-149在相應(yīng)腫瘤細(xì)胞增殖、凋亡、遷移過(guò)程中的不同作用。相信隨著對(duì)miR-149在各種疾病中研究的不斷開展和深入，加之最新miRNA檢驗(yàn)與分析技術(shù)（如基于等溫指數(shù)擴(kuò)增的銀納米簇DNA探針?lè)╗23]、基于腺病毒載體的傳感器分析法等[24]）的輔助應(yīng)用，miR-149的更多功能和作用機(jī)制即將被人們所探索和發(fā)現(xiàn)，并不斷完善不同類型腫瘤的發(fā)病機(jī)制。這預(yù)示著microRNA-149可能成為個(gè)多種疾病新興的早期診斷標(biāo)志物和潛在的基因治療靶點(diǎn)，為新藥的研發(fā)提供理論依據(jù)。

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Research Progress of MicroRNA-149 in Human Carcinomas

REN Qian， WANG Bin-quan.//Medical Innovation of China，2015，12（01）：150-153

MicroRNAs was seen to play a role in a variety of cancer occurrence and development and a series of biological process as post transcriptional regulation. So far， many studies suggest that the expression of miRNA in various of tumors are different， disorganized miRNAs expressed by acting oncogenes or tumor suppressor genes roles， involved in tumorigenesis， development， invasion and metastasis. In addition， the existence of single nucleotide polymorphism of the miRNAs plays a significant effect in its function， and is closely related to the cancer risk and progress of tumor cells. This article sums up the recent reports， both internal and external， in research on miRNA-149 in human carcinomas.

microRNA-149； Cancer

10.3969/j.issn.1674-4985.2015.01.052

2014-05-21） （本文編輯：王宇）

①山西醫(yī)科大學(xué) 山西 太原 030001

②山西醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院

王斌全

First-author’s address： Shanxi Medical University， Taiyuan 030001， China