劉建平　李玲玲　郎曉猛　任　杰　趙　源　楊　倩

(河北省中醫(yī)院脾胃病一科，河北　石家莊　050011)

?

泄?jié)峤舛痉綄?duì)慢性非特異性潰瘍性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸黏膜環(huán)氧合酶-2及前列腺素E2的影響※

劉建平李玲玲1郎曉猛任杰趙源2楊倩△

(河北省中醫(yī)院脾胃病一科，河北石家莊050011)

【摘要】目的觀察泄?jié)峤舛痉綄?duì)慢性非特異性潰瘍性結(jié)腸炎(CUC)大鼠結(jié)腸黏膜中環(huán)氧合酶-2(COX-2)、前列腺素E2(PGE2)表達(dá)的影響，探究其可能的作用機(jī)制。方法將40只雄性Wistar大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為5組，即空白組、模型組、柳氮磺胺吡啶組、泄?jié)峤舛痉礁邉┝拷M、泄?jié)峤舛痉降蛣┝拷M，每組各8只。除空白組外，其余4組大鼠以三硝基苯磺酸(TNBS)聯(lián)合乙醇造模法復(fù)制CUC動(dòng)物模型。造模成功后第5 d，空白組及模型組大鼠予0.9%氯化鈉注射液5 mL灌胃，柳氮磺胺吡啶組予柳氮磺胺吡啶混懸液0.3 g/kg 灌胃，泄?jié)峤舛痉礁摺⒌蛣┝拷M分別予20.0、10.0 g/kg泄?jié)峤舛痉剿幰汗辔福咳?次，連續(xù)給藥14 d。用藥結(jié)束后以免疫組化法測(cè)定大鼠結(jié)腸黏膜COX-2及PGE2的表達(dá)。結(jié)果模型組大鼠結(jié)腸黏膜COX-2及PGE2表達(dá)水平均較空白組明顯提高(P<0.05)；與模型組比較，泄?jié)峤舛痉礁邉┝拷M、低劑量組及柳氮磺胺吡啶組大鼠結(jié)腸黏膜COX-2及PGE2表達(dá)水平明顯下降(P<0.05)，且泄?jié)峤舛痉礁邉┝拷M低于柳氮磺胺吡啶組(P<0.05)。結(jié)論泄?jié)峤舛痉街委烠UC大鼠效果良好,抑制COX-2表達(dá)、減少PGE2生成可能是其作用機(jī)制。

【關(guān)鍵詞】結(jié)腸炎，潰瘍性；大鼠；解毒劑(中藥)；動(dòng)物實(shí)驗(yàn)；前列腺素E類

※項(xiàng)目來(lái)源：2014年度河北省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(編號(hào)：H2014206462)

慢性非特異性潰瘍性結(jié)腸炎(chronic nonspe-cific ulcerative colitis，CUC)是一種以結(jié)腸黏膜慢性炎癥及潰瘍形成為病理特點(diǎn)的慢性非特異性炎癥，其病變主要累及直腸、結(jié)腸黏膜，為消化道常見(jiàn)病和疑難病。本病在西方國(guó)家患病率為100~200人/10萬(wàn)[1]，近年來(lái)我國(guó)發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)，探討其發(fā)病機(jī)制及治療手段意義重大。目前西醫(yī)對(duì)CUC的病因及發(fā)病機(jī)制研究尚不十分明確，認(rèn)為免疫異常、遺傳易感、感染、精神、飲食及環(huán)境等均與其發(fā)生發(fā)展有關(guān)，其中免疫因素是當(dāng)今研究的熱點(diǎn)。環(huán)氧合酶-2(COX-2)催化花生四烯酸(AA)合成炎性介質(zhì)前列腺素E2(PGE2)，造成炎細(xì)胞浸潤(rùn)，進(jìn)而發(fā)生結(jié)腸黏膜炎癥、組織破壞及潰瘍形成。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察對(duì)比泄?jié)峤舛痉?、柳氮磺胺吡啶?duì)CUC大鼠的治療作用及其結(jié)腸黏膜中COX-2及PGE2表達(dá)的差異，探討泄?jié)峤舛痉綄?duì)CUC的可能作用機(jī)制，結(jié)果如下。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物雄性Wistar大鼠40只，由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，一級(jí)，健康清潔級(jí)，體質(zhì)量220~250 g，動(dòng)物合格證號(hào)1210003。

1.1.2實(shí)驗(yàn)藥物及試劑泄?jié)峤舛痉?，藥物組成：大血藤、敗醬草、黃連、魚(yú)腥草、車前子、黃芩、半夏、葛根、薏苡仁、木香。采用醇提取和水提取相結(jié)合濃縮至所需濃度，冰箱4 ℃貯存?zhèn)溆?。泄?jié)峤舛痉降蛣┝俊⒏邉┝糠謩e相當(dāng)于成人用量(1.45 g/kg)的7倍、14倍，按照10.0、20.0 g/kg給藥。柳氮磺胺吡啶片(上海中西醫(yī)三維制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H31020450，批號(hào)20120518，規(guī)格250 mg/片)，片劑研末過(guò)100目篩細(xì)粉，與蒸餾水溶成混懸液，按照0.3 g/kg給藥。三硝基苯磺酸(TNBS)，美國(guó) Sigma 公司生產(chǎn)；COX-2 一抗，由圣克魯斯生物技術(shù)(上海)公司提供；PGE2一抗，Beijing Biosynthesis Biotechnology CO，Ltd生產(chǎn)；VECTASTAIN@ABC免疫組化試劑盒，Vector Laboratories 公司生產(chǎn)；50%乙醇、乙醚等試劑由河北省中醫(yī)院提供。

1.1.3主要實(shí)驗(yàn)儀器DP73 數(shù)碼顯微鏡，日本Olympus公司；HM-200電子天平，日本Olympus公司；BM-Ⅱ型病理組織包埋機(jī)，安徽電子科學(xué)研究所；DL-CJ-1N 高性能無(wú)菌實(shí)驗(yàn)臺(tái)，哈爾濱東聯(lián)電子技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司；DW-40L262 立式低溫冷藏箱，青島海爾醫(yī)用低溫科技有限公司；HMIAS-2000顯微圖像分析系統(tǒng)，武漢同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)；HMIAS-2000W彩色圖文分析系統(tǒng)，武漢千屏影像技術(shù)有限公司。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1模型制備40只實(shí)驗(yàn)大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為5組，即空白組、模型組、柳氮磺胺吡啶組、泄?jié)峤舛痉礁邉┝拷M、泄?jié)峤舛痉降蛣┝拷M，每組各8只。除空白組外，其余4組只大鼠參照文獻(xiàn)[2-3]方法以TNBS 聯(lián)合乙醇造模法復(fù)制CUC動(dòng)物模型。

1.2.2給藥方法造模成功后第5 d，空白組及模型組大鼠予0.9%氯化鈉注射液5 mL灌胃，柳氮磺胺吡啶組予柳氮磺胺吡啶混懸液0.3 g/kg 灌胃，泄?jié)峤舛痉礁摺⒌蛣┝拷M分別予10.0、20.0 g/kg泄?jié)峤舛痉剿幰汗辔?，均每?次，連續(xù)給藥14 d。

1.3觀察指標(biāo)及方法

1.3.1標(biāo)本采集末次給藥后，5組大鼠禁食不禁水24 h，25%烏拉坦0.8 g/kg腹腔注射麻醉，沿腹部正中線切開(kāi)后，留取結(jié)腸標(biāo)本，縱行切開(kāi)，用冰0.9%氯化鈉注射液沖洗后，選病變最明顯部位置于4%多聚甲醛中固定，并分別編號(hào)，石蠟包埋。

1.3.2觀察指標(biāo)以免疫組化法測(cè)定大鼠結(jié)腸黏膜COX-2及PGE2的表達(dá)，操作嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書步驟進(jìn)行。

2結(jié)果

5組大鼠結(jié)腸黏膜COX-2及PGE2表達(dá)水平比較見(jiàn)表1。

表1　5組大鼠結(jié)腸黏膜COX-2及PGE2表達(dá)水平比較

與空白組比較，*P<0.05；與模型組比較，△P<0.05；與柳氮磺胺吡啶組比較，#P<0.05

由表1可見(jiàn)，模型組大鼠結(jié)腸黏膜COX-2及PGE2表達(dá)水平均較空白組明顯提高(P<0.05)；與模型組比較，泄?jié)峤舛痉礁邉┝拷M、低劑量組及柳氮磺胺吡啶組大鼠結(jié)腸黏膜COX-2及PGE2表達(dá)水平明顯下降(P<0.05)，且泄?jié)峤舛痉礁邉┝拷M低于柳氮磺胺吡啶組(P<0.05)，與空白組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

3討論

中醫(yī)學(xué)并無(wú)CUC病名，根據(jù)其主要癥狀及臨床特點(diǎn)，常將其歸于腹痛、痢疾、腸風(fēng)、腸癖、泄瀉等病范疇。CUC病位在腸，病因多樣，病機(jī)復(fù)雜。我們認(rèn)為濕濁久羈、蘊(yùn)熱而致濁毒內(nèi)生為CUC的病機(jī)關(guān)鍵：濁毒蘊(yùn)結(jié)腸道，內(nèi)聚不散，腸道傳導(dǎo)失司；脂膜血絡(luò)受損，血溢脈外，肉腐成膿，進(jìn)而出現(xiàn)黏液、膿血便等典型癥狀，形成CUC。我們采用具泄?jié)嵘濉⒔舛眷铕龉πУ男節(jié)峤舛痉街委?。藥用大血藤、敗醬草清熱敗毒，散瘀排膿，為君藥；黃連、魚(yú)腥草、車前子、黃芩、半夏燥濕解毒，共為臣藥；葛根升陽(yáng)止瀉，薏苡仁健脾化濕，清熱排膿，木香理氣止痛，共為佐使。諸藥并用，升清泄?jié)?，散瘀解毒?/p>

目前西醫(yī)認(rèn)為，CUC是由多種因素共同造成，包括免疫、遺傳、感染、環(huán)境、精神和飲食等，其中免疫因素被多數(shù)學(xué)者認(rèn)為在CUC發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中起重要作用。作為多種免疫因子合成前體，AA一旦代謝紊亂就會(huì)出現(xiàn)微循環(huán)受干擾、炎癥遞質(zhì)被激活、氧自由基損傷、血管通透性增加、溶解纖維蛋白活性增加以及凝血障礙等，造成機(jī)體損傷而發(fā)病[4-5]。COX是體內(nèi)催化AA合成各種內(nèi)源性前列腺素的關(guān)鍵酶，參與了上述的大多數(shù)反應(yīng)。COX-2是COX的一種同工酶，在CUC的發(fā)生及其誘發(fā)癌變的病理過(guò)程中起關(guān)鍵作用[6-8]，其在正常腸黏膜一般不表達(dá)或低表達(dá)，當(dāng)受到炎癥介質(zhì)、內(nèi)毒素、細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子等刺激時(shí)，表達(dá)迅速上調(diào)，催化AA合成多種過(guò)量的前列腺素(PG)類物質(zhì)。PGE2為其中的主要產(chǎn)物，是一種重要的炎癥因子，可使血管通透性增加，造成組織水腫；趨化白細(xì)胞，導(dǎo)致炎細(xì)胞浸潤(rùn)，引起結(jié)腸黏膜炎癥、組織損傷，從而形成潰瘍[9]；還可誘導(dǎo)細(xì)胞增殖，促進(jìn)細(xì)胞黏附，抑制具有免疫調(diào)節(jié)功能的淋巴因子的產(chǎn)生，抑制T細(xì)胞和B細(xì)胞增殖[10]，造成免疫損傷?，F(xiàn)代藥理研究表明，泄?jié)峤舛痉街恤~(yú)腥草含魚(yú)腥草素、揮發(fā)油、蕺菜堿、槲皮苷、氯化鉀等，具有提高機(jī)體免疫力、抗炎、抗病毒及抗腫瘤作用[11]。車前子具有抗病原微生物作用[12]，體外抑菌實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，對(duì)同心性毛癬菌、星形奴卡菌等有不同程度的抑制作用，且金黃色葡萄球菌對(duì)其高度敏感，醇提取物可殺滅鉤端螺旋體；車前子多糖能恢復(fù)、提高及改善機(jī)體免疫功能[13]。敗醬草對(duì)多種感染性疾病有療效，可用于治療消化道炎癥；敗醬草總環(huán)烯醚萜苷元可顯著提高小鼠胸腺指數(shù)和脾指數(shù)，增強(qiáng)免疫功能，其提取物還具有止血作用[14]。黃連對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞中COX-2轉(zhuǎn)錄活性有抑制作用，抗菌作用強(qiáng)，亦可通過(guò)抗炎作用發(fā)揮抗腹瀉作用[15]。黃芩主要含黃芩甙、黃芩素，抗菌譜較廣，對(duì)多種細(xì)菌、皮膚真菌、鉤端螺旋體等都有抑制作用；黃芩黃酮具抗癌作用；黃芩提取物黃芩甙元可抑制COX-2活性和蛋白表達(dá)[16-17]；黃芩還具有退熱、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫平衡及腸道微生態(tài)平衡失調(diào)的作用[18]，從而更好地加強(qiáng)止血作用。大血藤可抗菌、 抗氧化、抗腫瘤，水提取物能顯著抑制小鼠腸蠕動(dòng)速度[19]。半夏含揮發(fā)油、多糖、半夏蛋白，具抗癌、凝血作用，半夏蛋白也是一種植物凝集素，對(duì)紅細(xì)胞有凝集作用[20]。薏苡仁含有多種活性成分，有抗腫瘤、增強(qiáng)機(jī)體免疫功能及鎮(zhèn)痛消炎作用[21]。木香具有免疫調(diào)節(jié)、抗?jié)?、抗炎、解痙、鎮(zhèn)痛及抑制小鼠腸蠕動(dòng)的作用[22]。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與空白組相比，COX-2及PGE2在CUC大鼠結(jié)腸黏膜中的表達(dá)均明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。經(jīng)泄?jié)峤舛痉街委熀螅珻OX-2及PGE2表達(dá)水平均顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，以泄?jié)峤舛痉礁邉┝拷M差異最明顯，提示其治療CUC的作用機(jī)制可能是：通過(guò)降低COX-2的表達(dá)，減弱對(duì)AA的催化作用，減少其下游炎癥介質(zhì)PGE2的生成，從而控制CUC炎癥反應(yīng)過(guò)程。

參考文獻(xiàn)

[1]Hanauer SB.Inflammatory bowel disease：epidemiology，pathogenesis，and therapeutic opportunities[J]. Inflamm Bowel Dis 2006，12(suppl 1)：S3-9.

[2]江學(xué)良，權(quán)啟鎮(zhèn)，王東復(fù)，等.復(fù)合法建立大鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型[J].青海醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1999，20 (4)：1-3.

[3]鄭禮，高振強(qiáng)，王淑仙.大鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，1998，14(4)：370-372.

[4]Xu G，Tian KL，Liu GP，et al.Clinical significance of plasma D-dimer and von Willebrand factor levels in patients with ulcer colitis [J].World J Gastroenterol，2002，8(3)：575-576.

[5]Kirsner JB.Historical origins of current IBD concepts[J].World J Gastroenterol，2001，7(2)：175-184.

[6]馬曉芃，桑小寧，吳煥淦，等.針灸對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠腸黏膜形態(tài)學(xué)及GH IGF-I表達(dá)的影響[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2007，25(7)：1362-1364.

[7]Taketo MM.Cyclooxygenase-2 inhibitors in tumorigenesis (Part Ⅱ) [J].J Natl Cancer Inst，1998，90(21)：1609-1620.

[8]Singer II，Kawka DW，Schloemann S，et al. Cyclooxygenase 2 is induced in colonic epithelial cells in inflammatory bowel disease[J].Gastroenterology，1998，115(2)：297-306.

[9]呂根法，張文惠.前列腺素E2抑制T細(xì)胞活化的機(jī)制[J].免疫學(xué)雜志，2002，18(S)：S224-226.

[10]Yang H，Chen C.Cyelooxygenase-2insynaptie signaling[J].Curt Pharm Des，2008，14(14)：1443-1451.

[11]張明露.魚(yú)腥草的藥理作用以及栽培技術(shù)文獻(xiàn)綜述[J].農(nóng)技服務(wù)，2012，29(1)：88-89.

[12]文建軍，賈少謙.車前子的藥理研究及臨床新用[J].中國(guó)醫(yī)藥指南，2007，9(S1)：41-42.

[13]王東，袁昌魯，林力，等.車前子多糖對(duì)小腸運(yùn)動(dòng)障礙小鼠的影響[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2008，26( 6)：1188-1189.

[14]萬(wàn)新，石晉麗，劉勇，等.敗醬屬植物化學(xué)成分與藥理作用[J].國(guó)外醫(yī)藥：植物藥分冊(cè)，2006，21(2)：53-54.

[15]代國(guó)友，潘曉鷗，羅紅霞.黃連的藥理研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥房，2004，15(11)：694-696.

[16]高燕，顧振倫，蔣小崗，等.黃芩素藥理學(xué)研究新進(jìn)展[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2010，21(7)：1765-1767.

[17]朱偉，孫紅光，朱迅.黃芩苷元對(duì)炎癥反應(yīng)的影響[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2009，25(2)：194-197.

[18]鐘秀會(huì)，周占祥，孫秉貴，等.黃芩白術(shù)對(duì)LPS誘導(dǎo)流產(chǎn)小鼠的保胎作用及子宮內(nèi)TNF-α含量的影響[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2000，31(5)：430-435.

[19]趙秀梅，柯洪琴，于慧斌.大血藤藥理作用與臨床應(yīng)用研究進(jìn)展[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2014，20(11)：41-43.

[20]張小團(tuán)，嚴(yán)靜，高鴻，等.半夏蛋白的提取工藝及其凝集素的抑菌研究[J].西南師范大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2015，40(6)：43-48.

[21]胡少華，肖小年，易醒.薏苡仁的研究新進(jìn)展[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2009，20(5)：1059-1060.

[22]王永兵，王強(qiáng)，毛福林，等.木香的藥效學(xué)研究[J].中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2001，32(2):146-148.

(本文編輯：曹志娟)

·信息·

醫(yī)療氣功令國(guó)際友人著迷

在地處北戴河的河北省醫(yī)療氣功醫(yī)院，每到夏季幾乎天天都可以看到國(guó)際友人在該院氣功師的引領(lǐng)下，認(rèn)真地學(xué)習(xí)醫(yī)療氣功。近年來(lái)，醫(yī)療氣功越來(lái)越受到國(guó)際友人的歡迎。河北省醫(yī)療氣功醫(yī)院作為醫(yī)療氣功的教學(xué)和傳播基地，每年都吸引許多國(guó)際友人前來(lái)學(xué)藝。

法國(guó)巴黎“東方文化傳播中心”從1994年至今，每年都派人到河北省醫(yī)療氣功醫(yī)院進(jìn)行醫(yī)療氣功培訓(xùn)和交流。內(nèi)養(yǎng)功作為醫(yī)療氣功的代表功法，已經(jīng)成為該傳播中心三年制氣功學(xué)校的必修課程。

近20年來(lái)，河北省醫(yī)療氣功醫(yī)院副院長(zhǎng)劉亞非還10余次應(yīng)邀赴法國(guó)進(jìn)行醫(yī)療氣功學(xué)術(shù)交流及太極拳傳授，從而使更多的法國(guó)友人進(jìn)一步了解了中國(guó)醫(yī)療氣功博大精深的理論體系，體會(huì)到了運(yùn)用中醫(yī)氣功辨證施治的實(shí)踐效果，從而提升了醫(yī)療氣功在海外的影響力。

1河北省直屬機(jī)關(guān)第二門診部中西醫(yī)結(jié)合科，河北石家莊050051

2河北醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)院，河北石家莊050071

Study of Xiezhuo-jiedu formula on Cycloxygenase-2 and prostaglandin E2of intestinal mucosa in chronic nonspecific ulcerative colitis ratsLIUJianping*,LILingling,LANGXiaomeng,etal.*FirstDepartmentofSpleenandStomachDisease,HospitalofTraditionalChineseMedicineinHebeiProvince,Hebei,Shijiazhuang050011

【Abstract】ObjectiveTo observe the effect and possible mechanism of Xiezhuo-jiedu formula on the expression of cycloxygenase-2 (COX-2) and prostaglandin E2(PGE2) in colon tissues of chronic nonspecific ulcerative colitis rats. MethodsAfter 40 experimental rats were allowed to acclimate for 1 week,these rats were randomly divided into blank group, model group, salazosulfapyridine group, Xiezhuo-jiedu high-dose group and Xiezhuo-jiedu low-dose group, 8 rats in each group. Expect blank group, rats in other four groups were constructed in chronic nonspecific ulcerative colitis model through trinitrobenzene sulfonic acid (TNBS) combined ethanol mode method. Five days after modeling, rats in blank and model group were received 0.9% sodium chloride injection (5 mL) by gavage, rats in salazosulfapyridine group were received salazosulfapyridine suspension (0.3 g/kg) by gavage. Rats in Xiezhuo-jiedu high-dose and low-dose group were received Xiezhuo-jiedu formula at a dose of 20.0 g/kg and 10.0 g/kg respectively. All rats were administered once a day continuously for 14 d. The expression of COX-2 and PGE2in colon tissues was detected by immunohistochemical method after administration. Results The expression of COX-2 and PGE2of colon tissnes in model group was obviously higher than that in blank group (P<0.05). As compared with model group, the expression of COX-2 and PGE2in Xiezhuo-jiedu high-dose, Xiezhuo-jiedu low-dose and salazosulfapyridine group were obviously decreased (P<0.05), and the decrease in Xiezhuo-jiedu high-dose group was obviously lower than that in salazosulfapyridine group (P<0.05). Conclusion Xiezhuo-jiedu formula has satisfactory treatment effect in chronic nonspecific ulcerative colitis rats. Its mechanism may be involved to suppress the expression of COX-2 and reduce PGE2generation.

【Key words】Colitis; Ulcerative; Rat; Antidote; Traditional Chinese medicine; Animal experiment; PGE2

(收稿日期：2014-12-31)

作者簡(jiǎn)介：劉建平(1963—)，女，主任中醫(yī)師，教授，博士，碩士研究生導(dǎo)師。研究方向：中醫(yī)內(nèi)科脾胃病學(xué)。

通訊作者：△河北省中醫(yī)院脾胃病二科，河北石家莊050011

【中圖分類號(hào)】R574.621；R285.5；R286.93

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

【文章編號(hào)】1002-2619(2015)12-1832-04

doi:10.3969/j.issn.1002-2619.2015.12.022