金宏麗，王化磊，鄭學(xué)星，楊松濤，夏咸柱

埃博拉病毒（Ebola virus,EBOV）是絲狀病毒科成員，為有囊膜、單股負(fù)鏈RNA病毒，可編碼7種蛋白：核蛋白（NP）、病毒結(jié)構(gòu)蛋白（VP35、VP40）、糖蛋白（GP）、額外病毒結(jié)構(gòu)蛋白（VP30、VP24）和RNA依賴的RNA聚合酶（L）[1-2]。EBOV感染人后，可引起嚴(yán)重的急性埃博拉病毒?。‥bola virus disease,EVD）。自1976年扎伊爾首次暴發(fā)EVD以來，現(xiàn)已知5種病毒亞型在人類和非人靈長類中暴發(fā)，包括扎伊爾型（Zaire EBOV,EBOV-Z）、蘇丹型（Sudan EBOV,EBOV-S）、塔伊森林型、萊斯頓型和本迪布焦型[3]。2014年3月21日幾內(nèi)亞首次報(bào)道近期EVD的暴發(fā)，隨即迅速在幾內(nèi)亞、利比里亞、塞拉利昂、馬里、尼日利亞和塞內(nèi)加爾傳播，同時(shí)美國和西班牙的醫(yī)護(hù)人員也感染此病[4]。據(jù)WHO 2015年1月27日發(fā)布的最新報(bào)告顯示，此次疫情中，全球共22 057人感染EBOV，死亡8795例，超過以往EVD病死人數(shù)的總和。目前尚無有效的EVD治療藥物和疫苗，WHO已將EBOV列為對(duì)人類危害最嚴(yán)重的病毒之一。嚴(yán)峻的疫情推進(jìn)了全球?qū)DV疫苗的研究。

1 評(píng)價(jià)疫苗的動(dòng)物模型

1.1 小鼠 絲狀病毒對(duì)健康的成年小鼠無致死性，因此只能通過適應(yīng)小鼠的病毒株或免疫缺陷小鼠進(jìn)行動(dòng)物模型的構(gòu)建。通過在乳鼠體內(nèi)進(jìn)行病毒連續(xù)傳代，獲得適應(yīng)小鼠的EBOV株，可使成年鼠致死，但僅腹膜內(nèi)注射可致死，肌內(nèi)注射和皮下注射均不致死?；蛘咄ㄟ^構(gòu)建重度免疫缺陷病、敲除信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄物1激活物（signal transducer and activator of transcription 1 knock-out,STAT1-/-）或敲除干擾素α/β受體的小鼠模型，感染野生型EBOV后可引起死亡[5]。通過如上方法構(gòu)建的小鼠模型感染EBOV后，初始靶細(xì)胞和組織的感染變化與人和非人靈長類的感染變化一致[5]。但在疾病發(fā)生過程中，不出現(xiàn)凝血功能異常，而人和非人靈長類感染EBOV后，凝血功能異常是一個(gè)重要的特征。并且，小鼠具有天然的抗EBOV能力，因此根據(jù)其實(shí)驗(yàn)結(jié)果不能完全預(yù)測疫苗對(duì)非人靈長類的效果。但如果疫苗對(duì)小鼠模型不能提供完全保護(hù)，那么此疫苗在其他動(dòng)物模型中很可能也不會(huì)成功。因此，盡管小鼠模型有局限性，但仍可應(yīng)用于疫苗的評(píng)價(jià)。

1.2 豚鼠 豚鼠感染野生型EBOV后，不會(huì)或很少表現(xiàn)臨床癥狀，因此只能使用豚鼠適應(yīng)株建立豚鼠模型。豚鼠感染EBOV后，被感染的靶細(xì)胞和組織變化情況與人和非人靈長類一致，并且出現(xiàn)凝血功能異常，但纖維蛋白原無變化。然而，不能說明豚鼠模型比小鼠模型更能證明疫苗的有效性，也不能說明豚鼠模型更能預(yù)測疫苗對(duì)非人靈長類的效果。

1.3 金黃地鼠 將小鼠適應(yīng)株感染成年的金黃地鼠可致死，以此建立的金黃地鼠模型[6]感染EBOV后，可出現(xiàn)嚴(yán)重的凝血功能異常，包括纖維蛋白原和蛋白C水平的異常。此模型還出現(xiàn)細(xì)胞因子水平異常和Ⅰ型干擾素反應(yīng)的抑制情況，可能與絲狀病毒感染后導(dǎo)致的病理生理學(xué)有關(guān)。然而，與豚鼠模型一樣，疫苗在金黃地鼠模型上的評(píng)價(jià)也受限制。

1.4 非人靈長類 EBOV對(duì)非人靈長類有高致死性[7]。證據(jù)表明，過去非洲人群暴發(fā)EVD可能由于大量非人靈長類死亡、通過狩獵和食用野味與被感染的非人靈長類接觸所致[8]。因此，多種非人靈長類被作為模型研究EBOV感染機(jī)制。多數(shù)研究使用短尾猴或恒河猴，也有研究使用非洲綠猴、狒狒和狨猴。非人靈長類模型感染病毒時(shí)的典型病理學(xué)和臨床特征均與人的癥狀相同，因此是用于疫苗和藥物評(píng)價(jià)研究的“金標(biāo)準(zhǔn)”動(dòng)物模型[7，9]。疫苗在給人類使用前均必須使用非人靈長類模型對(duì)其進(jìn)行安全性和效力評(píng)價(jià)，但因攻毒須在4級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行，操作困難，成本高，并須考慮道德問題。因此，在使用非人靈長類進(jìn)行疫苗評(píng)價(jià)之前，必須先在一個(gè)或多個(gè)小動(dòng)物模型中證明疫苗的有效性。

近年來，狨猴[10]作為非人靈長類模型較受歡迎。狨猴對(duì)天然的絲狀病毒高度易感[10]，且感染EBOV后出現(xiàn)病理學(xué)特征，病情發(fā)展不迅速，而獼猴和50%患者病情發(fā)展迅速。成年狨猴體重為300～400g，相比其他非人靈長類，體型小，便于操作，需要的生活空間也相對(duì)小，且不攜帶猴源皰疹B型病毒（常在獼猴體內(nèi)潛伏，對(duì)人類致?。11]。后代常為雙胞胎[12]，方便使用于對(duì)照、被動(dòng)轉(zhuǎn)移免疫細(xì)胞或抗體的試驗(yàn)。

2 疫苗的種類

目前缺乏有效治療手段，因此，研制有效預(yù)防和控制EVD暴發(fā)的疫苗極為迫切。在過去20年里，有多種疫苗被研發(fā)，且在不同動(dòng)物模型中研究其有效性，每種疫苗均有其獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)和限制性[13]。

2.1 滅活疫苗 在早期研究中，將EBOV通過福爾馬林滅活或熱滅活后，可對(duì)豚鼠提供保護(hù)，但對(duì)照組13只中僅有4只有致死性感染，說明使用的攻擊毒株不適用于豚鼠。隨后的實(shí)驗(yàn)表明，滅活的EBOV不能對(duì)非人靈長類提供保護(hù)[14]。此外，通過碘萘基疊氮化物滅活病毒，可保護(hù)機(jī)體免遭致死性病毒的攻擊，但如果使用γ射線滅活，就不會(huì)達(dá)到同樣的保護(hù)效果，說明滅活方法可能會(huì)影響病毒蛋白的結(jié)構(gòu)和免疫原性[15]。雖然滅活疫苗可避免預(yù)存免疫和載體本身誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)問題，但須在4級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室中操作活病毒，成本高，且面臨安全性等問題，限制了此類疫苗的發(fā)展。

2.2 復(fù)制子疫苗 委內(nèi)瑞拉馬腦炎病毒（Venezuelan equine encephalitis virus,VEEV）復(fù)制子表達(dá)EBOV GP或NP蛋白后，被用于EDV疫苗的研究。單獨(dú)免疫表達(dá)NP的VEEV復(fù)制子可對(duì)小鼠提供完全保護(hù)，單獨(dú)免疫表達(dá)GP的VEEV復(fù)制子可對(duì)豚鼠提供完全保護(hù)，將二者聯(lián)合免疫，既可保護(hù)小鼠，又可保護(hù)豚鼠。但不論是單獨(dú)免疫還是聯(lián)合免疫，即使免疫劑量為107病灶形成單位（focus－forming units,FFU）也不能保護(hù)短尾猴。當(dāng)免疫劑量達(dá)到1010FFU時(shí)，才可保護(hù)非人靈長類[16]。需高劑量免疫和預(yù)存免疫限制了此疫苗在人類中的應(yīng)用。

庫京病毒，為黃病毒家族的一員，具有自我復(fù)制RNA能力，以此病毒為基礎(chǔ)制備的復(fù)制子疫苗可保護(hù)25%～86%的豚鼠[17]。此疫苗未在非人靈長類中進(jìn)行評(píng)價(jià)，且雖然VEEV復(fù)制子疫苗對(duì)豚鼠提供100%保護(hù)，但需要高劑量才能保護(hù)非人靈長類，因此庫京病毒復(fù)制子疫苗的前景不被看好。

2.3 DNA疫苗 已研究的DNA疫苗被證明可保護(hù)小鼠和豚鼠免遭致死性EBOV的攻擊[18－19]，且可多次反復(fù)注射以增強(qiáng)免疫反應(yīng)。已有DNA疫苗用于Ⅰ期臨床試驗(yàn)，證明其安全并有免疫原性[19]。然而，尚未在非人靈長類模型中評(píng)價(jià)DNA疫苗的效果。

2.4 亞單位疫苗 利用桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)，在昆蟲細(xì)胞內(nèi)生產(chǎn)EBOVGP蛋白并純化后，免疫豚鼠1次，或在免疫DNA疫苗后作為加強(qiáng)免疫，可誘導(dǎo)產(chǎn)生較高水平的抗體，但不能保護(hù)機(jī)體免遭病毒的攻擊，且保護(hù)率與中和抗體水平間無對(duì)應(yīng)關(guān)系。Konduru等[20]將人IgG1的Fc片段連入EBOV GP蛋白胞外域的C末端構(gòu)建融合蛋白，純化后輔入佐劑進(jìn)行免疫，結(jié)果90%的小鼠被保護(hù)。結(jié)果證明，純化的GP可激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生保護(hù)性免疫反應(yīng)，但尚須進(jìn)一步進(jìn)行優(yōu)化，并應(yīng)用其他動(dòng)物模型進(jìn)行效果評(píng)價(jià)。

病毒樣顆粒（virus－like particles,VLPs）以其獨(dú)特特點(diǎn)吸引研究者關(guān)注：可對(duì)免疫個(gè)體進(jìn)行多次免疫；由于VLPs空間結(jié)構(gòu)與天然病毒相似，因此誘導(dǎo)中和抗體的能力比可溶性抗原更強(qiáng)；VLPs易被抗原提呈細(xì)胞（如樹突狀細(xì)胞）捕獲，從而刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體和細(xì)胞免疫反應(yīng)；可將免疫刺激分子融合表達(dá)于VLPs中，用以增強(qiáng)免疫反應(yīng)[21－22]。最早的研究是將表達(dá)GP和VP40蛋白的DNA載體轉(zhuǎn)染人293T細(xì)胞后獲得EBOV VLPs，3次免疫后，可保護(hù)小鼠。如果在VLPs中加入佐劑，2次免疫小鼠即可抵抗高劑量病毒的攻擊，免疫1次就可保護(hù)豚鼠[23]，還可保護(hù)非人靈長類[24]，首次證明非病毒載體疫苗在非人靈長類模型中可激發(fā)保護(hù)性免疫反應(yīng)。此外，也可利用昆蟲細(xì)胞生產(chǎn)VLPs，其形態(tài)和功能均與在哺乳動(dòng)物中生產(chǎn)的相似，可在小鼠體內(nèi)激發(fā)有效的保護(hù)反應(yīng)[25]。使用昆蟲細(xì)胞生產(chǎn)提高了產(chǎn)量，大幅度降低了生產(chǎn)成本，且昆蟲細(xì)胞更安全，但須在非人靈長類模型中驗(yàn)證其有效性。

2.5 復(fù)制缺陷型EBOV 利用反向遺傳技術(shù)，可對(duì)EBOV基因組進(jìn)行改造[26]。通過將轉(zhuǎn)錄激活物VP30的基因去除，獲得沒有復(fù)制能力的EBOV（rEBOVΔVP30）。將rEBOVΔVP30接種可穩(wěn)定表達(dá)VP30的細(xì)胞系后，病毒可感染細(xì)胞產(chǎn)生子代病毒，但由于基因組缺少VP30，因此子代病毒無感染能力，即生命周期為單周期。用此方法繁殖得到的復(fù)制缺陷型病毒，對(duì)STAT1-/-小鼠不致病，且可對(duì)小鼠和豚鼠提供100%的保護(hù)[27]。但由于rEBOVΔVP30基因組仍含有95%的EBOV基因組，因此對(duì)其安全性有疑慮，尤其擔(dān)心在病毒傳代過程中，是否會(huì)重組VP30用以完善自身的基因組。然而實(shí)驗(yàn)表明，連續(xù)傳代至少7代以內(nèi)，沒有發(fā)現(xiàn)重組現(xiàn)象，并且以目前對(duì)絲狀病毒的了解，此重組現(xiàn)象理論上不會(huì)發(fā)生。

2.6 病毒載體疫苗

2.6.1 重組5型腺病毒（adenovirus type 5,Ad5）疫苗 重組Ad5疫苗是最早被研究的重組活載體疫苗，也可能是EDV疫苗平臺(tái)中最為領(lǐng)先的疫苗[28]，被證明在非人靈長類中可提供有效保護(hù)。早期研究中，對(duì)非人靈長類首次免疫可表達(dá)EBOV GP的DNA疫苗，再加強(qiáng)免疫可表達(dá)GP的人Ad5疫苗，可保護(hù)機(jī)體免遭致死性EBOV的攻擊，首次證明了通過免疫可保護(hù)非人靈長類[6]。隨后實(shí)驗(yàn)表明，將表達(dá)GP和NP蛋白的重組Ad5混合，對(duì)非人靈長類免疫1次即可提供保護(hù)[28]。后續(xù)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證明，單獨(dú)免疫表達(dá)GP的重組Ad5，最低免疫劑量為1010噬斑形成單位即可對(duì)非人靈長類提供足夠的保護(hù)[29]。然而，由于腺病毒的預(yù)存或抗載體免疫，限制了此疫苗的發(fā)展。如果研制非注射用疫苗（如口服或滴鼻免疫）或非人類病毒載體疫苗，可能會(huì)給Ad5載體疫苗帶來希望。對(duì)此，一種新型鼻部噴霧疫苗[30]已被研制，該疫苗使用弱化的重組Ad5表達(dá)EBOV GP蛋白，對(duì)非人靈長類免疫后62 d能提供部分保護(hù)（67%），免疫后150 d體內(nèi)仍存在針對(duì)GP蛋白的T細(xì)胞群和抗體。下一步將進(jìn)行Ⅰ期臨床試驗(yàn)來檢測這種疫苗在人類中的效果。Stanley等[31]使用黑猩猩來源的復(fù)制缺陷型腺病毒（chimpanzeederived replication-defective adenoviral,ChAd）為載體，將表達(dá)GP蛋白的ChAd3載體疫苗免疫非人靈長類1次，5周后進(jìn)行存活率實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明，疫苗可刺激機(jī)體產(chǎn)生抗GP的抗體和特異性T細(xì)胞反應(yīng)，并可對(duì)機(jī)體提供100%的保護(hù)。

2.6.2 重組水泡型口炎病毒（vesicularstomatitis virus,VSV）疫苗 通過反向遺傳操作，將EBOVGP蛋白替換VSV的G蛋白獲得的重組VSV[32]，免疫1次，即可保護(hù)小鼠、豚鼠和非人靈長類免遭病毒的攻擊[33]。在非人靈長類感染病毒后，此疫苗也可保護(hù)機(jī)體，說明其有暴露后預(yù)防治療的可能性[34]。

2.6.3 重組狂犬病病毒（rabies virus,RABV）疫苗 將表達(dá)GP的重組RABV免疫1次可保護(hù)部分小鼠[35]，免疫2次可保護(hù)100%的非人靈長類[36]。盡管重組RABV疫苗效果比重組VSV低，但將表達(dá)GP的重組RABV滅活后，可部分保護(hù)非人靈長類，提示可考慮將此類疫苗以滅活形式應(yīng)用，這樣對(duì)人類更為安全。

2.6.4 重組副粘病毒疫苗 除了以彈狀病毒（例如VSV和RABV）為載體外，以重組副粘病毒為載體也被用于EDV疫苗研發(fā)。單獨(dú)表達(dá)EBOVGP蛋白或同時(shí)表達(dá)GP和NP蛋白的重組人副流感病毒3型（human parainfluenza virus 3,HPIV3）免疫 1次，可對(duì)豚鼠提供保護(hù)。但在非人靈長類中，須免疫2次才可提供完全保護(hù)。在人群中有針對(duì)HPIV3的免疫，為了避免預(yù)存免疫干擾疫苗免疫原性，通過去除HPIV3表面糖蛋白F和HN蛋白（預(yù)存免疫抗體針對(duì)的靶標(biāo)位點(diǎn)）的基因，制備新型重組病毒，雖復(fù)制能力下降，但免疫1次即可保護(hù)豚鼠[37]。以新城疫病毒（newcastle disease virus,NDV）為載體也用于疫苗研發(fā)，首次免疫時(shí)使用重組NDV，加強(qiáng)免疫時(shí)使用重組HPIV3，在非人靈長類中可引起良好免疫反應(yīng)[38]。然而，此種疫苗在非人靈長類中的保護(hù)性未有報(bào)道。將一種新病毒引入人類中應(yīng)用是此類疫苗主要擔(dān)心的問題。

2.6.5 重組巨細(xì)胞病毒（cytomegalovirus,CMV）疫苗 表達(dá)EBOV NP蛋白T細(xì)胞表位的重組CMV疫苗免疫小鼠后可保護(hù)小鼠免受病毒攻擊[39]。但靈長類動(dòng)物體內(nèi)存在CMV，且CMV有高度的宿主特異性。因此，進(jìn)一步研究時(shí)，須考慮其有效性和安全性問題。

2.6.6 重組牛痘病毒（vaccinia virus,VV）疫苗 表達(dá)EBOV蛋白的重組VV也可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生保護(hù)性免疫反應(yīng)。表達(dá)EBOV GP蛋白的重組VV疫苗可對(duì)豚鼠提供保護(hù)，但不能保護(hù)非人靈長類[14]，說明此疫苗還有缺陷。

3 進(jìn)入臨床試驗(yàn)的疫苗

通常情況下經(jīng)過多年的努力，疫苗才可進(jìn)入臨床試驗(yàn)。但EVD疫情的嚴(yán)峻形式，推進(jìn)其疫苗迅速進(jìn)入臨床試驗(yàn)?，F(xiàn)已進(jìn)入臨床研究且最有前景的疫苗分別為黑猩猩腺病毒載體二價(jià)疫苗（cAd3-EBO）、黑猩猩腺病毒載體單價(jià)疫苗（EBL01）、VSV載體疫苗（rVSV-ZEBOV）和復(fù)雜腺病毒載體疫苗（MVA-BN Filo）。

3.1 cAd3-EBO疫苗 cAd3-EBO疫苗由英國葛蘭素史克公司與美國國家過敏和傳染病研究所（National Institute of Allergy and Infectious Diseases,NIAID）合作開發(fā)，為可表達(dá)EBOV-Z和EBOV-S型GP蛋白的二價(jià)疫苗，已于2014年9月初由美國馬里蘭州的國立衛(wèi)生研究院進(jìn)行Ⅰ期臨床試驗(yàn)，主要測試疫苗的安全性。所有20名健康志愿者對(duì)疫苗的耐受性良好，并產(chǎn)生了抗EBOV抗體，其中接受較高劑量注射的志愿者產(chǎn)生的抗體水平較高；接近一半的志愿者體內(nèi)產(chǎn)生了CD8+T淋巴細(xì)胞反應(yīng)。該疫苗現(xiàn)已進(jìn)入Ⅲ期臨床試驗(yàn)階段[40-41]。

3.2 EBL01疫苗 EBL01疫苗由NIAID與瑞士Okairos公司合作開發(fā)，為可表達(dá)EBOV-Z型GP蛋白的單價(jià)疫苗，已于2014年9月在英國進(jìn)行Ⅰ期臨床試驗(yàn)。59人免疫后，無嚴(yán)重不良反應(yīng)出現(xiàn)，血清中抗體水平在第28天時(shí)最高，3個(gè)劑量組間抗體水平無明顯差異。但CD8+T淋巴細(xì)胞反應(yīng)不強(qiáng)，而CD8+T淋巴細(xì)胞被認(rèn)為在控制病毒感染過程中起重要作用。2014年10月開始在西非馬里首都巴馬科市進(jìn)行臨床試驗(yàn)，已有91人接種疫苗。但由于人種差異，因此此疫苗尚須進(jìn)一步研究[42]。

3.3 rVSV-ZEBOV疫苗 rVSV-ZEBOV疫苗由加拿大公共衛(wèi)生署開發(fā)，美國NewLink與德國Merck公司生產(chǎn)，是將EBOVGP蛋白替換VSVG蛋白獲得的重組疫苗，2014年由美國馬里蘭州的沃爾特里德陸軍研究院開展Ⅰ期臨床試驗(yàn)，以評(píng)估其安全性、適宜劑量以及可能產(chǎn)生的不良反應(yīng)。但由于59名受試者中4名出現(xiàn)關(guān)節(jié)疼痛的現(xiàn)象，試驗(yàn)于2014年12月被叫停。通過分析原因和調(diào)整劑量后，于2015年1月恢復(fù)小劑量的臨床試驗(yàn)。

3.4 MVA-BN Filo疫苗 MVA-BN Filo疫苗由美國強(qiáng)生公司與丹麥Bavarian Nordic公司合作開發(fā)，其利用基于Ad5sub360腺病毒的復(fù)雜腺病毒載體（cAdVax），同時(shí)表達(dá)多個(gè)基因，更適合制備多價(jià)疫苗。疫苗設(shè)計(jì)的長期目標(biāo)是同時(shí)針對(duì)EBOV-Z和EBOV-S以及馬爾堡病毒，但鑒于當(dāng)前形勢，公司將重點(diǎn)放在針對(duì)EBOV-Z的疫苗。2015年1月在牛津大學(xué)進(jìn)行了小規(guī)模臨床試驗(yàn)，72名志愿者已接受了第1次疫苗注射，主要驗(yàn)證人體對(duì)疫苗的反應(yīng)，并計(jì)劃在4月進(jìn)行更大范圍的人體臨床試驗(yàn)。

此外，美國Novavax疫苗研發(fā)公司于2015年2月宣布，已在澳大利亞開展EVD疫苗早期人體臨床試驗(yàn)，涉及230名健康志愿者。每名志愿者肌內(nèi)注射首次免疫后21 d加強(qiáng)免疫1次，結(jié)果將在2015年第2季度獲得。由中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院與天津康希諾生物技術(shù)有限公司聯(lián)合研制的重組EVD疫苗是全球第3個(gè)進(jìn)入人體臨床試驗(yàn)的EVD疫苗，該疫苗是針對(duì)2014年西非流行的EBOV-Z型構(gòu)建的重組Ad5疫苗，且為凍干劑型，37℃條件下可保存2周，為全球首創(chuàng)，更適于在條件落后、冷鏈不完善的地區(qū)使用。該疫苗于2015年2月25日獲得臨床批件，進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段。

4 結(jié) 語

為了應(yīng)對(duì)當(dāng)前西非大規(guī)模暴發(fā)的EVD疫情，一些有前景的疫苗已處于臨床試驗(yàn)階段，其中，以腺病毒和VSV為載體制備的重組活載體疫苗發(fā)展最為迅速，現(xiàn)已通過了人體安全性試驗(yàn)。下一步可進(jìn)行大規(guī)模臨床試驗(yàn)，以進(jìn)一步評(píng)價(jià)其安全性和有效性。其他種類的疫苗因?yàn)槎喾N原因限制了其發(fā)展，但也提示疫苗的研究須綜合考慮多方面因素，也為未來研制更有效的疫苗提供了參考和方向。有效的EVD疫苗不僅可控制疫情的發(fā)展，也可保護(hù)人們免遭病毒的感染。其中，對(duì)流行區(qū)的醫(yī)護(hù)工作者進(jìn)行的免疫策略須根據(jù)情況制定，不僅需要安全、有效，誘導(dǎo)可持續(xù)的保護(hù)性免疫反應(yīng)，還須進(jìn)行多次加強(qiáng)免疫。在這種情況下，由于存在預(yù)存免疫和抗載體的免疫，病毒載體為基礎(chǔ)的疫苗應(yīng)用于加強(qiáng)免疫時(shí)，效果就會(huì)減弱。因此，未來疫苗的發(fā)展，應(yīng)考慮無載體疫苗。此外，在動(dòng)物模型中驗(yàn)證疫苗的免疫原性和有效性時(shí)，疫苗誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)機(jī)制仍不完全明確，須進(jìn)一步探索。例如，盡管針對(duì)GP的抗體水平與保護(hù)性有關(guān)，但也有研究指出，在具有有效保護(hù)作用的免疫反應(yīng)中，高質(zhì)量比高水平更為重要[36]。盡管不同的疫苗研制平臺(tái)針對(duì)是否需要CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞有不同的意見，但大多數(shù)研究結(jié)果均表明，體液免疫是獲得保護(hù)性免疫的關(guān)鍵。由此可見，在以EBOV為研究對(duì)象制備疫苗時(shí)，仍有許多工作須研究和完善。此次EVD疫情的暴發(fā)推進(jìn)了全球?qū)BOV治療制劑和疫苗的研究，促進(jìn)了研究所、企業(yè)和政府間的國際交流與合作，并增加了研究經(jīng)費(fèi)，希望安全并有效的EVD疫苗能在短期內(nèi)被研制出來。

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