蔡麗梅 李嘉慧 肖青

·實驗研究·

番茄紅素對慢性酒精中毒肝損傷的保護作用研究

蔡麗梅 李嘉慧 肖青

目的 研究番茄紅素對慢性酒精中毒小鼠肝損傷的保護作用, 探索其發(fā)揮保護作用的機制。方法 建立小鼠慢性酒精中毒模型, 以番茄紅素灌胃治療, 并建立對照組。通過比較各組小鼠整體外觀、組織形態(tài)變化以及各組小鼠肝臟勻漿中谷草轉(zhuǎn)氨酶( AST )、谷丙轉(zhuǎn)氨酶( ALT )等指標的變化情況,分析番茄紅素對慢性酒精中毒肝臟的治療作用。結(jié)果 番茄紅素對小鼠營養(yǎng)狀態(tài)、應(yīng)激能力等有所提升,可以降低肝組織AST、ALT活力, 并減少肝臟脂肪變性。結(jié)論 番茄紅素對慢性酒精中毒肝損傷有保護作用。

番茄紅素；慢性酒精中毒；肝損傷

番茄紅素是成熟番茄的主要色素, 是一種不含氧的類胡蘿卜素。在類胡蘿卜素中, 它具有最強的抗氧化活性, 是迄今為止自然界中被發(fā)現(xiàn)的最強抗氧化劑之一。有研究表明［1］,醉酒后服用番茄紅素, 可以減輕頭痛、嘔吐等醉酒癥狀。盡管番茄紅素有解酒功能, 但其對慢性酒精中毒肝臟的預(yù)防性保護作用的研究目前仍尚未見報道, 因此, 本課題通過研究番茄紅素能對慢性酒精中毒導致的肝損傷的保護作用, 可提供一種新的治療慢性酒精中毒的保肝方法, 為后續(xù)對番茄紅素的研究和治療慢性酒精中毒患者提供參考, 具有一定的現(xiàn)實意義和價值。

1 材料與方法

1.1 主要藥品及試劑 瀘州老白干, 酒精度52%vol；番茄紅素, 用食用調(diào)和油稀釋；谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT/GPT)測試盒；谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST/GOT)測試盒。

1.2 動物 小白鼠, 雌雄隨機, 28～35 g。

1.3 方法 將小鼠隨機分成五組, 正常組：無白酒灌胃；酒精組：前2周, 每天52%白酒以8 ml/kg劑量灌胃1次,第3周調(diào)整白酒劑量以12 ml/kg灌胃1次, 建立模型［2］；番茄紅素保護組：每天白酒灌胃, 5 h后, 番茄紅素分別以5、10、20 mg/kg灌胃, 并根據(jù)番茄紅素灌胃劑量分為5 mg/kg番茄紅素組、10 mg/kg番茄紅素組和20 mg/kg番茄紅素組。8周后處死所有小鼠, 分別取各組小鼠肝臟用于檢測。

1.4 觀察指標

1.4.1 小鼠整體情況觀察 觀察各組小鼠毛色, 精神狀態(tài),應(yīng)激能力以及營養(yǎng)狀態(tài)等。

1.4.2 肝組織觀察 取小塊肝組織, 制取肝細胞切片, HE染色觀察肝組織的形態(tài)變化。

1.4.3 肝臟功能評價 制備肝勻漿, 按測試盒說明書對ALT、AST進行檢測。

1.5 統(tǒng)計學方法 用統(tǒng)計軟件Graphpad進行統(tǒng)計學分析。計量資料以均數(shù)±標準差( x-±s)表示, 采用t檢驗；計數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 一般情況比較 對照組小鼠毛色有光澤, 反應(yīng)敏捷,營養(yǎng)狀態(tài)好；酒精組小鼠毛色晦暗, 精神萎靡, 瘦弱；低劑量(5 mg/kg)番茄紅素保護組毛色與酒精組比較, 反應(yīng)敏捷程度有所提高, 營養(yǎng)狀態(tài)好轉(zhuǎn), 但是番茄紅素濃度越高(10、20 mg/kg),則小鼠狀態(tài)越不好, 甚至與酒精組無別。

2.2 肝組織病理學變化 光鏡下可見, 酒精組肝小葉界限不清, 肝細胞出現(xiàn)空泡變性, 同時散在淋巴細胞及單核細胞；5 mg/kg番茄紅素組肝小葉結(jié)構(gòu)清晰, 肝組織極少量空泡；10 mg/kg番茄紅素組肝小葉結(jié)構(gòu)出現(xiàn)疏松；20 mg/kg番茄紅素組肝小葉結(jié)構(gòu)界限開始不清且呈現(xiàn)明顯疏松狀態(tài)。

2.3 肝組織ALT與AST比較 與正常對照組比較, 酒精組小鼠肝組織ALT、AST明顯升高(19.53±5.66)U/L, (10.14± 2.09)U/L。與酒精組比較, 番茄紅素(5 mg/kg)能顯著降低肝組織ALT、AST(2.56±0.91)U/L、(2.05±0.98)U/L；番茄紅素給藥劑量增加(10、20 mg/kg), ALT、AST明顯回升10 mg/kg：(7.13±3.78)U/L、(6.67±0.83) U/L；20 mg/kg：(19.3±2.56)U/L、(7.02±2.64)U/L。

3 討論

過量飲酒及酗酒對人體健康的危害正成為日益嚴重的社會問題, 長期大量飲酒可導致慢性的酒精中毒, 對肝臟的損傷非常大。其中, 酒精代謝產(chǎn)生的氧化應(yīng)激損傷是肝損傷的重要機制之一［3］。

本研究結(jié)果顯示, 持續(xù)用白酒灌胃小鼠8周后, 酒精組小鼠精神狀態(tài)及應(yīng)激能力等明顯下降, 肝臟組織邊緣界限模糊, 肝細胞脂肪變性明顯增加, 肝組織AST、ALT水平明顯增加, 證明小鼠肝臟嚴重損傷, 模型建立成功。ALT主要存在于肝細胞漿中, 當肝細胞損傷時, 細胞內(nèi)轉(zhuǎn)氨酶可進入組織中, 導致組織中ALT的水平升高。AST也存在于肝細胞漿內(nèi), 并分布于線粒體內(nèi), 當肝細胞嚴重損傷時, AST從線粒體內(nèi)釋放到組織中, 使得組織中AST水平升高［4］。而本實驗中適量的番茄紅素(5 mg/kg)降低肝組織中AST、ALT水平, 肝臟脂肪變性等明顯減少, 表明番茄紅素能一定程度上保護肝細胞不受酒精損害。有研究表明, 番茄紅素可以增加超氧化物岐化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活力及總抗氧化能力(T-AOC)升高, 降低丙二醛(MDA)含量［5］, 說明番茄紅素具有良好的抗氧化能力。故本實驗室下一步將繼續(xù)研究番茄紅素對慢性酒精中毒肝損傷的可能保護機制。

在研究中還發(fā)現(xiàn)番茄紅素低劑量(5 mg/kg)的效果最好,能明顯減少空泡的出現(xiàn), 并能顯著改善肝組織結(jié)構(gòu), 降低AST和ALT水平；而增加劑量(10、20 mg/kg)導致肝臟組織重新出現(xiàn)疏松, 特別是20 mg/kg時肝臟組織又出現(xiàn)明顯的結(jié)構(gòu)界限不清和顯著的組織疏松, 且AST和ALT水平又明顯回升, 表明肝臟損傷加重。此結(jié)果可能與長時間給予高劑量番茄紅素會超出小鼠肝臟的代謝承載能力或?qū)е掠嘘P(guān)組織細胞發(fā)生病理變化有關(guān)。關(guān)于番茄紅素最佳劑量的確定, 還可以擴大樣本、增設(shè)劑量組進行更深入的研究。

綜上所述, 長期服用番茄紅素對慢性酒精中毒小鼠肝損傷有一定的預(yù)防性保護作用, 在臨床上為慢性酒精中毒患者提供一種新型廉價的保肝藥物提供新的基礎(chǔ)證據(jù)。

［1］ 金麗芬, 張曉燕, 夏文明.番茄紅素的研究進展.海軍醫(yī)學雜志, 2010, 31(1):91-92.

［2］ 劉坤, 倉懷芹, 高華,等.硫酸軟骨素對慢性酒精中毒模型大鼠腦組織神經(jīng)遞質(zhì)的影響研究.中國藥房, 2011, 22(9):798-800.

［3］ 楊萬枝, 呂雄文.酒精性肝病發(fā)病機制研究進展.安徽醫(yī)科大學學報, 2012, 47(1):97-99.

［4］ 呂圭源, 陳素紅, 張麗丹,等.鐵皮石斛對小鼠慢性酒精性肝損傷模型血清2種轉(zhuǎn)氨酶及膽固醇的影響.中國實驗方劑學雜志, 2010, 16(6):192-193.

［5］ 潘洪志, 萬麗葵, 胡萬勝,等.番茄紅素對CCl4致大鼠肝腎抗氧化功能改變的保護作用.衛(wèi)生研究, 2006, 35(3):329-330.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.11.205

2014-12-11］

廣州醫(yī)科大學學生課外學術(shù)科技項目, (項目編號：2013A025)

510182 廣州醫(yī)科大學藥理教研室

肖青