畜產(chǎn)品安全評估工作中抗生素使用的評估與抽樣介紹

劉中成

(哈爾濱市獸藥飼料監(jiān)察所150070)

畜產(chǎn)品安全評估可分為違禁藥物評估、抗生素殘留評估、甾體化合物殘留評估等，其中抗生素殘留評估畜產(chǎn)品安全評估的關(guān)鍵?？股卦谛竽翗I(yè)的使用常常披著合法的外衣，因為養(yǎng)殖業(yè)的防病、治病以及提高產(chǎn)量離不開抗生素，所以抗生素的使用常常被人們接受，其危害也常常被忽略，或認為是小概率的問題，或被歸結(jié)其他原因，例如食物的腸道過敏反應，常常被歸結(jié)為食物變質(zhì)或食物過敏，其實有很多是抗生素的腸道過敏反應。

1　全球各國畜牧業(yè)使用抗生素概況

1.1　我國是濫用抗生素極為嚴重的國家

2014年4月30日，世界衛(wèi)生組織發(fā)布的《抗菌素耐藥：全球監(jiān)測報告》指出，抗生素耐藥的嚴重威脅不再是未來的一種預測。中國是濫用抗生素極為嚴重的國家，不僅濫用于人體，還濫用于畜牧養(yǎng)殖業(yè)。一個普遍引用的數(shù)據(jù)是，中國每年生產(chǎn)抗生素原料大約21萬t，其中9.7萬t用于畜牧養(yǎng)殖業(yè)，占年總產(chǎn)量的46.1%。不久前，一篇由華東理工大學、同濟大學和清華大學的研究機構(gòu)共同完成、發(fā)表在國內(nèi)學術(shù)期刊《科學通報》的論文稱，我國地表水中含有68種抗生素，一些抗生素在珠江、黃浦江等地的檢出頻率高達100%，有些抗生素檢出的濃度高達每升幾百鈉克，工業(yè)發(fā)達的國家則小于20ng。造成這種現(xiàn)象主要是，人們?yōu)樽非箴B(yǎng)殖速度，濫用抗生素，結(jié)果就影響到水體。

1.2　歐洲國家不斷有抗生素種類被禁用

歐美國家養(yǎng)殖業(yè)是從上世紀40年代開始,嘗試將抗生素加入飼料中喂豬，結(jié)果發(fā)現(xiàn)對豬的生長速度和抗病力有較好提升。于是，從上世紀50年代開始，抗生素用于養(yǎng)殖業(yè)逐漸合法化，此后，為世界各國所仿效。 但是，隨著抗生素大量使用，帶來了越來越明顯的副作用，產(chǎn)生了耐藥性、藥物殘留過高、部分消費者出現(xiàn)過敏中毒反應等一系列問題。從上世紀80年代開始，歐美國家轉(zhuǎn)而對飼料添加抗生素的使用作了種種規(guī)定。最先禁用飼用抗生素的國家是瑞典。1986年，瑞典宣布全面禁止抗生素用于飼料添加劑，以緩解消費者對肉品藥物殘留和耐藥性產(chǎn)生的恐懼心理。英國因發(fā)現(xiàn)阿伏霉素在飼養(yǎng)動物體內(nèi)出現(xiàn)耐藥性，于1993年禁止使用阿伏霉素作為抗生素飼料添加劑。丹麥緊跟在英國之后，于1995年禁止在飼料中使用阿伏霉素。到1997年，瑞典加入歐盟，歐盟委員會宣布在所有歐盟成員國中禁止使用阿伏霉素做飼料添加劑。歐洲更多的禁用飼用抗生素措施接踵而至。1998年，丹麥禁止使用抗生素飼料添加劑維吉尼亞霉素。1998年，荷蘭停止在動物飼料中添加奧拉喹多。1999年，歐盟委員會對泰樂菌素、螺旋霉素、桿菌肽和維吉尼亞霉素這幾種抗生素飼料添加劑下了禁令。1999年，丹麥養(yǎng)豬業(yè)自愿表態(tài)，停止給體重35kg以下的豬使用抗生素飼料添加劑。從2000年起，丹麥規(guī)定，用于治療飼養(yǎng)動物疾病的抗生素一律要憑獸醫(yī)的處方購買。從2006年起，歐盟成員國全面停止使用所有抗生素生長促進劑，包括離子載體類抗生素。2011年，歐盟委員會宣布了“反病菌抗藥性五年行動計劃”，目的是確保人與牲畜正確使用抗生素，完善對獸用抗生素的監(jiān)控。另外，歐洲藥品管理局于2013年提出建議，對使用了50年的一種老抗生素粘菌素采用禁令，禁止將粘菌素作為牲畜預防性用藥。

1.3　美國抗生素逐漸退出畜牧養(yǎng)殖業(yè)

早在1977年，美國食品與藥物管理局就發(fā)現(xiàn)，飼養(yǎng)動物長期使用低劑量青霉素和四環(huán)素會促進抗藥性產(chǎn)生，但當時并沒有采取禁令。到1996年，美國開始采取行動，由食品與藥物管理局等部門協(xié)作成立了美國國家抗生素抗藥性檢控體系，提出一旦發(fā)現(xiàn)飼養(yǎng)動物耐藥性產(chǎn)生，就啟動相應法律，包括收回某種抗生素藥物使用許可證。然而，公眾對禁用飼養(yǎng)動物抗生素有更迫切的要求。2012年3月23日，美國紐約曼哈頓聯(lián)邦法院西奧多·卡茨法官做出判決，下令美國食品與藥物管理局采取措施，禁止在動物飼料中使用常用抗生素。2012年1月4日，美國食品與藥物管理局重新推出這項禁令，被禁用該類抗生素的動物包括牛、豬、雞以及火雞，執(zhí)行時間自4月5日起開始。然而，調(diào)查表明，美國境內(nèi)出售的抗生素80%用于禽畜。美國疾病控制和預防中心曾發(fā)布報告稱，對抗生素具有抗藥性的細菌每年導致2.3萬名美國人死亡。迫于公眾壓力，2013年，美國食品與藥物管理局公布了一份行業(yè)指導性文件，計劃從2014年起，用3年時間禁止在牲畜飼料中使用預防性抗生素，最大限度地減少食用牲畜帶給消費者抗生素耐藥性問題。

2　畜產(chǎn)品抗生素殘留的評估方法

2.1　掌握評估區(qū)域抗生素的使用種類

確定評估區(qū)域抗生素的使用種類是畜產(chǎn)品安全評估的基礎，例如黑龍江地區(qū)四季分明，夏季重點評估腸道抗菌藥物，冬季重點評估呼吸道抗菌藥物，春秋時節(jié)重點評估抗真菌及腸道原蟲藥物，蚊蟲孽生的季節(jié)重點評估抗血液原蟲藥物的殘留。確定評估區(qū)域抗生素的使用種類可以最大限度地發(fā)揮評估機構(gòu)的作用，節(jié)約檢測資源。

2.2　確立評估抽樣方法

2.2.1簡單隨機抽樣

簡單隨機抽樣是最基本的抽樣方法。分為重復抽樣和不重復抽樣。在重復抽樣中，每次抽中的單位仍放回總體，樣本中的單位可能不止一次被抽中。不重復抽樣中，抽中的單位不再放回總體，樣本中的單位只能抽中一次。畜產(chǎn)品安全評估抽樣采用不重復抽樣。簡單隨機抽樣的具體作法有：①抽簽法。將總體的全部單位逐一作簽，攪拌均勻后進行抽取。②隨機數(shù)字表法。將總體所有單位編號，然后從隨機數(shù)字表中一個隨機起點(任一排或一列)，開始從左向右或從右向左、向上或向下抽取，直到達到所需的樣本容量為止。簡單隨機抽樣必須有一個完整的抽樣框，即總體各單位的清單。總體太大時，制作這樣的抽樣框工作量巨大，加之有許多情況，使總體名單根本無法得到。故在畜產(chǎn)品安全評估抽樣是由于樣品數(shù)量過大采取隨機隨時抽樣的方式常常是不可能的事情。

2.2.2等距抽樣

等距抽樣方式相對于簡單隨機抽樣方式最主要的優(yōu)勢就是經(jīng)濟性。等距抽樣方式比簡單隨機抽樣更為簡單，花的時間更少，并且花費也少。使用等距抽樣方式最大的缺陷在于總體單位的排列上。一些總體單位數(shù)可能包含隱蔽的形態(tài)或者是“不合格樣本”，調(diào)查者可能疏忽，把它們抽選為樣本。由此可見，只要抽樣者對總體結(jié)構(gòu)有一定了解時，充分利用已有信息對總體單位進行排隊后再抽樣，則可提高抽樣效率。等距抽樣要防止周期性偏差，因為它會降低樣本的代表性。畜產(chǎn)品安全評估抽樣要根據(jù)評估種類確立抽樣范圍，對樣品范圍進行整體規(guī)劃，進行有效排隊，確立風險較大的區(qū)域，提高抽樣效率。

2.2.3雙重抽樣

雙重抽樣的主要作用是提高抽樣效率、節(jié)約調(diào)查經(jīng)費。首先抽取一個初步樣本，并搜取一些簡單項目以獲得有關(guān)總體的信息；然后，在此基礎上再進行深入抽樣。在實際運用中，雙重抽樣可以推廣為多重抽樣。其步驟是：做一次隨機抽樣，調(diào)查y 和x兩種性狀，從中求出y 依x 的回歸方程。這個樣本容量n 不一定很大，但希望x 和y 有較大的幅度。如：若所要調(diào)查的性狀y是不易觀察測定，甚至對觀察材料要破壞后方能測定的，而試驗又不容許將材料破壞，這時可以利用和所要調(diào)查的性狀有密切相關(guān)關(guān)系的另一便于測定的性狀x進行間接的抽樣調(diào)查，按確定的相關(guān)關(guān)系從x的調(diào)查結(jié)果推算y 的結(jié)果。用雙重抽樣法，必須注意 y 和 x 兩性狀間不但要有顯著相關(guān)，而且須有高程度顯著相關(guān)，才能獲得比較準確的結(jié)果，所以在建立回歸方程時要檢驗其相關(guān)系數(shù)的大小及顯著性。例如，對于一個畜產(chǎn)品評估樣品中評估分析磺胺類藥物的同時，可以分析氟苯尼考的危險趨向性，并根據(jù)分析評估兩種藥物同時使用的幾率，以期評估分析氟苯尼考使用時導出磺胺類藥物的使用概率。

2.2.4整群抽樣

又稱聚類抽樣。先將總體按照某種標準分群，每個群為一個抽樣單位，用隨機的方法從中抽取若干群，抽中的樣本群中所有單位都要進行調(diào)查。與分層抽樣相反,整群抽樣的分類原則是使群間異質(zhì)性小,群內(nèi)異質(zhì)性大。分層抽樣時各群(層)都有樣本，整群抽樣時只有部分群有樣本。整群抽樣只需列出入樣群的單位，因此可節(jié)約大量財力、人力。整群抽樣的代表性低于簡單隨機抽樣。聚類隨機抽樣的優(yōu)點是，它適用于總體單位數(shù)量較多、內(nèi)部差異較大的調(diào)查對象。與簡單隨機抽樣和等距隨機抽樣相比較，在樣本數(shù)量相同時，它的抽樣誤差較??；在抽樣誤差的要求相同時，它所需的樣本數(shù)量較少。類型隨機抽樣的缺點是，必須對總體各單位的情況有較多的了解，否則無法作出科學的分類。而這一點在實際調(diào)查之前又往往難以做到。例如評估某種藥物殘留在畜產(chǎn)品中殘留，可以按家畜家禽種類進行整體抽樣，理清不是使用對象的家畜家禽，針對使用對象擴大抽樣程度。

2.2.5多級抽樣

又稱多階段抽樣。前 4種抽樣方法均為一次性直接從總體中抽出樣本，稱為單階段抽樣。多階段抽樣則是將抽樣過程分為幾個階段，結(jié)合使用上述方法中的兩種或數(shù)種。當研究總體廣泛且分散時，多采用多階段抽樣，以降低調(diào)查費用。但由于每級抽樣都會產(chǎn)生誤差，經(jīng)過多級抽樣產(chǎn)生的樣本，誤差也相應增大。

2.2.6序貫抽樣

序貫抽樣方案是指在抽樣時，不事先規(guī)定總的抽樣個數(shù)(觀測或?qū)嶒灤螖?shù)),而是先抽少量樣本，根據(jù)其結(jié)果，再決定停止抽樣或繼續(xù)抽樣、抽多少，這樣下去，直至決定停止抽樣為止。反之，事先確定抽樣個數(shù)的那種抽樣方案，稱為固定抽樣方案。這是畜產(chǎn)品安全評估的常用方法，因為抽樣本身常常是任務性的，并且要有足夠的樣品數(shù)量，當?shù)竭_預期目的時才能停下。

可見，對畜產(chǎn)品安全評估關(guān)鍵點有效掌握可很大程度節(jié)約檢測資源，最快、最準確提供評估結(jié)果。