郭全海，趙耀光（商丘職業(yè)技術(shù)學(xué)院動(dòng)物工程系，河南商丘476000）

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接種不同數(shù)量柔嫩艾美耳球蟲卵囊對(duì)雛雞的致病作用

郭全海，趙耀光
（商丘職業(yè)技術(shù)學(xué)院動(dòng)物工程系，河南商丘476000）

摘 要：以15日齡羅曼蛋雛為對(duì)象，研究接種不同劑量柔嫩艾美球耳蟲（E.tenella）卵囊對(duì)雛雞的致病作用。試驗(yàn)共設(shè)4個(gè)組，其中3個(gè)球蟲卵囊感染組和1個(gè)非感染對(duì)照組，球蟲感染組雞只分別接種E.tenella孢子化卵囊1×104、5×104、8×104個(gè)/只。結(jié)果顯示，感染1×104、5×104、8×104個(gè)/只組的平均血便記分分別為0.750、1.825、2.500，致死率分別為10%、30%、60%，盲腸病變值分別為13.0、22.0、28.0，平均增重率分別為75%、56%、49%。試驗(yàn)表明，E.tenella卵囊具有很強(qiáng)的感染性，致病作用與其數(shù)量有關(guān)。

關(guān)鍵詞：柔嫩艾美耳球蟲卵囊；增重率；致死率；血便記分

雞球蟲病是由艾美耳屬（Eimeria）球蟲寄生于雞腸道上皮細(xì)胞引起的消化道寄生蟲病，主要侵害和破壞的是雞的盲腸部位［1］。它是一種嚴(yán)重威脅養(yǎng)雞業(yè)的常見病，對(duì)雛雞危害很大，輕則造成雞只的生長受阻，發(fā)育遲緩，生產(chǎn)性能下降；重則造成雞只的大批死亡，尤其是雛雞階級(jí)，以15日齡～50日齡的雛雞發(fā)病率為最高［2］，發(fā)病率可達(dá)50%～70%，病死率可高達(dá)80%，給養(yǎng)殖生產(chǎn)帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失［3-6］，全世界每年由雞球蟲病造成的損失達(dá)數(shù)10億美元［7］。柔嫩艾美耳球蟲是目前發(fā)現(xiàn)的9種中致病力最強(qiáng)的一種，而其卵囊也有較強(qiáng)的感染性［8］。不同數(shù)量的球蟲卵囊感染雞只的致病強(qiáng)度不相同，因而在研究中卵囊的接種劑量十分關(guān)鍵。為了能夠比較準(zhǔn)確地把握卵囊的接種劑量，進(jìn)而可用來評(píng)價(jià)藥物的抗球蟲效果，本試驗(yàn)接種不同劑量卵囊對(duì)雞致病作用進(jìn)行研究。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1試驗(yàn)用動(dòng)物 120只1日齡羅曼蛋用健康雛雞購自開封正大種雞場(chǎng)，分籠飼養(yǎng)于經(jīng)嚴(yán)格消毒的籠舍中，按NRC（1994）禽的營養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)［9］，自配無抗球蟲藥飼料和抗菌藥物的飼料，雞只自由采食、飲水。

1.1.2球蟲卵囊 純種柔嫩艾美耳球蟲（E.tenella）卵囊由商丘市畜牧局動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心提供。試驗(yàn)前人工感染無球蟲雞繼代1次，獲得試驗(yàn)用卵囊，29℃孢子化，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.3試劑及儀器 重鉻酸鉀（K2Cr2O7）、離心沉淀機(jī)為上海通用分析儀器廠產(chǎn)品；恒溫振蕩器為常州恒睿儀器設(shè)備廠產(chǎn)品；電冰箱為青島海爾公司產(chǎn)品；顯微鏡為上海光學(xué)儀器廠產(chǎn)品；60目銅篩、玻璃棒、燒杯、滴管及三角燒瓶等。

1.2方法

1.2.1試驗(yàn)分組及處理 13日齡時(shí)，選擇80只體重相近的健康雞只，并做糞便化驗(yàn)確定未感染球蟲，隨機(jī)分為4組，每組20只。其中前3組為感染組，分別標(biāo)記為Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組；第4組為非感染對(duì)照組，標(biāo)記為Ⅳ組。15日齡時(shí)，Ⅰ組、Ⅱ組及Ⅲ組雞只每只分別接種E.tenella孢子化卵囊1×104、5× 104、8×104個(gè)，Ⅳ組不接種卵囊。接種球蟲后每天稱重，觀察和記錄各組雞的發(fā)病情況、臨床癥狀。感染后第4天開始每天檢查糞便，記錄血糞情況，同時(shí)進(jìn)行克糞卵囊計(jì)數(shù)，第8天時(shí)剖檢所有試驗(yàn)雞，統(tǒng)計(jì)增重率、致死率及病變值［10］。

1.2.2判定標(biāo)準(zhǔn)

1.2.2.1相對(duì)增重率 相對(duì)增重率（%）=（感染組的平均增重/不感染組的平均增重）×100%

1.2.2.2致死率 致死率=（因球蟲感染死亡雞只數(shù)/組內(nèi)總雞數(shù)）×100%

1.2.2.3血便記分 接種攻毒卵囊后第4天至第8天，參照Morehouse（1970）［11］的方法，按以下標(biāo)準(zhǔn)記分。0分：100%糞便不帶血；1分：1%～25%糞便帶血；2分：26%～50%糞便帶血；3分：51%～75%糞便帶血；4分：76%～100%糞便帶血。

1.2.2.4病變記分 參照J(rèn)ohnson和Reid （1970）［12］的標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)剖檢后腸道病變的嚴(yán)重程度記分。0分：無肉眼病變；1分：盲腸壁有很少散在的瘀血點(diǎn)，腸壁不增厚，內(nèi)容物正常；2分：病變數(shù)量較多，盲腸內(nèi)容物明顯帶血，盲腸壁稍增厚，內(nèi)容物正常；3分：盲腸內(nèi)有多量血液和腸芯，血凝塊可見灰白色干酪樣的香蕉型塊狀物，盲腸壁明顯增厚，盲腸中糞便含量少；4分：盲腸中充滿大量的血液和腸芯，盲腸腫大，腸芯中含有糞渣或不含，因球蟲感染死亡雞也記為4分。

1.2.2.5卵囊排出情況 按照McMaster's法計(jì)算克糞便卵囊數(shù)（oocyst per gram，OPG），在攻毒后的第4天至第8天收集糞便，將收集到的糞便攪勻后，稱取2g，加適量飽和食鹽水?dāng)噭颍?0目網(wǎng)篩充分過濾。將濾液稀釋至60mL，然后用麥?zhǔn)嫌?jì)數(shù)板記數(shù)，最后求其平均值。如果卵囊的數(shù)量太多，則按照梯度稀釋，然后計(jì)數(shù)，再乘以稀釋倍數(shù)。

2　結(jié)果

2.1接種不同數(shù)量E.tenella卵囊對(duì)雛雞發(fā)病情況的影響

在整個(gè)試驗(yàn)中，非感染對(duì)照組精神狀態(tài)、采食和飲水均正常。卵囊接種后第4天，Ⅱ組及Ⅲ組的雞開始拉出水樣稀糞，下午即有血便排出。卵囊接種后第5天和第6天，接種Ⅱ組及Ⅲ組的雞只表現(xiàn)出精神狀況差、沉郁、嗜睡、畏寒扎堆、翅膀下垂、消瘦、采食量減少或食欲廢絕等嚴(yán)重癥狀，排出大量帶黏液性血便，并出現(xiàn)死亡，而接種Ⅰ組雞只的精神狀態(tài)相對(duì)接種Ⅱ組及Ⅲ組要好。在接種后的第4天，感染E.tenella卵囊Ⅱ組和Ⅲ組雞只開始排出血便，血便記分為1；第5天接種Ⅰ組雞只也開始出現(xiàn)血便，血便記分為1；接種Ⅱ組雞只血便記分為2，接種Ⅲ組的雞只血便記分達(dá)到了3。第6天感染各組的血便記分達(dá)到最大，到第7天，接種Ⅰ組和Ⅱ組血便記分分別下降到0和1，而接種Ⅲ組血便記分仍然保持在3。接種E.tenella卵囊雞只的平均血便記分以Ⅲ組雞只最高，達(dá)到了2.500，而接種Ⅰ組的平均血便記分最低，僅為0.750（表1）。

表1　各組試驗(yàn)雞血便記分結(jié)果Table 1 The bloody feces scores in experimental chicks after E.tenellainoculation

2.2雛雞接種E.tenella卵囊后每克糞便中卵囊數(shù)量

接種球蟲后第5天，卵囊開始從糞便中排出，第6天達(dá)到高峰，第7天和第8天開始下降。在卵囊排出量上和接種球蟲的數(shù)量并不成正相關(guān)的關(guān)系，其中接種Ⅰ組雞只排出的卵囊數(shù)最高，第6天時(shí)排出的糞便卵囊數(shù)量達(dá)到0.813×106個(gè)/g，而接種Ⅲ組的雞只排出的卵囊數(shù)最低，僅僅為0.689×106個(gè)/g（表2）。

表2　雛雞接種球蟲卵囊后每克糞便中卵囊數(shù)量Table 2 The number of oocysts per gram feces（OPG）in experimental chicks after E.tenellainoculation OPG，×106/g

2.3不同數(shù)量E.tenella卵囊接種對(duì)雛雞平均增重和盲腸病變的影響

接種E.tenella卵囊的雞只的生長嚴(yán)重受阻，平均增重顯著低于不感染對(duì)照組（88.60g），其中，Ⅲ組平均增重最低，僅僅為42.98g，相對(duì)增重率為49%，其次為Ⅱ組和Ⅰ組雞只，從剖檢雞只的盲腸病變程度可以看出：Ⅲ組的盲腸病變嚴(yán)重，盲腸病變值達(dá)到了28.0。感染Ⅰ組盲腸病變值在攻毒組中最低為13.0，而Ⅱ組盲腸病變值介于兩者之間，為22.0（表3）。

表3　接種不同劑量E.tenella卵囊對(duì)雛雞平均增重和盲腸病變記分的影響Table 3 Effects of inoculation with different doses of E.tenellaoocysts on the weight gain and cecal lesion score in experimental chicks

2.4接種不同數(shù)量E.tenella卵囊對(duì)雛雞致死率的影響

由表4可以看出，3個(gè)劑量的球蟲卵囊感染后均有雞只死亡，其中以感染E.tenella卵囊最多的Ⅲ組致死率最高，達(dá)到60%。隨著接種劑量降低，球蟲感染雞的致死率降低，接種最少卵囊的低劑量Ⅰ組致死率僅僅為10%。試驗(yàn)結(jié)果還表明雞只感染球蟲后死亡高峰為感染后第5天和第6天，到第7天致死率開始下降，到第8天后不再有雞只死亡。

表4　接種不同劑量E.tenella卵囊對(duì)雛雞致死率的影響Table 4 Effects of inoculation with different doses of E.tenellaoocysts on mortality in experimental chicks

3　討論

雞柔嫩艾美耳球蟲為腸道性寄生蟲，主要引起盲腸上皮細(xì)胞破裂，腸道出血，盲腸組織病理性損傷。在試驗(yàn)中，雛雞感染1×104、5×104、8×104個(gè)孢子化卵囊均能引起不同程度的臨床癥狀，其中以接種5×104個(gè)/只、8×104個(gè)/只的劑量組的癥狀較為嚴(yán)重。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)球蟲感染雞的血便記分以第5天和第6天最高，這是因?yàn)榍蛳x進(jìn)行了第2代裂體生殖，破壞大量的腸上皮細(xì)胞所致。同時(shí)，感染球蟲后的第5天和第6天雞只的致死率也是最高的，其中以接種劑量為8×104個(gè)/只組的致死率最高，達(dá)到60%，低劑量卵囊接種組的致死率最低，僅為10%?？梢娗蛳x感染引起腸上皮細(xì)胞大量破壞，脫落，消化代謝紊亂，雞只食欲降低，甚至廢絕，自體中毒而死亡。

試驗(yàn)結(jié)果還表明，接種高劑量的球蟲孢子化卵囊對(duì)盲腸病變的損傷，大于接種劑量低的組，因此接種低劑量卵囊組的病變記分最低。但是在卵囊排出量上，試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)接種球蟲的糞便排出卵囊數(shù)量并不成正相關(guān)的關(guān)系，其中接種1×104個(gè)/只卵囊組排出的卵囊數(shù)最高，第6天時(shí)排出的糞便卵囊數(shù)量達(dá)到0.812×106個(gè)/克，而接種8×104個(gè)/只卵囊組排出的卵囊數(shù)最低，僅僅為0.688×106個(gè)/克?？赡苁墙臃N卵囊的量太大，出現(xiàn)了“擁擠”效應(yīng)［8］，球蟲在雞只盲腸內(nèi)相互影響生長，所以高劑量接種E. tenella卵囊，雞只的死亡率和盲腸病變率高，但盲腸內(nèi)容物中的克卵囊數(shù)和卵囊排出量低。與對(duì)照組相比，感染雞增重率不高，可能球蟲損傷腸道后，引起雞體強(qiáng)烈的應(yīng)答反應(yīng)所致［13］。

綜合考慮，我們認(rèn)為感染E.tenella卵囊5× 104個(gè)/只的試驗(yàn)組，致死率為30%，血便記分1.825、卵囊排出量0.769×10、盲腸病變值22.0，可以選擇作為球蟲藥物療效試驗(yàn)研究的接種劑量，也可為此類試驗(yàn)提供有價(jià)值的參考依據(jù)。

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Study on Pathogenicity of Inoculation with Different Number of E.tenella Oocysts in Chicks

GUO Quan-hai，ZHAO Yao-guang
（Animal Engineering Department，Shangqiu Polytechnical College，Shangqiu，Henan，476000，China）

Abstract：The experiment studied on pathogenicity of inoculation with different number of E.tenella oocysts in 15days old Roman chicks.The test consisted of 4groups：the 3 E.tenella oocyst infected groups and 1control group，E.tenella oocysts were inoculated respectively with 1×104，5×104，8×104in each chicks for infected one.The results showed average bloody feces scores were 0.750，1.825，2.500；mortality were 10%，30%，60%，cecal lesion values were：13，22，28；average weight gain rates were 75%，56%，49%，respectively in three infected groups.The conclusion showed that E.tenella oocysts had very strong infectivity，and pathogenicity was relevant to its number.

Key words：E.tenellaoocyst；weight gain rate；mortality；bloody feces score

作者簡介：郭全海（1980-），男，河南淮陽人，講師，碩士，主要從事分子生物學(xué)、免疫學(xué)及動(dòng)物疫病防治等研究。

基金項(xiàng)目：商丘市科技計(jì)劃項(xiàng)目（20122023）

收稿日期：2015-01-07

中圖分類號(hào)：S852.723

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1007-5038（2015）07-0074-04