王雪梅，王飛飛，田海霞，黃冀東

北京知蜂堂蜂產(chǎn)品有限公司，北京 102200

巴西蜂膠和國產(chǎn)蜂膠乙醇濃縮液對(duì)2型糖尿病大鼠糖、脂代謝的影響研究

王雪梅，王飛飛，田海霞，黃冀東

北京知蜂堂蜂產(chǎn)品有限公司，北京 102200

目的 探討巴西蜂膠和國產(chǎn)蜂膠醇濃縮液對(duì)二型糖尿病大鼠血糖、血脂代謝的影響。方法選用SD大鼠高脂飼料喂養(yǎng)結(jié)合STZ誘導(dǎo)建立二型糖尿病大鼠模型，將模型隨機(jī)分成7組，國產(chǎn)蜂膠組，巴西蜂膠組，二甲雙胍陽性藥組，國產(chǎn)蜂膠+陽性藥組，巴西蜂膠+陽性藥組，模型對(duì)照組，并設(shè)置空白對(duì)照組。給藥干預(yù)1個(gè)月后，觀察治療期間及治療后大鼠的生理體征，檢測(cè)空腹血糖、糖耐量、總膽固醇和甘油三酯量。結(jié)果巴西蜂膠組和國產(chǎn)蜂膠組對(duì)大鼠的生理體征比較模型組均明顯改善；治療前后，巴西蜂膠組血糖曲線下面積降低率23.87%，國產(chǎn)蜂膠組為18.33%；巴西蜂膠組總膽固醇下降率為24.88%，甘油三酯下降率為77.14%，國產(chǎn)蜂膠組總膽固醇下降率為65.03%，甘油三酯下降率為85.94%。結(jié)論巴西蜂膠組和國產(chǎn)蜂膠組均有輔助降血糖的功效；國產(chǎn)蜂膠組比較巴西蜂膠組降血脂的功效更佳。

巴西蜂膠；國產(chǎn)蜂膠；2型糖尿病模型；糖耐量；血脂

蜂膠的成分極為復(fù)雜，主要成分是蜂蠟、樹脂、黃酮類物質(zhì)和揮發(fā)性物質(zhì)，后3種物質(zhì)是從植物中獲得的，因此蜂膠的成分與膠原植物密切相關(guān)。我國蜂膠的代表性類型主要是來源于楊樹的蜂膠。巴西蜂膠可分為12類，膠原植物主要有山香、白楊、酒神菊類，其中以酒神菊類為膠原植物的綠蜂膠是巴西蜂膠的代表[1]。該實(shí)驗(yàn)研究對(duì)巴西蜂膠和國產(chǎn)蜂膠降血糖、血脂的功效進(jìn)行了對(duì)比，并研究了蜂膠輔助陽性藥對(duì)治療功效的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料

1.1 儀器

羅康全活力Ⅱ型血糖儀：德國羅氏診斷公司；先行者通用型電子天平：北京朗科興業(yè)稱重設(shè)備有限公司；Sigma1-14微型臺(tái)式高速離心機(jī)：美國sigma公司；721型紫外可見分光光度計(jì)：上海精科分析儀器公司。

1.2 動(dòng)物

SPF級(jí)SD雄性大鼠，3～4周，60只，購于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，許可證編號(hào)：SCXK（京）2011-0011。

1.3 樣品制備

該實(shí)驗(yàn)使用蜂膠濃縮液樣品，采用本公司專利方法制備[2]。首先毛膠經(jīng)過低溫處理后粉粹，篩除可見金屬；蜂膠用一定濃度酒精溶解后用超聲波進(jìn)行提取，過濾，濃縮，熟化等一系列工序，最終得到蜂膠濃縮液。

1.4 試劑

血糖試紙購于德國羅氏診斷公司；鏈脲佐菌素（STZ），美國Sigma公司；檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，北京市博愛港商貿(mào)有限公司；D-無水葡萄糖，北京欣賽維化學(xué)科技有限公司；總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）測(cè)定試劑盒，購于南京建成科技有限公司。

2 方法

2.1 動(dòng)物模型的建立

購買SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d后，將其隨機(jī)分為A、B兩組，A組50只，B組10只。A為高脂飼料組，喂食高脂高糖飼料,B為空白對(duì)照組，喂食普通飼料。喂養(yǎng)30天，模型組體重達(dá)到260 g左右，造成肥胖體質(zhì)，即可開始STZ藥物誘導(dǎo)。

STZ誘導(dǎo)前，高脂飼料組禁食12 h，STZ按照40 mg/kg體重進(jìn)行腹腔注射誘導(dǎo)。注射72 h后測(cè)空腹血糖，需禁食12 h。以空腹血糖＞11.1 mmol/L為2型糖尿病模型標(biāo)準(zhǔn)[3]。

2.2 動(dòng)物分組及給藥方法

從成模的大鼠中選取空腹血糖在11.1～25.0之間的大鼠42只，隨機(jī)分成6組：國產(chǎn)蜂膠組，巴西蜂膠組，二甲雙胍陽性藥組，國產(chǎn)蜂膠+陽性藥組，巴西蜂膠+陽性藥組，模型對(duì)照組。試驗(yàn)期間普通飼料喂養(yǎng)，給藥4周，采取灌胃給藥方式。

依據(jù)《中華人民共和國藥典》2010版規(guī)定的蜂膠使用量在0.2～0.6 g之間。故我們選擇0.5 g作為治療劑量，既能達(dá)到好的治療效果，又不會(huì)產(chǎn)生藥理毒性。

則將成年人（體重60 kg）的用藥量換算動(dòng)物的給藥量。單位體重的人：SD大鼠=1:6；則SD大鼠給蜂膠和陽性藥的劑量均為0.025 g/kg（SD體重）。給藥劑量如表1所示。

2.3 檢測(cè)指標(biāo)

①試驗(yàn)期間每天觀察并記錄動(dòng)物的進(jìn)食、體重，排泄和精神活動(dòng)等生理指標(biāo)；②監(jiān)測(cè)空腹血糖；③治療1個(gè)月結(jié)果后進(jìn)行口服葡萄糖耐量試驗(yàn)，取時(shí)間點(diǎn)為0 h，0.5 h，1 h，2 h，繪制葡萄糖耐量曲線，計(jì)算血糖曲線下面積降低率，如式1，式2；血糖曲線下面積＝（0 h血糖＋0.5 h血糖）×0.5/2+（2 h血糖＋0.5 h血糖）×1.5/2（式1）；血糖曲線下面積降低率%=（實(shí)驗(yàn)前血糖曲線下面積－實(shí)驗(yàn)后血糖曲線下面積）/實(shí)驗(yàn)前血糖曲線下面積×100%（式2）；④檢測(cè)血清中總膽固醇、甘油三酯。

2.4 試驗(yàn)數(shù)據(jù)分析

根據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范實(shí)施手冊(cè)》最新修訂后的相關(guān)規(guī)定，空腹血糖和餐后糖耐量兩項(xiàng)指標(biāo)中一項(xiàng)指標(biāo)陽性，且對(duì)正常動(dòng)物空腹血糖無影響，即可判定該受試樣品輔助降血糖功能動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽性。

2.5 統(tǒng)計(jì)方法

3 結(jié)果

3.1 各組治療前后體重的變化

模型動(dòng)物均出現(xiàn)“三多一少的癥狀”。該試驗(yàn)對(duì)此4個(gè)表癥進(jìn)行了觀察和記錄，詳細(xì)分析了給藥后模型的排尿量和體重的變化。治療前后體重的變化如圖1、圖2所示，數(shù)據(jù)均為治療4周所得，所有體重為每組的平均值。

由圖1和圖2得出：不同給藥組在治療前后對(duì)2型糖尿病大鼠模型體重的控制效果排序?yàn)椋宏栃运?國產(chǎn)蜂膠組＞空白組＞國產(chǎn)蜂膠組＞陽性藥+巴西蜂膠組＞巴西蜂膠組＞陽性藥組＞陰性組，即若以體重作為治療糖尿病效果的參考指標(biāo)，國產(chǎn)蜂膠的治療效果最佳，對(duì)體重的控制效果最好。

3.2 各組治療前后排尿量的變化

通過稱量每天墊料的質(zhì)量來監(jiān)測(cè)不同給藥組的排尿量。

由圖3可以看出，巴西蜂膠給藥組對(duì)排尿的作用最好。其次為國產(chǎn)蜂膠組和陽性藥組。

3.3 各組治療前后空腹血糖的變化

由表2可看出治療過程中巴西蜂膠、國產(chǎn)蜂膠、陽性藥+巴西蜂膠，陽性藥+國產(chǎn)蜂膠對(duì)二型糖尿病大鼠的空腹血糖均有顯著的調(diào)節(jié)作用，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）,蜂膠輔助陽性藥對(duì)功效的影響不明顯，陽性藥在控制空腹血糖后期效果不佳。

3.4 各組治療前后糖耐量的變化

進(jìn)行口服葡萄糖耐量試驗(yàn)，取時(shí)間點(diǎn)為0 h，0.5 h，1 h，2 h，繪制葡萄糖耐量曲線，計(jì)算血糖曲線下面積降低率，見圖4和表3。

由圖4和表3可以看出如下規(guī)律：不同治療組給藥后血糖控制差別不大。其中，陽性給藥組控制效果最佳，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）,巴西蜂膠組，陽性藥組+國產(chǎn)蜂膠組控制效果次之，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；國產(chǎn)蜂膠組，陽性藥+巴西蜂膠組效果稍差，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），且血糖有上升趨勢(shì)；陰性藥組效果最差。

表3 不同給藥組針對(duì)2型糖尿病模型及糖耐量異常模型血糖曲線下面積降低率（±s）

注：與陰性對(duì)照組相比，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別血糖曲線下面積血糖曲線下面積降低率（%）A1 A2 A3 A4 A5 A6（40.18±5.54）**（43.10±4.51）**（39.65±4.05）**（46.03±6.46）**（40.78±4.89）**52.78±3.42 23.87 18.33 24.87 18.74 22.74

3.5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)各組總膽固醇含量的比較

該試驗(yàn)在治療結(jié)束后，眼球取血分離血清，檢測(cè)血清中總膽固醇含量，見圖5。

圖5數(shù)據(jù)表明：與陰性對(duì)照組相比，治療組降總膽固醇的效果如下：國產(chǎn)蜂膠組＞陽性藥+國產(chǎn)蜂膠組＞陽性藥+巴西蜂膠組＞陽性藥組＞巴西蜂膠組。

3.6 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)各組甘油三酯含量的比較

圖6數(shù)據(jù)顯示：與陰性對(duì)照組相比，治療組降甘油三酯的效果如下：國產(chǎn)蜂膠組＞陽性藥+巴西蜂膠組＞巴西蜂膠組＞陽性藥+國產(chǎn)蜂膠組＞陽性藥組。

3.7 實(shí)驗(yàn)結(jié)論

該試驗(yàn)初步得出如下結(jié)論。

①在控制糖尿病大鼠生理體征方面，國產(chǎn)蜂膠對(duì)2型糖尿病大鼠的體重控制效果最佳；巴西蜂膠對(duì)2型糖尿病大鼠的排尿量控制效果最佳。

②在控制血糖的效果上，巴西蜂膠和國產(chǎn)蜂膠輔助降空腹和餐后血糖結(jié)果均成陽性，故巴西蜂膠和國產(chǎn)蜂膠能有效控制和調(diào)節(jié)2型糖尿病大鼠的血糖，具有輔助降血糖的功能；且巴西蜂膠和國產(chǎn)蜂膠降血糖功效差異不大。

③在控制血糖的效果上，國產(chǎn)蜂膠降總膽固醇和甘油三酯的效果最佳，優(yōu)于巴西蜂膠。

④蜂膠替代陽性藥控制血糖的效果均較好，可以用蜂膠替代部分化學(xué)藥物，減少藥物帶給人的傷害。

4 討論

蜂膠降血糖的機(jī)理主要有以下幾種說法：①對(duì)胰島細(xì)胞的修復(fù)作用：蜂膠中含有胰蛋白酶等多種活性酶類和黃酮類、萜烯類等多種活性物質(zhì)，能活化細(xì)胞，促進(jìn)胰島細(xì)胞和組織再生[4]；②清自由基機(jī)理：大量研究表明，在糖尿病人的體內(nèi)，血糖的升高和自由基升高有關(guān)聯(lián)。蜂膠中因富含黃酮類、萜烯類等強(qiáng)抗強(qiáng)化能力的物質(zhì)，能有效的清除自由基，進(jìn)一步增加了細(xì)胞活性[5]；③抑制α-葡萄糖苷酶的活性：α-葡萄糖苷酶存在小腸上皮內(nèi)，是經(jīng)消化的雙糖和低聚糖分解成單個(gè)葡萄糖的限速酶。蜂膠中4-’甲楊梅素-鼠李糖苷、楊梅素等黃酮醇類物質(zhì)能有效抑制該酶的活性[6]，進(jìn)而延緩雙糖和低聚糖的吸收，降低餐后血糖。

國產(chǎn)蜂膠總黃酮約8%，酚酸類含量較高；巴西蜂膠總黃酮約4%，萜烯類含量較高，且以其中的3,5-二異戊烯-4-甲氧基桂皮（Artepillin C)為代表[7-8]。各種蜂膠的功效基本一致，都以抑菌、抗氧化、消炎為基礎(chǔ)功效，其他功能如降脂、緩解糖尿病并發(fā)癥、免疫調(diào)節(jié)、延緩衰老等作用都是基礎(chǔ)功效協(xié)同作用的結(jié)果。由于國產(chǎn)蜂膠中總黃酮的含量比巴西蜂膠高，則降血脂功效方面功效更佳。巴西蜂膠沒有區(qū)別于國產(chǎn)蜂膠的特有功效，只是它的功效因子含量和比例略優(yōu)于國產(chǎn)蜂膠而導(dǎo)致它的衍生功效更為突出。

蜂膠的成分復(fù)雜，功效較多，但其功效成分和作用機(jī)理需要深一步的研究和發(fā)掘，使其在醫(yī)療保健方面應(yīng)用更加廣泛。

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R59

2015-05-21）

王雪梅（1986.11-），女，湖北荊門人，醫(yī)學(xué)碩士，研究方向：微生物與生化藥學(xué)。