徐 靜，孫建新

(河北省秦皇島市第二醫(yī)院，河北 昌黎 066600)

坤泰膠囊對(duì)去卵巢大鼠骨質(zhì)疏松防治效果的實(shí)驗(yàn)研究

徐 靜，孫建新

(河北省秦皇島市第二醫(yī)院，河北 昌黎 066600)

[摘要]目的 研究坤泰膠囊對(duì)去卵巢大鼠骨質(zhì)疏松的防治效果，旨在為科學(xué)用藥提供依據(jù)。方法 隨機(jī)取60只4月齡雌性大鼠，10只大鼠作為假手術(shù)組，50只大鼠進(jìn)行去卵巢造模。術(shù)后4周將建模成功的50只雌性SD大鼠隨機(jī)分成模型組、坤泰膠囊低劑量組、坤泰膠囊中劑量組、坤泰膠囊高劑量組及仙靈骨葆膠囊組，每組10只。假手術(shù)組及模型組灌胃等容積的蒸餾水，坤泰膠囊低、中、高劑量組以及仙靈骨葆膠囊組分別灌胃坤泰膠囊1.0 g/kg、2.0 g/kg、4.0 g/kg及仙靈骨葆膠囊2.0 g/kg，1次/d，連續(xù)12周。觀察各組大鼠體質(zhì)量、骨密度以及血清骨堿性磷酸酶、抗酒石酸酸性磷酸酶5b水平。結(jié)果 坤泰膠囊中、高劑量組的體質(zhì)量及血清骨堿性磷酸酶、抗酒石酸酸性磷酸酶5b水平均明顯低于模型組(P均<0.05)，骨密度值顯著高于模型組(P均<0.05)。各指標(biāo)與仙靈骨葆膠囊組相當(dāng)。結(jié)論 中、高劑量坤泰膠囊可以有效增加去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠骨密度值，降低血清骨堿性磷酸酶、抗酒石酸酸性磷酸酶5b水平，是治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的有效藥物。

絕經(jīng)后；骨質(zhì)疏松；大鼠；坤泰膠囊；骨密度

骨質(zhì)疏松癥屬于代謝性骨病，在中老年人中十分常見(jiàn)，尤其是絕經(jīng)后婦女，因?yàn)榕缘倪\(yùn)動(dòng)量本身較小，加之從食物中攝取鈣的量不足，在絕經(jīng)后的3～5年就會(huì)出現(xiàn)鈣質(zhì)丟失的情況，據(jù)統(tǒng)計(jì)平均每年丟失2.5%左右[1-2]，繼而可引發(fā)骨質(zhì)疏松癥。有關(guān)研究顯示，60歲以上絕經(jīng)婦女發(fā)生骨質(zhì)疏松癥的概率在40%以上[3]，這種高發(fā)風(fēng)險(xiǎn)要遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)同齡男性，可見(jiàn)絕經(jīng)后婦女是骨質(zhì)疏松癥的高危人群。盡管骨質(zhì)疏松癥不會(huì)直接造成患者死亡，但骨折的危害卻時(shí)刻威脅著人們的健康，同時(shí)致殘率高，醫(yī)療費(fèi)用較高，均會(huì)給患者帶來(lái)較大的負(fù)擔(dān)[4-5]。目前雌激素療法是防治絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的方法之一，不僅可以緩解絕經(jīng)癥狀，還可以減少陰道炎及干澀情況，同時(shí)可降低冠心病的發(fā)生率，但是雌激素的大量使用會(huì)增加心腦疾病以及靜脈血栓等疾病的風(fēng)險(xiǎn)，在臨床應(yīng)用中受到制約[6]。因此開(kāi)發(fā)出安全可靠的防治絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的方法及藥物是目前研究的重要課題。筆者觀察了中藥坤泰膠囊對(duì)去卵巢大鼠骨質(zhì)疏松癥的防治效果及其機(jī)制，旨在為臨床治療骨質(zhì)疏松癥提供更加有力的科學(xué)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)資料

1.1藥物 坤泰膠囊，貴陽(yáng)新天藥業(yè)股份有限公司提供，國(guó)藥準(zhǔn)字Z20000083，規(guī)格：0.5 g/粒，實(shí)驗(yàn)時(shí)加入蒸餾水配置成混懸液以方便使用。仙靈骨葆膠囊，貴州同濟(jì)堂制藥公司提供，國(guó)藥準(zhǔn)字Z20025337，規(guī)格：0.5 g/粒，實(shí)驗(yàn)時(shí)加入蒸餾水配置成混懸液以便使用。青霉素鈉，華北制藥公司提供，批號(hào)：0612117，使用前以0.9%氯化鈉溶液稀釋成40萬(wàn)IU/mL藥液以待用。戊巴比妥鈉，佛山化工實(shí)驗(yàn)廠提供，使用前以0.9%氯化鈉溶液稀釋成0.01 g/mL溶液以待用。

1.2試劑與儀器 南京建成生物研究所提供的大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶5b試劑盒以及大鼠骨堿性磷酸酶試劑盒，北京九強(qiáng)生物科技公司提供的血清磷檢測(cè)試劑盒及血清鈣檢測(cè)試劑盒，血清雌二醇檢測(cè)試劑盒由美國(guó)貝克曼公司提供。上海安泰分析儀器公司提供的全自動(dòng)生化分析儀、雙能雙光子骨密度儀以及自動(dòng)酶標(biāo)分析儀(AT-858型號(hào))，美國(guó)貝克曼公司的全自動(dòng)微粒子化學(xué)發(fā)光免疫分析儀等。

1.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 4月齡的雌性SD大鼠60只，體質(zhì)量(282±20)g，由成都中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)合格證號(hào)：川實(shí)動(dòng)管質(zhì)(04)第11號(hào)；實(shí)驗(yàn)室溫度18～25 ℃，相對(duì)濕度40%～70%，具備全套的排氣通風(fēng)設(shè)備，保證充足自然光照，做好鼠籠的定期消毒以及更換。

1.4造模及分組 隨機(jī)取10只大鼠作為假手術(shù)組，其余動(dòng)物進(jìn)行去卵巢造模。具體方法：使用45 mg/kg戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉大鼠，取腹位固定，在最末肋骨下，選擇腋中線與脊柱外側(cè)距離1 cm的交叉位置去除鼠毛，用絡(luò)合碘消毒處理后，切開(kāi)皮膚、背部肌肉及腹膜，將脂肪團(tuán)輕輕拉開(kāi)分離后暴露出卵巢，結(jié)扎卵巢下端輸卵管后將卵巢摘除，然后逐步分層縫合切口，同樣方法摘除另一側(cè)卵巢。假手術(shù)組大鼠只取其一小塊脂肪，不摘除卵巢，其余操作與模型大鼠相同。術(shù)后均予以肌肉注射青霉素鈉，連續(xù)1周，并應(yīng)用絡(luò)合碘對(duì)傷口進(jìn)行消毒處理。術(shù)后4周將造模成功大鼠隨機(jī)分為模型組10只、坤泰膠囊低劑量組10只、坤泰膠囊中劑量組10只、坤泰膠囊高劑量組10只、仙靈骨葆膠囊組10只。假手術(shù)組及模型組灌胃等容積的蒸餾水，坤泰膠囊低、中、高劑量組以及仙靈骨葆膠囊組分別灌胃坤泰膠囊1.0 g/kg、2.0 g/kg、4.0 g/kg及仙靈骨葆膠囊2.0 g/kg，1次/d，連續(xù)12周，每周稱量1次體質(zhì)量并以此為依據(jù)調(diào)整灌胃用量。

1.5檢測(cè)指標(biāo) 用藥12周后，使用戊巴比妥鈉麻醉大鼠，仰臥位置于測(cè)試臺(tái)，使用雙能雙光子骨密度儀檢測(cè)全身以及脊柱的骨密度值；然后取股動(dòng)脈不抗凝血約3 mL，常規(guī)分離血清，使用免疫酶聯(lián)法測(cè)定血清水抗酒石酸酸性磷酸酶與骨堿性磷酸酶水平。

2 結(jié) 果

2.1各組大鼠用藥前后體質(zhì)量比較 用藥12周后，模型組大鼠的體質(zhì)量明顯高于假手術(shù)組(P<0.05)；坤泰膠囊中、高劑量組的體質(zhì)量顯著低于模型組(P均<0.05),但與假手術(shù)組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠用藥前后體質(zhì)量比較

注：①與模型組比較，P<0.05。

2.2各組大鼠骨密度值及血清抗酒石酸酸性磷酸酶5b、骨堿性磷酸酶水平比較 模型組大鼠骨密度值明顯低于假手術(shù)組(P<0.05)，血清抗酒石酸酸性磷酸酶5b及骨堿性磷酸酶水平明顯高于假手術(shù)組(P<0.05)；坤泰膠囊中、高劑量組大鼠骨密度值明顯高于模型組(P均<0.05)，血清抗酒石酸酸性磷酸酶5b以及骨堿性磷酸酶水平明顯低于模型組(P均<0.05)，各指標(biāo)與假手術(shù)組及仙靈骨葆膠囊組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。見(jiàn)表2。

3 討 論

絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥多發(fā)生于婦女絕經(jīng)后的5～20年，在早期表現(xiàn)并不十分特殊，只有在患者發(fā)生骨折時(shí)才會(huì)被發(fā)現(xiàn)。因?yàn)榻^經(jīng)后，女性體內(nèi)的雌激素水平顯著降低，促進(jìn)了破骨細(xì)胞的增長(zhǎng)，同時(shí)在正常的代謝活動(dòng)中，隨著對(duì)破骨細(xì)胞的吸收，其形成也在快速增加，因此絕經(jīng)后女性的成骨細(xì)胞數(shù)量與之前比較要明顯減少，功能作用也隨之降低，故如何防治骨質(zhì)疏松癥仍舊是目前主要研究課題[7]。

祖國(guó)醫(yī)學(xué)對(duì)絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥早有一定的認(rèn)知，該病屬于祖國(guó)醫(yī)學(xué)中“腎精不足”“骨痰”“骨枯”“骨痹”等范疇，從祖國(guó)醫(yī)學(xué)整體概念中可以發(fā)現(xiàn)，絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥是伴隨著機(jī)體衰老以及順應(yīng)性下降的一種退行性骨病，是由諸多因素造成的[8]，臨床中可以從腎虛血癖這一病機(jī)上著手治療。坤泰膠囊是從《傷寒論》當(dāng)中的黃連阿膠湯化裁而來(lái)，由黃連、白芍、熟地黃、茯苓、阿膠等組成，方中君藥為熟地黃，臣藥為阿膠、白芍及黃連，佐藥則為茯苓，可以起到安神、滋陰養(yǎng)血之效，方中熟地黃味甘且性溫，歸肝腎經(jīng)，是補(bǔ)腎益血的上品，可生精填髓、養(yǎng)補(bǔ)肝腎、強(qiáng)益腎精，從而達(dá)到強(qiáng)壯筋骨的目的，腎精充沛則可養(yǎng)骨充髓。黃連清熱燥濕，瀉火解毒；白芍養(yǎng)血柔肝，緩中止痛，斂陰收汗；阿膠滋陰、補(bǔ)血、止血、潤(rùn)燥；清熱燥濕、止血、安胎；茯苓滲濕利水，健脾和胃，寧心安神。諸藥與熟地黃配伍，起到改善卵巢功能的作用。

表2 各組大鼠骨密度值及血清抗酒石酸酸性磷酸酶5b、骨堿性磷酸酶水平比較

注：①與模型組比較，P<0.05。

去卵巢骨質(zhì)疏松癥模型是目前研究絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的最重要模型之一，該模型能夠最大限度模擬出絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的骨代謝情況，同時(shí)也非常適合坤泰膠囊的給藥方式，因?yàn)樵撍幵谂R床應(yīng)用中多是針對(duì)已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的骨質(zhì)疏松癥患者，隸屬于治療藥物，因此該模型是最佳選擇之一。在檢測(cè)指標(biāo)上，筆者考慮到實(shí)驗(yàn)大鼠并無(wú)進(jìn)行性骨質(zhì)減少的脆性骨折發(fā)生，因此選擇了骨密度這一黃金指標(biāo)作為判斷骨質(zhì)疏松癥的指標(biāo)之一；同時(shí)在骨代謝相關(guān)的生化指標(biāo)中，選擇了血清抗酒石酸酸性磷酸酶5b作為反映骨吸收的指標(biāo)，血清骨堿性磷酸酶作為反映骨轉(zhuǎn)換及形成的指標(biāo)。抗酒石酸酸性磷酸酶常見(jiàn)于破骨細(xì)胞中，而在成骨細(xì)胞中十分少見(jiàn)，一旦骨吸收時(shí)，抗酒石酸酸性磷酸酶則被釋放到血液循環(huán)當(dāng)中，因此其水平可以反映骨吸收情況。骨堿性磷酸酶主要由成骨細(xì)胞生成，一般在發(fā)生骨化后的軟骨組織中可見(jiàn)，在骨形成的過(guò)程中，骨細(xì)胞功能及數(shù)量有所遞增的同時(shí)會(huì)表現(xiàn)出骨堿性磷酸酶活性的升高[9-11]。因?yàn)槠淠軌蚣涌鞜o(wú)機(jī)磷酸鹽的水解過(guò)程，從而降低焦磷酸鹽濃度，因此在骨礦化的過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，坤泰膠囊中、高劑量組骨密度值明顯高于模型組，體質(zhì)量和血清抗酒石酸酸性磷酸酶5b與骨堿性磷酸酶水平均明顯低于模型組。提示坤泰膠囊可以明顯調(diào)節(jié)去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠的骨密度值，促進(jìn)其恢復(fù)正常水平，同時(shí)能夠更好地平衡破骨及成骨的作用，是治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的有效藥物。

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Experimental study on the effect of prevention and treatment of Kuntai capsule on osteoporosis in ovariectomized rats

XU Jing, SUN Jianxin

(The Second Hospital of Qinhuangdao, Qinhuangdao 066600, Hebei, China)

Objective It is to study the effect of prevention and treatment of Kuntai Capsule on osteoporosis in ovariectomized rats,in order to provide a basis for scientific use.Methods Ten 4 months old female rats were randomly selected as sham operation group, another 50 rats were selected to establish ovariectomized models. In 4 weeks after the operation, the successful models of 50 rats were divided into model group, low, medium and high dose of Kuntai capsule groups and Xianlinggubao capsule group, each group had 10 rats. The sham operation group and model group was given the same volume of distilled water by intragastric administration, low, medium and high dose of Kuntai capsule groups and Xianlinggubao capsule group was respectively treated with Kuntai capsule 1.0 g/kg, 2.0 g/kg, 4.0 g/kg and Xianlinggubao capsule 2.0 g/kg by intragastric administration once per day and for 12 weeks. Bone density, body mass, and the levels of serum biochemical markers of bone alkaline phosphatase, tartrate resistant acid phosphatase 5b of the rats in every group were observed.Results Body mass and the levels of serum bone alkaline phosphatase, tartrate resistant acid phosphatase 5b in Xianlinggubao capsule group and medium and high dose of Kuntai capsule groups were significantly lower, while bone density was higher than those in the model group (P<0.05), and the changes of these indexes were similar in Xianlinggubao capsule group and medium and high dose of Kuntai capsule groups. Conclusion Medium and high dose of Kuntai capsule can effectively increase bone density, decrease the levels of serum bone alkaline phosphatase, tartrate resistant acid phosphatase 5b, so it is the effective drug for the treatment of postmenopausal osteoporosis.

postmenopausal; osteoporosis; rat; Kuntai Capsule; bone mineral density

徐靜，女，副主任醫(yī)師，從事婦科臨床工作。

10.3969/j.issn.1008-8849.2015.26.007

R-332

A

1008-8849(2015)26-2873-03

2015-01-09