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復(fù)方保腎顆粒對(duì)甘油法致大鼠急性腎功能衰竭模型的影響

2015-02-11 01:45林波向麗劉宇石金鳳張桂曾勇孟憲麗陳小睿
中藥與臨床 2015年4期
關(guān)鍵詞:甘油尿蛋白復(fù)方

林波,向麗,劉宇,石金鳳,張桂,曾勇,孟憲麗,陳小睿

復(fù)方保腎顆粒對(duì)甘油法致大鼠急性腎功能衰竭模型的影響

林波,向麗,劉宇,石金鳳,張桂,曾勇,孟憲麗,陳小睿

目的:研究復(fù)方保腎顆粒對(duì)甘油法致大鼠急性腎功能衰竭(ARF)模型的影響。方法:用50%的甘油按照10 mL.kg-1分別在大鼠兩側(cè)后肢肌肉注射造成急性腎衰模型,將大鼠分為模型對(duì)照組、復(fù)方保腎顆粒三個(gè)劑量組(3.6,1.8,0.9 g.kg-1)、醋酸地塞米松組,另設(shè)空白對(duì)照組。連續(xù)灌胃4天后測(cè)定大鼠尿蛋白、血清肌酐(Scr)、血清尿素氮(BUN)、血清總蛋白量、K+、Na+含量及腎臟指數(shù)。結(jié)果:復(fù)方保腎顆粒能明顯降低甘油法致大鼠急性腎功能衰竭模型的尿蛋白、Scr及BUN的含量,明顯降低腎臟指數(shù)。結(jié)論:復(fù)方保腎顆粒對(duì)甘油法致大鼠急性腎功能衰竭模型具有一定的保護(hù)作用。

復(fù)方保腎顆粒;急性腎功能衰竭;尿蛋白;肌酐;尿素氮

急性腎功能衰竭( acute renal failure, ARF) 是指由各種原因引起的腎功能在短期內(nèi)(幾小時(shí)至幾天)急劇下降, 導(dǎo)致體內(nèi)代謝產(chǎn)物潴留, 水、電解質(zhì)、酸堿平衡紊亂的臨床綜合征[1]。復(fù)方保腎顆粒是由黃芪、絡(luò)石藤、魚(yú)腥草等中藥組成的臨床科研經(jīng)驗(yàn)方,主要用于治療慢性腎炎之風(fēng)濕熱擾腎,腎絡(luò)瘀痹證[2]。方中黃芪為君藥,現(xiàn)代研究表明黃芪對(duì)機(jī)體免疫系統(tǒng)、腎臟系統(tǒng)具有藥理作用,能增強(qiáng)機(jī)體體液免疫與細(xì)胞免疫功能,保護(hù)腎小球血管內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整性,還具有較好的利尿作用[3]。本實(shí)驗(yàn)選用了經(jīng)典急性腎衰動(dòng)物模型—甘油法致大鼠急性腎功能衰竭模型,觀察復(fù)方保腎顆粒對(duì)該模型的治療作用,為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 藥物

復(fù)方保腎顆粒(浸膏粉),由成都中醫(yī)藥大學(xué)中藥炮制與制劑教研室提供,批號(hào):20120511;醋酸地塞米松片,浙江仙琚制藥股份有限公司生產(chǎn),批號(hào):20130123。

1.2 動(dòng)物

SD大鼠,SPF級(jí),雄性,體重140~160 g,由成都達(dá)碩生物科技有限公司提供,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào):SCXK(川)2008-24。

1.3 試劑

甘油(丙三醇),成都市科倫化工試劑廠,批號(hào)20120310;氯化鈉注射液,四川科倫藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn),批號(hào)M12091019;尿蛋白定量測(cè)試盒、肌酐測(cè)試盒、尿素氮測(cè)試盒、血清總蛋白測(cè)試盒、血清K+、Na+測(cè)試盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.4 儀器

Varioskan全波長(zhǎng)多功能酶標(biāo)儀,美國(guó)ThermoFisher Scientific;分析電子天平,F(xiàn)A1104型,上海良平儀器儀表有限公司;電子天平,T500型,常熟市雙杰測(cè)試儀器廠;尿蛋白定性試紙,桂林優(yōu)利特醫(yī)療電子有限公司。

2 方法

2.1 動(dòng)物造模

SD大鼠,雄性,體重140~160 g。預(yù)先置于代謝籠中3日適應(yīng)環(huán)境,觀察自由飲水條件尿量是否穩(wěn)定。實(shí)驗(yàn)前禁水24 h,以50%甘油按10 mL.kg-1分別在大鼠兩側(cè)后肢肌肉注射,完后大鼠自由進(jìn)食和飲水,一般在2 h后出現(xiàn)血紅蛋白尿,48 h形成穩(wěn)定模型(以尿蛋白試紙檢測(cè)陽(yáng)性為模型成功)[4~6]。

2.2 分組與給藥

將造模成功的大鼠按體重分層,隨機(jī)均衡分為5組,每組10只,分別為:模型對(duì)照組(0.3%CMCNa溶液),復(fù)方保腎顆粒3個(gè)劑量組(3.6、1.8、0.9 g.kg-1),醋酸地塞米松組(0.1 mg.kg-1)。另設(shè)空白對(duì)照組(0.3%CMC-Na溶液),共6組,每組10只大鼠,按上述劑量連續(xù)給藥4天。

2.3 動(dòng)物處死

末次給藥后將大鼠放入代謝籠禁食不禁水,收集大鼠尿液,進(jìn)行尿蛋白含量測(cè)定。次晨,全部大鼠麻醉后腹主動(dòng)脈取血,分離血清測(cè)BUN、Scr、血清總蛋白量及血清中K+、Na+含量,分離大鼠腎臟,稱重,計(jì)算腎臟指數(shù)。

2.4 統(tǒng)計(jì)方法

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 復(fù)方保腎顆粒對(duì)甘油法致大鼠急性腎功能衰竭模型尿蛋白、血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)的影響

與空白對(duì)照組相比,模型對(duì)照組動(dòng)物尿蛋白、血清Scr、BUN含量顯著升高,與模型對(duì)照組相比,復(fù)方保腎顆粒中、低劑量組,醋酸地塞米松組動(dòng)物尿蛋白、血清Scr、BUN含量明顯降低(p<0.01或p<0.05),復(fù)方保腎顆粒高劑量組也有降低趨勢(shì),但無(wú)顯著性差異。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 復(fù)方保腎顆粒對(duì)甘油法致大鼠急性腎功能衰竭模型給藥結(jié)束后尿蛋白、血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)的影響(±s,n=10)

表1 復(fù)方保腎顆粒對(duì)甘油法致大鼠急性腎功能衰竭模型給藥結(jié)束后尿蛋白、血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)的影響(±s,n=10)

注:與模型對(duì)照組比較,* p<0.05, ** p<0.01

組別 劑量(g.kg-1)尿蛋白(mg.L-1)Scr (μmol.L-1) BUN (mmol.L-1)空白對(duì)照組 —— 575.2±91.5** 99.4±6.3** 7.0±1.9**模型對(duì)照組 —— 1299.8±172.2 150.8±12.6 17.6±1.9醋酸地塞米松組 0.1 mg.kg-11144.6±143.5*133.4±9.6**12.9±4.4**復(fù)方保腎顆粒高劑量組 3.6 1184.4±154.0 143.0±8.4 15.5±3.4復(fù)方保腎顆粒中劑量組 1.8 1136.5±152.1*138.7±13.7* 13.4±5.9*復(fù)方保腎顆粒低劑量組 0.9 1137.7±164.7*139.7±8.3* 13.6±2.8*

3.2 復(fù)方保腎顆粒對(duì)甘油法致大鼠急性腎功能衰竭模型血清總蛋白、血清K+、Na+的影響

與空白對(duì)照組相比,模型對(duì)照組動(dòng)物血清總蛋白顯著降低,血清Na+顯著升高,模型對(duì)照組相比,復(fù)方保腎顆粒各劑量組含量動(dòng)物血清總蛋白、血清Na+含量均無(wú)明顯變化(p>0.05),但均有改善趨勢(shì)。各組動(dòng)物血清K+均無(wú)明顯差異(p>0.05)。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 復(fù)方保腎顆粒對(duì)甘油法致大鼠急性腎功能衰竭模型血清總蛋白、血清K+、Na+的影響(±s,n=10)

表2 復(fù)方保腎顆粒對(duì)甘油法致大鼠急性腎功能衰竭模型血清總蛋白、血清K+、Na+的影響(±s,n=10)

注:與模型對(duì)照組比較,*p<0.05, **p<0.01

組別 劑量(g.kg-1)血清總蛋白(μg.mL-1) K+ (mmol.L-1) Na+(mmol.L-1)空白對(duì)照組 —— 77.4±21.5** 5.55±0.88 109.3±17.8**模型對(duì)照組 —— 52.9±13.5 5.32±0.82 131.7±7.8醋酸地塞米松組 0.1 mg.kg-169.9±12.0* 5.47±0.77 117.6±11.0*復(fù)方保腎顆粒高劑量組 3.6 59.5±21.5 5.13±0.64 121.2±15.4復(fù)方保腎顆粒中劑量組 1.8 62.3±13.6 5.79±0.71 123.0±11.1復(fù)方保腎顆粒低劑量組 0.9 53.6±17.8 5.84±0.92 121.7±13.4

3.3 復(fù)方保腎顆粒對(duì)甘油法致大鼠急性腎功能衰竭模型腎臟系數(shù)的影響

與空白對(duì)照組相比,模型對(duì)照組動(dòng)物腎臟系數(shù)極其明顯的提高,與模型對(duì)照組相比,復(fù)方保腎顆粒高、中、低劑量組,醋酸地塞米松組動(dòng)物腎臟系數(shù)均有不同程度的明顯降低(p<0.01或p<0.05),結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 復(fù)方保腎顆粒對(duì)甘油法致大鼠急性腎功能衰竭模型腎臟系數(shù)的影響(±s,n=10)

表3 復(fù)方保腎顆粒對(duì)甘油法致大鼠急性腎功能衰竭模型腎臟系數(shù)的影響(±s,n=10)

注:與模型對(duì)照組比較,* p<0.05, ** p<0.01

組別 劑量(g.kg-1)腎臟系數(shù)(g/g體重×100%)空白對(duì)照組 —— 0.920±0.069**模型對(duì)照組 —— 2.162±0.441醋酸地塞米松組 0.1 mg.kg-11.653±0.435**復(fù)方保腎顆粒高劑量組 3.6 1.791±0.412*復(fù)方保腎顆粒中劑量組 1.8 1.658±0.344**復(fù)方保腎顆粒低劑量組 0.9 1.622±0.332**

4 討論

復(fù)方保腎顆粒由黃芪、絡(luò)石藤、魚(yú)腥草等配伍為用,其中君藥黃芪補(bǔ)脾升陽(yáng)、利尿消腫,全方組合具有祛風(fēng)清熱利濕,活血通絡(luò)的作用。本實(shí)驗(yàn)所采用的甘油法致大鼠急性腎功能衰竭模型屬橫紋肌溶解所致,外傷性和非外傷性橫紋肌溶解所致的急性腎功能衰竭約占臨床所有急性腎衰病例的15%~20%,且橫紋肌溶解性急性腎衰透析治療效果欠佳,死亡率高。大量臨床研究證實(shí)他汀類藥物引起橫紋肌溶解性急性腎衰的發(fā)生率約為0.1%[7]。大鼠注射50%甘油后,腎血流減少,腎小管內(nèi)皮細(xì)胞腫脹,增大了腎血管阻力,血管節(jié)段性壞死,外膜纖維化,血管自身調(diào)節(jié)功能喪失,導(dǎo)致腎小球?yàn)V過(guò)率下降。另外,腎小球及腎小管周圍纖維蛋白沉積,血管內(nèi)血瘀積,血栓形成, 血流不暢, 導(dǎo)致腎小球?yàn)V過(guò)率下降,腎小管壞死[8]。

在本實(shí)驗(yàn)中,造模后的大鼠模型在腎功能和腎臟方面表現(xiàn)出明顯改變,主要體現(xiàn)在尿蛋白濃度升高,血清肌酐、尿素氮含量升高,導(dǎo)致血清總蛋白含量下降,腎臟指數(shù)明顯增大,表明造模成功。結(jié)果顯示,復(fù)方保腎顆粒能降低模型大鼠的尿蛋白、血肌酐、血尿素氮的含量,并在一定程度上減輕了腎臟的病理?yè)p害。關(guān)于復(fù)方保腎顆粒治療該動(dòng)物模型的作用機(jī)制,還有待于我們進(jìn)一步深入研究。

[1] 葉任高,陸再英,謝毅,等.內(nèi)科學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社, 2004: 536.

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(責(zé)任編輯:陳思敏)

The effects of Fufangbaoshen granule on acute renal failure rat induced by glycerin

LIN Bo, XIANG Li, LIU Yu, SHI Jinfeng, ZHANG Gui, ZENG Yong, MENG Xian-li, CHEN Xiao-rui//(School of Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine; Key Laboratory of Standardization for Chinese Herbal Medicine, Ministry of Education; National Key Laboratory Breeding Base of Systematic Research, Development and Utilization of Chinese Medicine Resources, Chengdu 611137, Sichuan)

Objective:The effects of Fufangbaoshen granule on acute renal failure rat induced by glycerin were investigated.Method:Acute renal failure rats were induced by injection of 50% (v/v, i.m) glycerin into the leg muscle (10 mL.kg-1). And then rats were divided into model group, Fufangbaoshen granule group (3.6、1.8、0.9 g.kg-1), dexamethasone group. Normal control group was also used in the experiment. After intragastric administration for 4 days, the indexes including urine protein, SCR, BUN and serum total protein, the content of K+and Na+, and kidney coeffcient of rats were tested.Result:Fufangbaoshen granule could not only signifcantly decrease the contents of urine proteins,Scr and BUN, but also decrease rats' kidney index.Conclusion:Fufangbaoshen granule shows protective effect on acute renal failure rat induced by glycerin.

Fufangbaoshen granule; acute renal failure; urine protein; Scr; BUN

R 285.5

A

1674-926X(2015)04-006-03

四川省科技廳省青年科技創(chuàng)新研究團(tuán)隊(duì)專項(xiàng)計(jì)劃項(xiàng)目(2014TD0007)

成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院 中藥材標(biāo)準(zhǔn)化教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 中藥資源系統(tǒng)研究與開(kāi)發(fā)利用省部共建國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地,四川 成都 611137

林波,在讀碩士研究生,主要從事中藥藥效與毒理研究Tel:15828511724 Email:linbo0319@qq.com

陳小睿,副教授,碩導(dǎo),主要從事中藥藥效與毒理研究 Tel:13882071427 Email:icelolly@yahoo.cn

2014-09-10

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