羅晚媛 唐瑩 何本夫

血漿EBV-DNA表達(dá)水平與鼻咽癌分期的相關(guān)性分析

羅晚媛 唐瑩 何本夫

目的研究血漿EBV-DNA表達(dá)水平與鼻咽癌分期的相關(guān)性。方法選擇了55例鼻咽癌患者，同時(shí)選取同期住院治療的55例其他類型的腫瘤患者作為其他類腫瘤對(duì)照組及55例體檢健康者為健康對(duì)照組，比較分析鼻咽癌組與對(duì)照組患者的血漿EBV-DNA陽性檢出情況，鼻咽癌組患者與對(duì)照組血漿EBV-DNA濃度及血漿EBV-DNA陽性的鼻咽患者早期和晚期的拷貝數(shù)。結(jié)果鼻咽癌組血漿EBV-DNA檢出陽性率為72．7%，明顯高于其他類腫瘤對(duì)照組的陽性率(23．7%)以及健康對(duì)照組(10．9%)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)的意義(P＜0．05)。鼻咽癌組患者的血漿EBV-DNA濃度較高，達(dá)到了13654．5 copies/mL，而其他類腫瘤對(duì)照組及健康對(duì)照組的血漿EBV-DNA濃度均為0，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)的意義(P＜0．05)。觀察還發(fā)現(xiàn)血漿EBV-DNA陽性的鼻咽患者晚期血漿EBV-DNA拷貝數(shù)較高，達(dá)到了(201．48±176．19)，明顯高于早期的血漿EBV-DNA拷貝數(shù)(9．60±10．77)，兩組數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)的意義(t=4．3312，P=0．0001)。結(jié)論熒光定量的PCR檢測血漿EBV-DNA是1種比較可靠的方法，能夠有效診斷鼻咽癌，且血漿EBV-DNA與鼻咽癌的分期關(guān)系密切，該方法適合廣泛地推廣。

血漿;EBV-DNA;鼻咽癌分期

(The Practical Journal of Cancer，2015，30:1116～1118)

鼻咽癌是多發(fā)于我國南方的一種惡性腫瘤，地域的特征比較典型，多分布于廣西廣東及福建省等地［1］。一部分的患者常發(fā)病隱匿，等到顯露癥狀時(shí)多為晚期，嚴(yán)重的影響生活質(zhì)量，且在臨床上的治療較棘手，預(yù)后也極差，因此有必要對(duì)病癥進(jìn)行準(zhǔn)確有效的診斷及監(jiān)測［2］。相關(guān)的資料顯示，鼻咽癌和EB病毒之間存在密切的關(guān)系，鼻咽癌的患者血漿/血清中能夠檢測出腫瘤的源性EB病毒的DNA即EBV-DNA［3］。EB病毒(EBV)目前會(huì)使傳染性的單核細(xì)胞出現(xiàn)增多的癥狀，為嗜B淋巴的細(xì)胞中的病毒成員，據(jù)資料顯示，EBV和人類目前的多種惡性腫瘤均存在相關(guān)性，尤其和鼻咽癌有著密切的關(guān)系，患者外周血的EBV-DNA所處水平和病灶殘留、復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移等均有顯著的關(guān)系［4］。近年來隨著定量PCR的技術(shù)發(fā)展，檢測血漿中EB-DNA也引起了學(xué)者的注意［5］。為此，我院對(duì)接受的鼻咽癌患者進(jìn)行EBV-DNA表達(dá)水平與鼻咽癌分期的相關(guān)性進(jìn)行研究，取得了不錯(cuò)的效果，具體如下。

1 資料與方法

1．1 臨床資料

本次研究中選擇了自2013年11月至2014年11月在我院接受治療的55例鼻咽癌的患者，全部患者均經(jīng)鼻咽活檢病理檢查證實(shí)。本次研究是在患者的知情下實(shí)施，并經(jīng)我院倫理委員會(huì)的認(rèn)可。鼻咽癌組中39例男性患者，16例女性患者，年齡為19～66歲，平均年齡為(41．0±5．4)歲，病理類型:3例泡狀核癌，4例中分化鱗癌及48例低分化鱗癌。臨床分期:10例Ⅰ期，15例Ⅱ期，20例Ⅲ期，10例Ⅳ期。同時(shí)選取同期住院治療的55例其他類型的腫瘤患者作為其他類腫瘤對(duì)照組，其中40例男性，15例女性，年齡為20～69歲，平均(42．9±4．7)歲;20例肺癌，13例胃癌，11例乳腺癌，7例淋巴癌及4例直腸癌。再選取55例體檢健康者為健康對(duì)照組，其中40例男性，15例女性，年齡為20～64歲，平均年齡為(40．1±4．9)歲，各個(gè)方面檢查均為正常者，見表1。

表1 三組研究對(duì)象的基本資料比較分析/例

1．2 方法

抽取所有研究對(duì)象3 mL血加入EDTA的抗凝管中，經(jīng)過1 600 g離心后，將上層的血漿進(jìn)行分離，取出50 μL的血漿置于-20℃中凍存，使用Qiagen(德國)生產(chǎn)的試劑盒，按照說明書提示對(duì)血漿的DNA進(jìn)行提取。采用熒光定量的PCR法對(duì)血漿EBV-DNA進(jìn)行檢測，EBV基因的擴(kuò)增試劑盒是由中山大學(xué)的達(dá)安診斷中心所提供，設(shè)備為Roche公司(德國)生產(chǎn)出Light-CyclerII型熒光定量的PCR儀，具體的檢測方法按照說明書來操作。

1．3 評(píng)價(jià)方法

計(jì)算血漿中的EBV-DNA:C=Qx(1/Vcxt)× (VDNA/VPCR)，其中C是待測血漿中EBV-DNA濃度(mL-1)，Q是PCR進(jìn)行擴(kuò)增后由計(jì)算機(jī)所檢測出原始DNA的拷貝數(shù)，VDNA抽提后所得DNA的稀釋液的體積，VPCR是用來PCR擴(kuò)增后DNA的體積，Vcxt是抽提DNA時(shí)用到的血漿體積。檢測的極限是0 mL-1，≥0 mL-1為陽性［6］。

1．4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2．1 鼻咽癌組與對(duì)照組患者血漿EBV-DNA陽性檢出情況

觀察發(fā)現(xiàn)，鼻咽癌組患者血漿EBV-DNA檢出陽性率為72．7%，明顯高于其他類腫瘤對(duì)照組的陽性率(23．7%)及健康對(duì)照組陽性率(10．9%)，對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)的意義(P＜0．05)。

2．2 鼻咽癌組與對(duì)照組血漿EBV-DNA濃度比較分析(表2)

觀察發(fā)現(xiàn)鼻咽癌組患者的血漿EBV-DNA濃度較高，達(dá)到了13654．5 copies/mL，而其他類腫瘤對(duì)照組及健康對(duì)照組的血漿EBV-DNA濃度均為0 copies/ mL，進(jìn)行比較，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05)。

表2 鼻咽癌組患者與對(duì)照組血漿EBV-DNA濃度的比較分析(copies/mL)

2．3 血漿EBV-DNA陽性的鼻咽患者早期和晚期的拷貝數(shù)比較分析

觀察發(fā)現(xiàn)血漿EBV-DNA陽性的鼻咽患者晚期的血漿EBV-DNA拷貝數(shù)較高，達(dá)到了(201．48± 176．19)，明顯高于早期的血漿EBV-DNA拷貝數(shù)(9．60±10．77)，對(duì)兩組數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=4．3312，P=0．0001)。

3 討論

鼻咽癌為發(fā)生在鼻咽腔的頂部及側(cè)壁處的1種惡性腫瘤，是正常上皮組織經(jīng)過分化而產(chǎn)生的［7］。該疾病的發(fā)病與環(huán)境的因素、遺傳的易感性、飲食的習(xí)慣及EB病毒的感染等多種因素均有關(guān)系，不過與EB病毒間相關(guān)性更大［8］。目前我國NPC的發(fā)病率約占全世界的80%，因?yàn)榻馄实奈恢幂^為特殊，往往不能夠通過手術(shù)進(jìn)行切除治療，對(duì)患者的生活和生理上帶來了不利的影響，且易局部復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移致使患者死亡，給患

者的生命危險(xiǎn)帶來了威脅［9］。

當(dāng)前，診斷NPC、病情的進(jìn)展及預(yù)后可以通過影像學(xué)的檢查來完成，但是該檢查方法價(jià)格昂貴，且容易漏診［10］。資料又顯示在患者體內(nèi)能檢測出來多種的EB病毒抗體，抗體的指標(biāo)能幫助鼻咽癌患者的篩查及輔助的診斷［11］。但是曹素梅等人在對(duì)NPC的患者進(jìn)行放療治療中監(jiān)測發(fā)現(xiàn)，當(dāng)腫瘤開始縮小時(shí)，EBVDNA的水平出現(xiàn)迅速的下降，但抗體的水平卻無明顯的變化，顯示在對(duì)NPC患者的治療效果進(jìn)行監(jiān)測時(shí)，比EB病毒抗體有更好的效果［12］。

臨床上發(fā)現(xiàn)使用熒光定量的PCR技術(shù)來對(duì)NPC診斷及檢測具有不錯(cuò)的效果［13］。Tan等使用RT-PCR技術(shù)對(duì)游離的EBV-DNA片段進(jìn)行檢測發(fā)現(xiàn)，患有鼻咽癌的人所檢出的陽性率比正常的人群明顯要高，在鼻咽癌的患者中DNA定量達(dá)到2043 copies/mL，要高于正常人群的0 copies/mL，說明血漿EBV-DNA對(duì)于鼻咽癌的診斷具有價(jià)值［14］。在本次研究中，也發(fā)現(xiàn)在鼻咽癌患者中檢出的陽性率為72．7%，要高于其他類腫瘤患者的陽性率23．7及健康人群的陽性率10．9%。同時(shí)鼻咽癌患者的血EBV-DNA濃度較高，達(dá)到了13654．5 copies/mL，而其他類腫瘤患者及健康人群的血漿EBV-DNA濃度均為0 copies/mL，這與文獻(xiàn)內(nèi)容一致。

相關(guān)資料顯示，血漿EBV-DNA表達(dá)水平差異與鼻咽癌分期呈一定的相關(guān)性［15］。在本次研究也同樣發(fā)現(xiàn)血漿EBV-DNA拷貝數(shù)和鼻咽癌的分期有直接關(guān)系，患者晚期(Ⅲ、Ⅳ期)的血漿EBV-DNA拷貝數(shù)達(dá)到了201．48±176．19(×104拷貝/mL)，多于患者早期(Ⅰ、Ⅱ期)的血漿EBV-DNA拷貝數(shù)201．48±176．19 (×104拷貝/mL)。證明了在鼻咽癌的不同分期中，EBV-DNA的含量是有差異的，顯示出EBV-DNA的含量和患者體內(nèi)的腫瘤符合呈正相關(guān)，能夠用來評(píng)定療效及對(duì)病情進(jìn)行檢測。

總之，血漿EBV-DNA檢測是1種比較可靠的研究方法，能夠有效的診斷鼻咽癌，且血漿EBV-DNA的表達(dá)水平的差異與鼻咽癌的分期關(guān)系密切，檢測血漿EBV-DNA能夠幫助患者發(fā)現(xiàn)鼻咽癌疾病的危險(xiǎn)性。

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Correlation Analysis of Plasma EBV-DNA Expression and NPC Staging

LUO Wanyuan，TANG Ying，HE BenfuThe 421 Hospital of PLA，Guangzhou，510318

ObjectiveTo research the correlation between the expression level of plasma EBV-DNA and nasopharyngeal carcinoma(NPC)staging．Methods55 cases of NPC，55 cases of other types of cancer as tumor control group and 55 cases of healthy patients as healthy control group were selected，all patients were treated in our hospital at the same period．The positive rates and concentration of plasma EBV-DNA of the 3 groups，the plasma EBV-DNA copy number at early and last period of plasma EBV-DNA positive patients were compared and analyzed．ResultsThe positive rate of NPC group was 72．7%，which was significantly higher than of other types of tumors(23．7%)and healthy control group(10．9%)，there had statistical difference(P＜0．05)．The concentrations of plasma EBV-DNA in NPC patients reached13654．5 copies/mL，while that of other groups both were 0 copies/mL，there had statistical difference(P＜0．05)．Among the plasma EBV-DNA positive patients，the copies of plasma EBV-DNA at last period reached(201．48±176．19)，which was higher than at early period(9．60±10．77)，there had statistical difference(t=4．3312，P=0．0001)．ConclusionFluorescence quantitative PCR detection of plasma EBV-DNA is reliable，it can effectively diagnose NPC，and plasma EBV-DNA is closely related with NPC staging．It is worthy of promotion．

Plasma;EBV-DNA;Staging of nasopharyngeal carcinoma(NPC)

10．3969/j．issn．1001-5930．2015．08．003

R739．63

A

1001-5930(2015)08-1116-03

2015-03-29

2015-04-29)

(編輯:吳小紅)

廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目(編號(hào):2012B031800408)

510318解放軍四二一醫(yī)院

何本夫