張 瑩

(天津市藥品檢驗(yàn)所，天津 300070)

?

藥品快速分析的研究進(jìn)展

張 瑩

(天津市藥品檢驗(yàn)所，天津 300070)

藥品快速分析技術(shù)的開展，以其全面、科學(xué)、簡(jiǎn)便快捷的分析方法已在藥品分析領(lǐng)域得到越來越廣泛的應(yīng)用。本文闡述了近幾年應(yīng)用于藥品快速檢驗(yàn)分析比較常用的光譜法、色譜與質(zhì)譜方法、微生物檢查法以及酶聯(lián)免疫檢查法，并對(duì)這些分析方法的發(fā)展做了展望。

藥品，快速分析，光譜法，色譜與質(zhì)譜法，微生物檢驗(yàn)法，酶聯(lián)免疫檢測(cè)法

當(dāng)前，藥品領(lǐng)域不斷出現(xiàn)制假售假事件，手段不斷翻新,已給百姓的身體健康帶來了嚴(yán)重的危害。傳統(tǒng)的藥品鑒別及含量測(cè)定方法對(duì)于現(xiàn)場(chǎng)抽檢、藥品快速定性和定量分析，有一定局限性。因此藥品快速分析技術(shù)也越來越得到重視，檢測(cè)檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)及儀器生產(chǎn)廠商紛紛緊跟形勢(shì)，檢測(cè)技術(shù)也是不斷創(chuàng)新?？焖俜治龅膬?yōu)勢(shì)在于簡(jiǎn)單、迅速、經(jīng)濟(jì)、環(huán)保，便于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)和突發(fā)事件的快速處理。其作為一個(gè)現(xiàn)場(chǎng)篩查的手段并非是最終結(jié)果判定的仲裁方法，但可以提高監(jiān)督抽驗(yàn)的假劣藥品的命中率，更好地發(fā)揮藥品檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)監(jiān)督作用。以下本文就藥品快速分析的研究進(jìn)展做一綜述。

1 光譜法快速分析

1.1 近紅外光譜的應(yīng)用 近紅外光譜(NIR)分析是利用有機(jī)化合物在近紅外譜區(qū)的光學(xué)特性，快速測(cè)定物質(zhì)化學(xué)組成和分子結(jié)構(gòu)的光譜技術(shù)，光譜范圍介于可見光譜區(qū)與中紅外光譜區(qū)之間，波數(shù)范圍為12 800～4 000 cm-1。該法簡(jiǎn)單、快速、高效、環(huán)保，可直接分析固體樣品，目前已廣泛應(yīng)用于藥品質(zhì)量控制和在線分析。

王海波等[1]對(duì)國(guó)內(nèi)多家生產(chǎn)企業(yè)的頭孢克肟膠囊進(jìn)行分析，實(shí)驗(yàn)采用光纖探頭測(cè)定近紅外漫反射光譜，定量模型的預(yù)處理方法是一階導(dǎo)數(shù)同矢量歸一化，波數(shù)范圍：11 995.2～7 498 cm-1和6 101.7～5 773.9 cm-1，采用偏最小二乘回歸算法(PLSR) 對(duì)頭孢克肟膠囊進(jìn)行快速、無(wú)損定量分析。定性方面能夠?qū)㈩^孢克肟膠囊與其他頭孢菌素類膠囊相區(qū)別，以此作為鑒別。鄭方曄等[2]采用近紅外光譜手段快速定性及定量分析呋喃妥因腸溶片，實(shí)驗(yàn)選用第二和第三因子建立不同品種定性鑒別模型，用以消除其他干擾因素的影響。定量模型建立的關(guān)鍵是找到特定譜段，選擇最合適的光譜預(yù)處理方法，消除輔料的干擾，顯示出正確的活性成分。本方法測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確、操作簡(jiǎn)便，適合于藥品快速檢驗(yàn)。侯少瑞等[3]采用近紅外光譜法快速分析注射用頭孢曲松鈉的含量及其水分。

李家春等[4]建立近紅外光譜技術(shù)快速測(cè)定白芍藥材芍藥苷的方法，實(shí)驗(yàn)以高效液相色譜法測(cè)定樣品中芍藥苷的含量，使用偏最小二乘(PLS)法建立白芍藥材中芍藥苷含量與其近紅外光譜之間的多元校正模型，可以對(duì)未知樣品預(yù)測(cè)含量。結(jié)果表明，該方法為白芍藥材質(zhì)量的快速評(píng)價(jià)和在線檢測(cè)提供了依據(jù)，可用于白芍藥材中芍藥苷含量的快速分析。同樣，肖浩等[5]利用近紅外光譜法能夠準(zhǔn)確地區(qū)分廣升麻藥材與其混用品。戴涌等[6]運(yùn)用近紅外光譜法對(duì)呋喃妥因腸溶片進(jìn)行一致性檢驗(yàn)。

1.2 光纖傳感紫外光譜的應(yīng)用 近些年，新疆醫(yī)科大學(xué)在光纖傳感技術(shù)應(yīng)用于藥物檢驗(yàn)檢測(cè)方面做了許多工作。例如：李莉等[7]將光纖傳感紫外光譜技術(shù)應(yīng)用于氫氯噻嗪片快速定量分析。該方法將傳輸信號(hào)的光導(dǎo)纖維、光纖探頭、光譜儀和計(jì)算機(jī)軟件數(shù)據(jù)處理功能相結(jié)合，探頭直接插入待測(cè)樣片的溶液里，很快得到待測(cè)樣品的特征圖譜，與標(biāo)準(zhǔn)圖譜庫(kù)中的標(biāo)準(zhǔn)圖譜及相關(guān)信息相比較分析并計(jì)算出樣品含量。為了消除輔料干擾，實(shí)驗(yàn)采用雙波長(zhǎng)法，該法樣品無(wú)需過濾。測(cè)定結(jié)果表明，樣品圖譜與標(biāo)準(zhǔn)圖譜特征參數(shù)相互符合；氫氯噻嗪在10～60 μg/ml濃度范圍之內(nèi)，線性關(guān)系良好(r=0.999 7)，回收率為100.05%，與《中國(guó)藥典》方法(高效液相色譜法)測(cè)定結(jié)果非常接近(P>0.05)。同樣的方法，馮翠娟等[8]采用光纖傳感分析技術(shù)對(duì)鹽酸普萘洛爾片進(jìn)行快速定性及定量分析。靳露等[9]結(jié)合紫外光譜建立了光纖傳感分析技術(shù)快速分析甲硝唑片的方法。李莉等[10]運(yùn)用光纖傳感技術(shù)快速定量分析復(fù)方卡托普利片。

1.3 原子光譜的應(yīng)用 原子吸收分光光度法(AAS)是利用氣態(tài)原子可以吸收一定波長(zhǎng)的光輻射，使原子中外層的電子從基態(tài)躍遷到激發(fā)態(tài)的現(xiàn)象而建立的。由于各種原子中電子的能級(jí)不同，將選擇性吸收一定波長(zhǎng)的輻射光，這個(gè)共振吸收波長(zhǎng)恰好等于該原子受激發(fā)后發(fā)射光譜的波長(zhǎng)，由此可作為元素定性的依據(jù)，而吸收輻射的強(qiáng)度可作為定量的依據(jù)。該法準(zhǔn)確度高、檢出限低、選擇性好、分析速度快、應(yīng)用廣，主要用于樣品微量和痕量分析中。

近些年，微波消解的制樣方法廣泛應(yīng)用于中藥的痕量分析上，運(yùn)行等[11]采用微波消解-原子熒光光譜法測(cè)定了宮瘤消片中砷、鎘的含量，結(jié)果砷、鎘的線性范圍為0～25.0 μg/L(r>0.999 2)，砷的最低檢出量為 5.1 μg/kg，鎘的最低檢出量為0.7 μg/kg，回收率為91.5%～97.8%,RSD<5%。表明該方法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，結(jié)果令人滿意。劉全德等[12]采用直接進(jìn)樣石墨爐原子吸收分光光度法測(cè)定雙黃連口服液中的鉛含量。基體改進(jìn)劑為十二烷基硫酸鈉，氬氣作為保護(hù)氣體，灰化溫度為600 ℃，原子化溫度為1 800 ℃。該方法簡(jiǎn)便，無(wú)污染，分析范圍廣并可準(zhǔn)確測(cè)定含量。何曉梅等[13]建立微波消解-氫化物發(fā)生-原子熒光光譜法測(cè)定二氧化鈦中痕量砷和銻。

2 色譜與質(zhì)譜法快速分析

2.1 液相色譜法 高效液相色譜法(HPLC)是藥品檢驗(yàn)中最為常用的一種方法，具有分離效能高、分析速度快、選擇性強(qiáng)及靈敏度高等諸多優(yōu)點(diǎn)。超臨界流體色譜(SFC)是以超臨界流體作為流動(dòng)相的一種色譜方法，兼具氣相色譜和液相色譜的特點(diǎn)，分析速度更快。李振宇等[14]采用超臨界流體色譜技術(shù)對(duì)吳茱萸中吲哚類生物堿進(jìn)行快速分析，以Waters ACQUITY UPC2BEH為色譜柱，柱溫35 ℃，背壓為2.07×107Pa，改性劑為甲醇，多組分樣品在15 min內(nèi)達(dá)到快速分析，結(jié)果令人滿意。張琳等[15]建立微波萃取高效液相色譜法快速分析牽牛子中咖啡酸，提取時(shí)間將索氏提取法的540 min縮減為5 min。結(jié)果采用微波萃取法,咖啡酸與其他雜質(zhì)峰分離度較好，選擇性強(qiáng)。董玉等[16]建立高效液相色譜法測(cè)定蒙藥冬葵果中咖啡酸的含量。

2.2 質(zhì)譜法 質(zhì)譜法(MS)是用電場(chǎng)和磁場(chǎng)將運(yùn)動(dòng)的離子按照質(zhì)荷比分離后進(jìn)行檢測(cè)的方法。測(cè)得離子準(zhǔn)確質(zhì)量后確定離子的化合物組成。通過分析離子從而獲得化合物分子量、化學(xué)結(jié)構(gòu)、裂解規(guī)律等相關(guān)信息。該方法微量、快速，可以準(zhǔn)確測(cè)定相對(duì)分子質(zhì)量，因此在樣品快速分析中發(fā)揮著重要作用。

陳榮等[17]利用阿莫西林的不穩(wěn)定性，對(duì)降解產(chǎn)物放電產(chǎn)生大量試劑離子，特征降解產(chǎn)物離子流圖與阿莫西林總離子流質(zhì)譜圖進(jìn)行比對(duì)與確認(rèn)，用一級(jí)質(zhì)譜快速分析阿莫西林抗生素類藥物。胡斌等[18]利用納升電噴霧萃取電離質(zhì)譜法(NanoEESI-MS)對(duì)人參皂苷的結(jié)構(gòu)進(jìn)行定性分析，快速鑒別人參。該法快速且準(zhǔn)確，有很大的應(yīng)用價(jià)值。

2.3 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS)接口技術(shù)的研究始于上世紀(jì)70 年代初，開始的20年發(fā)展非常緩慢，直到大氣壓離子化(API)接口技術(shù)的問世，液-質(zhì)聯(lián)用才得到迅猛發(fā)展，因其選擇性強(qiáng)、靈敏度高、可以一次完成分離與結(jié)構(gòu)的確認(rèn)，而廣泛應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)室內(nèi)分析和應(yīng)用領(lǐng)域。馮廣衛(wèi)等[19]確立超高效液相色譜-電噴霧電離質(zhì)譜(UPLC-ESI/MS)快速鑒別和分析葒草素與異葒草素、牡荊素與異牡荊素碳苷化合物的方法。實(shí)驗(yàn)選用BEH C18作為固定相，以甲醇(A)-0.1%甲酸水溶液(B)為流動(dòng)相，梯度洗脫，流速為0.3 ml/min,進(jìn)樣量為2 μl,用三重四極桿質(zhì)譜的正離子多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)結(jié)合碰撞誘導(dǎo)解離(CID)快速并準(zhǔn)確地鑒別和分析兩對(duì)異構(gòu)體。汪祺等[20]以生脈注射液高效液相色譜指紋圖譜為基礎(chǔ)，建立超高效液相色譜指紋圖譜，將時(shí)間從90 min減至25 min，利用超高效液相色譜與離子阱質(zhì)譜聯(lián)用，為藥物分析提供了高效且靈敏的分析技術(shù)，同時(shí)提高藥品質(zhì)量控制水平。

2.4 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(GC-MS)是當(dāng)前最成熟且應(yīng)用最為廣泛的技術(shù)，多用于鑒別和分離復(fù)雜組分的樣品，并具有較高的靈敏度和分辨率。張福成等[21]采用離子液體-頂空氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)快速分析百草油中揮發(fā)性成分。實(shí)驗(yàn)采用HP-5MS 彈性石英毛細(xì)管氣相色譜柱；程序升溫方式，起始溫度為 100 ℃，以 4 ℃/min 升至 112 ℃，再以10 ℃/min升至182 ℃，保持10 min；分流進(jìn)樣比為50∶1，結(jié)果總共檢測(cè)出百草油中的11種揮發(fā)性成分，適用于百草油中揮發(fā)性成分的快速鑒定。趙錦花等[22]采用氣流吹掃微注射器萃取同氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法快速分析長(zhǎng)白山不同區(qū)域的人參中揮發(fā)性與半揮發(fā)性成分快速分析方法，分離出45種化合物，不同區(qū)域人參中揮發(fā)性與半揮發(fā)性成分組成相近，但含量結(jié)果差異顯著。

3 其他方法

3.1 微生物檢驗(yàn)法 當(dāng)今，越來越多采用分子生物學(xué)和生物發(fā)光微生物檢驗(yàn)技術(shù)進(jìn)行快速分析。2010年版《中國(guó)藥典》[23]也提出了微生物檢驗(yàn)替代方法驗(yàn)證的指導(dǎo)原則，規(guī)定在采用新方法替代時(shí)必須做方法學(xué)驗(yàn)證。王知堅(jiān)等[24]用紙片法替代《中國(guó)藥典》方法對(duì)厄多司坦膠囊菌落計(jì)數(shù)，通過數(shù)據(jù)處理，分析結(jié)果表明，紙片法所有驗(yàn)證參數(shù)同《中國(guó)藥典》方法非常接近，無(wú)顯著差異(P>0.05)，且該方法快速、準(zhǔn)確，可用于厄多司坦膠囊菌落計(jì)數(shù)的快速分析。

3.2 酶聯(lián)免疫檢測(cè)法 酶聯(lián)免疫檢測(cè)法(ELISA)是采用抗原與抗體的特異反應(yīng)將待測(cè)物與酶連接，然后通過酶與底物產(chǎn)生顏色反應(yīng)，用于定量測(cè)定。測(cè)定的對(duì)象可以是抗體也可以是抗原。抗原或抗體先結(jié)合在固相載體上，加一種抗體或抗原與酶結(jié)合成的偶聯(lián)物(標(biāo)記物)，當(dāng)偶聯(lián)物與固相載體上的抗原或抗體反應(yīng)結(jié)合后，再加上酶的相應(yīng)底物催化水解而產(chǎn)生顏色，其顏色與待測(cè)的抗原或抗體含量成正比。由于該法簡(jiǎn)單、靈敏、分析迅速、特異性強(qiáng)，近來被越來越多地應(yīng)用于抗生素殘留分析當(dāng)中。劉兵等[25]運(yùn)用混合酸酐法，將恩諾沙星與牛血清白蛋白和卵清蛋白分別制備免疫抗原和包被抗原，然后用背部多點(diǎn)皮下注射免疫日本大耳白兔，進(jìn)行抗恩諾沙星特異性抗血清的制備，利用特異性抗血清，建立了監(jiān)控體內(nèi)恩諾沙星濃度的酶聯(lián)免疫檢測(cè)法，結(jié)果該方法具有良好的相關(guān)性，可用于初篩及現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)，并為開發(fā)抗生素檢測(cè)試劑盒提供參考。

4 展望

綜上所述，藥品快速分析方法的應(yīng)用順應(yīng)了藥品安全事件頻發(fā)對(duì)藥品快速檢驗(yàn)的迫切需求。伴隨著人類社會(huì)的發(fā)展，人們的環(huán)保意識(shí)日漸增強(qiáng)，因此評(píng)價(jià)或選擇分析方法應(yīng)將操作簡(jiǎn)單、快速、預(yù)測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確、影響因素少等方面作為重要指標(biāo)。隨著聯(lián)用技術(shù)在藥品快速分析方面的應(yīng)用越來越廣，必將對(duì)我國(guó)藥物快速分析研究起巨大推動(dòng)作用。

1 王海波,朱健萍,鄧?guó)Q,等.近紅外光譜法快速分析頭孢克肟膠囊的含量[J].中國(guó)抗生素雜志，2014,39(1)：45-48

2 鄭方曄,李小安,單敏,等. 近紅外光譜法在呋喃妥因腸溶片快速分析中的應(yīng)用[J]. 藥物分析雜志,2014,34(4):742-746

3 侯少瑞,馮艷春,胡昌勤,等.近紅外光譜法快速分析注射用頭孢曲松鈉的含量及其水分[J].藥物分析雜志，2008,28(5)：936-936

4 李家春,蕭偉,孫蘭,等. 基于近紅外光譜的白芍藥材快速分析[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2012,18(6):57-59

5 肖浩,嚴(yán)小紅,江英橋,等. 近紅外光譜法快速分析廣升麻藥材[J].中國(guó)新藥與臨床藥理,2013,24(5):506-509

6 戴涌,李小安,劉雪峰,等. 運(yùn)用近紅外光譜法對(duì)呋喃妥因腸溶片進(jìn)行一致性檢驗(yàn)[J]. 藥物分析雜志,2010,30(11):2153-2156

7 李莉,李思棟,孫曉偉,等. 光纖傳感技術(shù)在氫氯噻嗪片快速分析中的應(yīng)用[J].新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2013,36(6):780-784

8 馮翠娟，李莉，張春玲，等.光纖傳感技術(shù)在普萘洛爾片快速分析方法學(xué)建立[J].藥物分析雜志，2012，32(4)：701-705

9 靳露,李莉,李新霞, 等. 光纖傳感技術(shù)結(jié)合紫外光譜相似度快速分析甲硝唑片[J]. 藥學(xué)學(xué)報(bào),2011,46(2):203-206

10 李莉,李思棟,孫穎平,等. 光纖傳感技術(shù)快速定量分析復(fù)方卡托普利片[J].中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué),2013,30(7):763-770

11 運(yùn)行,安迎雪,尤海丹, 等. 微波消解-原子熒光光譜法測(cè)定宮瘤消片中的砷、鎘[J]. 藥物分析雜志,2012,32(2):289-291

12 劉全德,劉恩岐,唐仕榮，等. 直接進(jìn)樣石墨爐原子吸收測(cè)定雙黃連口服液中鉛的含量 [J].藥物分析雜志, 2012,32(2):292-295

13 何曉梅,符靚,聶西度, 等. 微波消解-氫化物發(fā)生-原子熒光光譜法測(cè)定二氧化鈦中痕量砷和銻[J].冶金分析 ,2009,29(11):54-57

14 李振宇,傅青,李奎永，等. 超臨界流體色譜對(duì)吳茱萸中吲哚類生物堿的快速分析[J].色譜,2014,32(5):506-512

15 張琳,盧彥芳,蔣曄, 等. 微波萃取-HPLC法快速分析牽牛子中的咖啡酸[J]. 華西藥學(xué)雜志,2013,28(1):92-93

16 董玉,馬強(qiáng), 等. 高效液相色譜法測(cè)定蒙藥冬葵果中咖啡酸的含量[J]. 成都中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2010,33(1):76-78

17 陳榮,鄧慧宇,石俊. 熱降解輔助表面解吸常壓化學(xué)電離質(zhì)譜對(duì)阿莫西林的分析[J]. 藥物分析雜志,2012,32(3):478-482

18 胡斌,越皓,黃科科, 等.納升電噴霧萃取電離質(zhì)譜快速測(cè)定人參皂苷[J].高等學(xué)?；瘜W(xué)學(xué)報(bào),2011,32(6):1289-1294

19 馮廣衛(wèi),李翠兵,廖尚高，等. 葒草素和異葒草素、牡荊素和異牡荊素2對(duì)碳苷化合物的快速檢測(cè)與鑒定[J]. 藥物分析雜志,2011,31(7):1263-1268

20 汪祺,鄭笑為,于健東，等. 生脈注射液超高效液相色譜指紋圖譜的建立及特征成分分析[J]. 藥物分析雜志,2012,32(10):1813-1817

21 張福成,倪美萍,王朝虹, 等. 離子液體-頂空GC-MS法快速分析百草油中的揮發(fā)性成分[J]. 中國(guó)藥房,2013,24(39):3705-3076

22 趙錦花,楊翠,王娟, 等. 長(zhǎng)白山不同區(qū)域人參中揮發(fā)性、半揮發(fā)性成分的研究[J]. 延邊大學(xué)學(xué)報(bào),2014,40(1):85-88

23 中國(guó)藥典[S].二部.2010：附錄216-219

24 王知堅(jiān),李玨. 厄多司坦膠囊菌落計(jì)數(shù)替代方法的驗(yàn)證[J]. 藥物分析雜志,2011,31(11):2146-2149

25 劉兵,曾華金,楊冉, 等. 抗恩諾沙星抗血清的制備及其ELISA檢測(cè)[J]. 藥物分析雜志,2011,31(7):1283-1287

2014-10-10

R927.11

A

1006-5687(2015)02-0076-03